产地\采收季节对猕猴桃根药材中多糖含量的影响

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇产地\采收季节对猕猴桃根药材中多糖含量的影响范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

摘 要：目的：比较不同产地与采收季节猕猴桃根中多糖的含量； 方法：采用水提醇沉法制备猕猴桃根多糖，以半乳糖为对照品，采用苯酚-硫酸显色法，测定不同产地与采收季节猕猴桃根的多糖含量； 结果：选定检测波长为487nm，标准曲线为Y0.0101X+0.0163，r0.999，显色时间、精密度、稳定性、重现性考察的RSD均符合要求，平均加样回收率为102.4%，RSD为1.51%，不同产地的猕猴桃根中多糖的含量有较大差异，以安徽冬季和福建冬季出产的猕猴桃根多糖含量最高； 结论：建立的猕猴桃根多糖含量测定方法可行，不同产地猕猴桃根中多糖含量差异很大，采收期以冬季为宜。

关键词：猕猴桃根；多糖；产地；苯酚-硫酸比色法

中图分类号：R285.5文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2011）04-0843-03

Detimination of the contents of the polysaccharide of roots of Actinidia chinensis

planch in different collecting time and producing area

YU Zhi-yi【sup】1【/sup】 ，HE San-ming【sup】1【/sup】 WANG Li-li【sup】2【/sup】,WU Jin-jin【sup】3【/sup】, YAN Zhi-jian【sup】2【/sup】, SHI Sen-lin【sup】2【/sup】

（1.Jinhua Municipal Central Hospital, Jinhua 321000, Zhejiang,China

2.Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053,Zhejiang,China

3.Hangzhou Fourth Hospital, Hangzhou 31005,Zhejiang,China）

Abstract:Objective:To determine the contents of polysaccharide in the Root of Actinidia chinensis planch from different producing area and collecting time.Methods:The polysaccharide of the root of Actinidia chinensis planch was extracted by water extraction and alcohol precipitation. Galactose was used as reference substance.Determine the content of the polysaccharide of the root of Actinidia chinensis planch in different collecting time and producing area by the phenol-sulfuric acid method. Results:Chose the wavelength at 487nm to measure.Standard curve result Y0.0101X+0.0163,r0.999，RSD of displaying time,accuration,stability and repeatability is up to the mustard.Average retrieve rate is 102.4% and the RSD is 1.51% The content of different producing area is different,Among them Anhui and Fujian province’s contents are the highest at winter.Conclusion:Method by the article was feasible.Contents of the polysaccharide of the root of Actinidia chinensis from different producing area exist great difference and Winter is the nice collecting time.

Key words:Root of Actinidia chinensis planchPolysaccharideProducing area phenol-sulfuric acid method

收稿日期：2010-12-06

基金项目：浙江省科技厅重点项目（2008C23068）；浙江省自然科学基金资助项目（300431）；浙江省中医药管理局资助项目（2003KF001）； 金华市科技局资助项目（2004-2-304）

作者简介：余志怡（1966-），男，浙江金华人，学士，研究方向：恶性肿瘤的中医药防治。

通讯作者：石森林（1971-），男，浙江浦江人，副教授，硕士研究生导师，博士，研究方向：中药制剂新剂型新技术研究。

猕猴桃根为猕猴桃科植物中华猕猴桃（Actinidia chinensis Planch）的根，具有清热、利尿、活血、消肿等功效。在我国华东地区常用于治疗消化道肿瘤【sup】［1-2］【/sup】。目前认为猕猴桃根的主要药效物质基础为猕猴桃根多糖（ACPS）,现代研究发现其具有抗肿瘤、抗病毒、抗感染、抗氧化、免疫增强等药理作用【sup】［3-9］【/sup】。

由于中华猕猴桃在我国分布很广，猕猴桃根药材的产地也较多，主要有浙江、贵州、福建、安徽等省；现在猕猴桃根的采集主要在春、秋两季进行。本文以猕猴桃根多糖为猕猴桃根药材的质量评价指标，考察了产地与采收季节对猕猴桃根药材质量的影响，旨在为猕猴桃根产地选择与采收季节的确定提供依据。

1 材料与仪器

1.1 材料与试剂

猕猴桃根（产地：贵州，福建，安徽，江西，陕西，云南，四川，广西，广东）；D-半乳糖对照品（批号200404，中国药品生物制品检定所）；浓硫酸、苯酚、无水乙醇、3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、无水亚硫酸钠等均为分析纯试剂。

1.2 仪器与设备

UV-2450紫外可见分光光度计（日本岛津）；Avanti J-26XP系列高效离心机（美国贝克曼）；DKS-24型电热恒温水浴锅（上海经济区沈荡中新电器厂）；JA2003N电子天平（上海精密仪器有限公司天平仪器制造厂）；XS105分析天平（梅特勒-托利多）；KH-250DB型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；WH-861涡旋混合器（太仓市科教仪器厂）；DZF6050型真空干燥箱（上海博讯实业有限公司）；R-501型旋转蒸发仪（上海申胜技术有限公司）。

2 方法和结果

2.1 ACPS含量测定方法的建立

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取105 ℃干燥至恒重的半乳糖对照品约10mg，置100mL容量瓶中，加适量蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得（浓度为101.9μg/mL）。

