反相高效液相色谱法测定迷迭香中鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的含量

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中图分类号：R282.71　文献标识码：B　文章编号：1006－1533(2009)10－0469－02

迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)系唇形科迷迭香属多年生草本植物，原产于欧洲及北非地中海沿岸，现在我国云南、湖南、四川、贵州等地也有种植。迷迭香是一种多用途的经济作物，从中可提取抗氧化剂、迷迭香精油和医药中间体。抗氧化剂是从迷迭香植物中提取得到的粉末状物质，主要成分是具有抗氧化功能的酚、酸、黄酮类成分，结构明确的活性成分有鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚等；迷迭香提取物具有高效、无毒的抗氧化效果，可广泛应用于食品、功能食品、香料、调味品和日用化工等行业中。笔者以反相高效液相色谱法(HPLC)测定迷迭香中鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的含量，重现性好，灵敏度高，操作简便，适用于迷迭香的质量控制。

1　仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪(美国)；AE 240电子天平(METrLER TOLEDO，上海)；RE 52－86A旋转蒸发仪(上海亚荣)。8批样品经中南大学药学院鉴定，均为唇形科迷迭香属植物迷迭香。甲醇为HPLC级，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。鼠尾草酚和鼠尾草酸对照品购自SIC-MA公司；熊果酸购自中国药品生物制品检定所。

2　实验方法与结果

2.1　色谱条件

色谱柱：Kromasil 100-5C18(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相：甲醇-0.2％磷酸溶液(82：18)；流速为1 mL/min；紫外检测器测定鼠尾草酚和鼠尾草酸检测波长：284 mm，测定熊果酸检测波长：210 nm。进样量10μL。

2.2　对照品溶液的制备

精密称取鼠尾草酚、鼠尾草酸对照品适量，加乙醇溶解，定容至25 mL量瓶中，其浓度分别为0.1和0.3 mg/mL，作为对照品混合贮备液。精密称取熊果酸对照品适量，加乙醇溶解，制成每1 mL含0.3 mg的溶液，作为熊果酸对照品溶液。

2.3　供试品溶液的制备

称取样品粉末0.5 g，精密称定，精密加入乙醇50 mL，称定重量，加热回流提取1 h，冷却，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4　供试品溶液系统适用性试验

按“2.3”项下制备供试品溶液。在上述色谱条件下测定，分别测得鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的相对保留时间分别为6.4、15.8和47.7 min，理论塔板数分别为11186、14350和15329，分离度均大于1.8，符合定量要求。

2.5　线性关系考察

分别精密吸取上述已配制的3种对照品贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 mL，加乙醇定容成10 mL，各进样10μL，记录色谱图，以浓度C(mg/mL)对峰面积A进行回归，得回归方程。

2.6　精密度试验

精密吸取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，测定其峰面积，计算RSD，鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸RSD分别为0.44％、0.31％和0.60％。

2.7　稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液10μL，每6 h左右进样1次，测定、记录峰面积，以峰面积计算RSD，鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸RSD分别为1.38％、1.10％和1.94％(n=6)。结果表明供试品溶液在室温条件下放置30 h比较稳定。

2.8　重复性试验

取同一批号样品粉末0.5 g，共6份，精密称定，按照“2.3”项下方法制备成供试品溶液，进样10μL，按外标法计算。测得迷迭香鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸平均含量分别为0.60％、2.41％和1.98％，RSD分别为1.26％、1.43％和1.77％(n=6)，该方法的重复性较好。

2.9　加样回收率试验

准确称取已钡4定含量的迷迭香粉末0.25 g，共9份，精密称定，分别置于50 mL量瓶中，每3份为1组，分别准确加入鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸对照品混合贮备液5.0、10.0、15.0 mL，按照“2.3”项下方法制备成供试品溶液。按上述色谱条件进行分析。3种浓度(高、中、低)的加样回收率结果见表2。

2.10　样品测定

按照“2.3”项下方法制备不同产地的供试品溶液，在上述色谱条件下测定，按外标法计算，结果列于表3。

3　讨论

1)根据所测成分的溶解性，本实验考察了用甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯等溶媒和超声、回流等提取方法。结果表明，以乙醇回流1 h的提取方式，提取出来的杂质较少，通过加样回收率试验验证该方法提取充分。

2)试验中，鼠尾草酚、鼠尾草酸含量测定的检测波长根据其各自的紫外最大吸收确定。熊果酸中无共轭体系，紫外吸收波长较短，熊果酸吸收峰在210 nm附近灵敏度较高，其他色谱峰干扰较小，分离最为理想，故试验选用210m作为熊果酸含量测定的检测波长。

3)试验用的高效液相色谱条件是在参考有关文献的基础上，经过优化、筛选而确定的。采用2％磷酸溶液一甲醇系统，基线平稳，峰形、分离效果较佳，3种成分的分离度均在1.80以上，达到基线分离，可以同时对3种成分准确定量。

4)不同产地的迷迭香，其3种成分的含量差异较大，通过综合考察这些成分的含量，能更科学地评价迷迭香的质量优劣。