川芎嗪对实验性脑血栓栓塞大鼠血浆磷脂酸的影响

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摘要：目的：观察川芎嗪(TMP)对大鼠脑血栓形成后血浆磷脂酸(PA)的影响。方法：采用颈内动脉直接插管注入凝血酶建立脑血栓形成大鼠模型，并预防性给予TMP，观察大鼠脑血栓形成后PA的水平。结果：实验验对照组血浆PA水平(10.51±0.73)μmol/L与正常对照组的(3.77±0.28)μmol/L相比有统计学意义(P＜0.05)，预防性给予TMP提前干预的川芎嗪组可以明显降低血浆PA水平，为(4.28±1.02)μmol/L与实验对照组比较有统计学意义(P＜0.05)，而生理盐水组与实验对照组相比无统计学意义。结论：大鼠急性脑血栓形成后血浆PA水平升高，预防性给予TMP可以抑制血浆PA水平的升高。

关键词：川芎嗪；大鼠；脑血栓形成；磷脂酸

中图分类号：R743.P 285.5　文献标识码：A　文章编号：1672－1349(2007)09－0846－02

脑血管病是神经系统的常见病与多发病，其致残率和致死率均较高，是目前人类疾病的三大致死病因之一，而脑卒中事件中80％为脑梗死。近年来的研究表明磷脂代谢的中间产物血浆磷脂酸(PA)和溶血磷脂酸(LPA)是重要的第二信使，在(心)脑疾病的发生过程中可能起重要作用。脑卒中时血浆中PA水平的增高与氧自由基的过度形成有关，PA水平的高低反映脑缺血缺氧的程度。目前针对PA的药物干预的实验报道尚比较缺乏，研究表明川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)具有活血、化瘀、理气功能，以及抗血小板聚集、扩张小血管和改善微循环的作用，临床上广泛用于治疗缺血性脑血管疾病，取得较好疗效。基于以上作用考虑川芎嗪是否有可能降低血浆PA的水平。本实验通过建立大鼠腑血栓形成模型，并预防性给予川芎嗪，观察大鼠脑血栓形成后PA的变化以及对PA的影响。

1　材料与方法

1．1　材　料

1．1．1　实验动物：健康Wistal大鼠30只，体重280 g－300 g，雌雄不限．由山西医科大学实验动物中心提供。

1．1．2　药品、试剂及仪器：盐酸川芎嗪注射液(2 mL含盐酸川芎嗪40 mg，齐齐哈尔第二制药厂)；血栓诱导剂凝血酶(500U，长春海王药业)，LPA测定套试剂(北京泰福仕科技开发有限公司)；其余普通试剂及仪器由山西医科大学研究生实验室提供。

1．2　方　法

1．2．1　大鼠脑血栓模型的建立，本实验动物模型，参照张兆岩等的方法并加以简化改进。术前禁饮食12 h，大鼠用1％戊巴比妥钠(30 mg/kg－40 mg/kg)腹腔注射麻醉后，仰卧位固定于手术台上，颈正中部纵向切开皮肤，切口约2.5cm，分离颈部肌肉，游离出右侧颈总动脉(CCA)，从CCA分叉处向上分离颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)。结扎ECA，然后向颅底方向分离ICA，在颅底处小心分离出翼腭动脉，并结扎其根部，仅保留ICA入颅底主干，结扎CCA，暂用2只微型动脉夹间隔一定距离夹闭ICA，在近心端CCA处用眼科剪剪一小口，插入导管(内已抽好血栓诱导剂凝血酶20 U加入生理盐水0.01 mL)固定后，移去近导管端血管夹，少量血液流入导管头端，放置约10min形成一小栓子，然后移去另一只血管夹，缓慢将此栓子和凝血酶注入ICA后，拔出导管，并将CCA切口处结扎，缝合切口；术后单笼饲养(假手术组手术操作过程同上，只是不注入血栓栓子和凝血酶，而仅注入等量生理盐水)。

1．2．2　实验分组：实验动物共30只，随机分为5组，每组6只。正常对照组；假手术组予以假手术，术后3 h，采血检测PA；实验对照组，参照上述方法建立模型，术后3 h采血检测PA，川芎嗪组，0.2 ml/kg养血清脑颗粒以生理盐水溶解，术前每日1次灌胃，连续7 d后建立模型，过程以后同实验对照组；生理盐水组实验前每日等量生理盐水腹腔注射7 d，其余过程同实验对照组。

1．2．3　血浆PA的测定：使用专用试剂及特殊过滤器，按照操作规程，经腹主动脉取全血约4 mL，置于加有专用抗凝剂的抗凝管中，4 000 r/mm离心10 min，准确吸取上清1 mL，抽提磷脂成分、浓缩、分离、过滤。最后加入显色剂于90℃水浴5 min，取出于室温放置35 min后经754紫外分光光度计测定吸光度(OD)值，单位用μmol/L表示。计算公式如下：

PA值=(OD观测值-OD对照值)×标准浓度30/(OD标准值-OD)对照值)

1．3　统计学处理：采用SPSS 10.0统计学软件进行统计处理，计量资料以均数±标准差(x±s)表示。组间比较用方差分析，两两比较用LSD法，P

2　结　果

假手术组PA水平为(3.31±0.44)μmmol/L，实验对照组血浆PA的水平呈现升高趋势，结果为(10.51±0.73)μmol/L，与正常对照组(3.77±0.28)μmoI/L相比，有统计学意义(P

3　讨　论

本研究结果表明：与正常列照组相比，大鼠脑血栓形成之后，实验列照组PA明显增高。在正常情况下，脑内自由基被内源性酶类迅速灭活。脑缺血后首先出现能量代谢障碍，短时间内ATP、磷酸肌酸(CP)、葡萄糖、糖原等均减少，乳酸明显增加。缺血时cAMP增加，cGMP减少，由于cAMP上升可导致磷脂酶(如磷脂酶A2，磷脂酶C，磷脂酶D和鞘磷脂酶等)激活，激活后的磷脂酶可以分解磷脂膜，生成多种脂质第二信使，如三磷酸肌醇(IP3)、二酰甘油(DAG)、PA等。PA是PLD作用的直接产物，在细胞激活状态下，PA能引起钙离子动员，激活或协同激活细胞内多种酶，如磷酸二酯酶(PDE)、蛋白激酶C(PKC)、还原型尼克酰胺腺膘呤二核昔酸磷酸(NADPH)氧化酶等。在此基础上PA产生各种细胞效应。因此PA的增高可能是由于缺血缺氧后，氧自由基大量释放，使磷脂酶活性增高磷脂膜受损所致。所以从理论上讲如果缺血始终得不到改善，氧自由基的释放得不到抑制，PA就一直释放，处于高水平状态。

川芎嗪组PA水平明显低于实验对照组，且有统计学意义(P＜0.05)。表明川芎嗪对PA具有一定的降低作用。现代药理研究证明，川芎嗪具有不同程度的抑制血小板聚集、抗血栓形成、抑制自由基连锁反应、扩张血管、改善微循环、提高机体耐缺氧能力等作用。

本实验亦观察到川芎嗪能降低血浆PA水平，表明川芎嗪在防治血栓形成中具有一定的作用。