适宜红掌叶柄不同组织培养阶段的培养基研究

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摘 要：本试验以MS作为基本培养基，添加不同种类、不同浓度的生长调节剂，寻求适宜于红掌叶柄各组织培养阶段的培养基。研究结果表明：在初代培养阶段，其适宜的诱导培养基为MS+6-BA2+2，4-D0.2；继代增殖阶段，以MS+6-BA2+ NAA0.2为培养基效果较好；生根阶段，最适宜的培养基为1/2MS+NAA0.2+活性炭0.2%。

关键词：红掌；叶柄外植体；组织培养；培养基

中图分类号：Q943.1 文献标识码：A

红掌为多年生常绿草本花卉，性喜温热多湿而又排水良好的环境，怕干旱和强光暴晒。原产于南美洲热带雨林潮湿、半阴的沟谷地带，通过引种改良和用光、温、水调节系统的大棚栽培，现在欧洲、亚洲、非洲皆有广泛栽培。其花朵独特，为佛焰苞，色泽鲜艳华丽，色彩丰富，是世界名贵花卉。切叶可作插花的配叶。红掌是重要的热带切花，佛焰花序，其佛焰花苞硕大，肥厚具蜡质，色泽有红、粉、白、绿、双色等。其色泽鲜艳，造形奇特，应用范围广，经济价值高，是目前全球发展快、需求量较大的高档热带切花和盆栽花卉。红掌还可以吸收空气中对人体有害的苯、三氯乙烯。近年来随着对红掌苗木数量和质量需求的不断提高，通过组织培养建立红掌无性繁殖体系是获取高质量和高数量苗木行之有效的途径。为此，我们以红掌叶柄为材料进行了其诱导、继代及生根组织培养阶段适宜培养基的研究，试图寻求适于红掌叶柄不同组培的最佳培养基。

1 材料与方法

1.1 供试材料

红掌叶柄。

1.2 外植体的制备

将外植体清洗干净，用75%的酒精洗涤约30s，无菌水冲洗，超净工作台上用0.1%升汞消毒10～15min，无菌水冲洗6次，无菌滤纸吸干后切成适宜的大小，接种于初代培养基中培养。

1.3 外植体培养

选择MS基本培养基，pH5.8，葡萄糖30mL，琼脂6g，1L培养基。附加BA浓度为1～3mg/L，2，4-D浓度为0.1～0.3mg/L，从中筛选出最佳的诱导培养基组合。各培养基组合及生长状况分别为：配方1MS+6-BA1+2，4-D0.1，无任何变化；配方2MS+6-BA2+2，4-D0.2，无污染，长势良好，有愈伤组织及不定芽出现；配方3MS+6-BA3+2，4-D0.3，愈伤组织疏松透明，颜色浅，水迹状，外植体变黑。

1.4 继代培养

将不定芽从原叶柄上切下，转接到1/2MS+6BA2+NAA0.25的培养基上，促使嫩芽长出更多的侧芽，原叶柄弃去。每5～6周做1次继代增殖，继代培养基选择MS基本培养基，pH5.8，葡萄糖30mL，琼脂6g，1L培养基。附加BA浓度为1～3mg/L，NAA浓度为0.1～0.3mg/L，从中筛选出最佳的诱导培养基组合。各培养基组合及生长状况分别为：配方1MS+6-BA1+ NAA0.1，长势过矮过粗且稀疏；配方2MS+6-BA2+ NAA0.2，无污染，长势良好，有愈伤组织及不定芽出现适合，繁殖系数最高，繁殖的幼苗长势最好；配方3MS+6-BA3+ NAA0.3，过度愈伤化、长势过高过弱。

1.5 生根培养

当小苗高度达到3～4cm的时候，可以转接到生根培养基中进行培养，生根培养基选择MS基本培养基，pH5.8，葡萄糖20mL，琼脂6g，1L培养基。各培养基组合及生长状况分别为： 1/2MS+NAA0.2+活性炭0.2%，适合；MS+NAA0.2+IBA2+活性炭0.2%，不适合；1/2MS+NAA0.2+2，4-D2+活性炭0.2%，不适合。大约3个月转移1次新鲜的培养基，生根率可以达到100%。生根的标准为长1cm，白色粗壮的根。

1.6 培养条件

接种完毕后，把材料放入培养室中；以每天光照12h为好，培养温度21℃最好，最高不超过25℃，有昼夜温差，光照10～12h/d，光强800～1200LX。

2 结果与分析

2.1 不同诱导培养基上红掌的生长状况出现原因

实验表明：配方1是培养基有问题，培养基中细胞分裂素（诱导侧芽分化）和生长素含量过低导致诱导没成功，没有脱分化；配方3是由于比值过大导致外植体过度愈伤化。

2.2 不同继代培养基上红掌的生长状况出现原因

实验表明：配方1培养基中细胞分裂素（诱导侧芽分化）和生长素含量过低导致长势过矮过粗且稀疏；配方3培养基中细胞分裂素（诱导侧芽分化）和生长素含量过高导致过度愈伤化、长势过高过弱。

2.3 不同生根培养基的效果

实验证明：配方1的培养基里红掌生根效果最好，移栽成活率高；配方2生的根极短极粗，而配方3由于比值太大所以根长的过长过细过弱所以都不适合移栽。

为防止根褐色影响试管苗的生长可以尝试加入0.2%活性炭。结果表明，加入活性炭后根白色健康，但生长相对较慢。分析认为，利用活性炭防止植物组织自身的酚类物质排泌和变褐老化，对形态发生和器官形成有良好效应。一般认为，活性炭有强大的吸附能力，但其吸附的选择性差，在吸附一些有害物质的同时也吸附培养基中的生长调节剂，这可能是加入活性炭后根生长缓慢的主要原因。因此，在苗木组培过程中加不加活性炭，以及加多少，有待于进一步研究。加入活性炭后使培养基变黑，对植物诱导生根有利。

3 结论与讨论

试验结果表明，红掌叶柄外植体的最适宜诱导培养为MS+6-BA2+2，4-D0.2。增殖阶段6-BA浓度为2mg/L、NAA浓度为0.2mg/L时，比较适宜红掌芽的增殖。在生根培养阶段，最好使用1/2MS+NAA0.2+活性炭0.2%为生根培养基，能够提高红掌组培苗的移栽成活率。本试验只是对红掌的一个品种进行研究，在某些方面和其他研究者的研究结果具有一致性，但也有一定的差异，这可能与其品种间基因型的差异和激素浓度有关，还须进一步研究。

参考文献

[1] 沈海龙.植物组织培养[M].北京：中国林业出版社，2005.