2.1.2 5%苯酚溶液的制备 称取苯酚100g于烧瓶中，加入0.1g铝片，0.05g碳酸钠，加热蒸馏，收集182℃馏分。称取蒸馏后的苯酚5g置100mL容量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。

2.1.3 供试液的制备 精密称取ACPS约25 mg，用20mL水加热溶解，冷却，移置25mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，备用。精密量取1 mL置25mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.4 检测波长的选择 精密量取对照品液与供试液各1.0mL，置具塞试管中，分别精密加入5%苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速精密加入硫酸5.0mL，摇匀，置沸水浴加热15min，取出冷却至室温。另以蒸馏水1.0mL同上操作作空白，于400nm～800nm进行波长扫描，结果对照品液与供试液在487nm处均有最大吸收，故选择测定波长为487nm。

2.1.5 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分别置具塞试管中，加蒸馏水至1.0mL。各精密加入5%苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速精密加入硫酸5 .0mL，摇匀，置沸水浴加热15 min，取出冷却至室温。以相应的试剂为空白，在487 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果回归方程：A0.0101C+0.0163，r0.9999，表明对照品溶液在20.38～101.9μg/mL范围内吸光度与浓度有良好的线性关系。

2.1.6 精密度试验 精密量取对照品液1.0 mL置具塞试管中，按照“2.1.5标准曲线的制备”项下自“精密加入5%苯酚溶液1.0mL”起依法操作，测定吸光度，连续测定6次，记录吸光度，计算RSD值，结果RSD为 0.12%，表明仪器精密度良好。

2.1.7 重复性试验 取同一批ACPS，精密称定约25 mg，6份，按照“2.1.3 供试液的制备”项下操作制备供试液，分别精密量取1.0 mL置具塞试管中，按照“2.1.5标准曲线的制备”项下自“精密加入5%苯酚溶液1mL”起依法操作，测定吸光度，采用标准曲线法计算供试液中多糖浓度，计算ACPS多糖含量的RSD，结果RSD为3.57%，表明该方法重现性良好。

2.1.8 稳定性试验 精密量取供试液1.0 mL置具塞试管中，按照“2.1.5标准曲线的制备”项下自“精密加入5%苯酚溶液1.0mL”起依法操作，于冷却至室温后的0，20，40，60，80，100，120min测定吸光度，计算RSD值，结果RSD为2.49%，表明供试液在显色后的120min内稳定。

2.1.9 回收率试验 取已知含量的ACPS约 25mg，6份，精密称定，按照“2.1.3 供试液的制备”项下操作制备供试液。分别精密量取1.0mL，置25mL容量瓶中，各加入当量的半乳糖对照品，稀释至25 mL，摇匀。精密量取1.0 mL置具塞试管中，按照“2.1.5标准曲线的制备”项下自“精密加入5%苯酚溶液1.0mL”起依法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试液中多糖浓度，计算回收率。结果回收率为100.6%～104.4%，平均回收率为102.4%，RSD1.51%，表明该法测定结果可靠。

2.2 猕猴桃根多糖的提取

参考文献【sup】［2］【/sup】，取猕猴桃根100g，加10倍量水浸泡2h，加热回流提取2h，提取3次，合并提取液，以3500r/min离心10min，除去不溶物，上清液减压浓缩至200mL，加入95%乙醇致醇浓度为70%，静置12h,，7000r/min离心10min，沉淀以无水乙醇洗3次，80℃真空干燥至恒重，精密称定。

2.3 不同产地猕猴桃根中多糖含量的比较

（1）取江西、陕西、云南、四川、广西、广东等产地的猕猴桃根各100g，按2.2制备猕猴桃根多糖。

（2）精密称定上述猕猴桃根多糖粉末各约30mg，于25mL容量瓶中，以适量蒸馏水溶解并稀释至刻度，精密移取2mL至25mL容量瓶中，加水稀释至刻度，精密移取1.0mL,照标准曲线制备项下方法，自“加入5%苯酚溶液1.0mL”项起，依法测定吸光度；同时按“标准曲线的绘制”项操作，随行标准曲线，采用标准曲线法，计算药材中猕猴桃根多糖含量，结果见表1。根据结果可知，不同产地的猕猴桃根中多糖含量差异较大，四川产的猕猴桃根中多糖含量为江西产的7倍多。

表1 不同产地猕猴桃根多糖的含量测定结果（n3）

2.4 不同采收季节猕猴桃根中多糖含量的比较

（1）取春、冬两季采集的贵州、福建、安徽等地猕猴桃根药材各100g，按2.2制备猕猴桃根多糖。

（2）精密称定上述猕猴桃根多糖粉末各约30mg，按2.3.2操作，依法测定，计算药材中猕猴桃根多糖含量，结果见表2。结果表明猕猴桃根以冬季采收比春季好。

表2 春、冬两季采集的贵州、福建、安徽等

地猕猴桃根药材中的多糖含量（n3）

3 讨 论

多糖的提取受浸提时间，醇沉浓度等因素影响，本文采用前期研究确定的制备方法与工艺制备猕猴桃根多糖，即：猕猴桃根，加10倍量水浸泡2小时，加热回流提取2小时，提取3次，醇沉浓度70%，真空干燥制备。

本文采用苯酚-硫酸比色法，以半乳糖作为对照品，测定猕猴桃根多糖。结果表明在20.38～101.9μg/mL范围内，线性关系良好，显色时间、精密度、稳定性、重现性、回收