高效液相色谱法测定克霉唑溶液的含量及有关物质的研究
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摘要：目的 探讨高效液相色谱测定克霉唑溶液的含量的准确性。方法 采用13本岛津LC-6A高效液相色谱仪，甲醇一水为流动相，流速：10ml・min-1；检测波长：272mm，采用外标法室温检测。结果 克霉唑在13.4～300mg/L范围内线性关系良好，得到线性回归方程为Y=1324.4X+213.34，相关系数为0.9998（n=6）；低、中、高浓度精密度的RSD值分别为0.49%、0.38%、0.51%；重复性RSD为0.48%；平均加样回收率为99.19%，RSD为0.85%；供试品溶液室温放置8h 稳定。结论 本测定方法简单易懂，结果精确，可有效测定克霉唑溶液中克霉唑的含量。
克霉唑具有强大的坑真菌作用，临床上多用于真菌性妇科炎症治疗，传统的克霉唑含量测定是滴定法，操作复杂，精确度低，并且耗时长[1]。高效液相色谱法（HPLC）应用于物质含量的测定试验以其高效、准确而被广泛应用。本文采用高效液相色谱法（HPLC）检测试剂中克霉唑质量的含量，现报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料 13本岛津LC-6A高效液相色谱仪（包括LC-6A恒流泵，CTO-6A柱恒温箱，SPD-6AV可调波长紫外检测器，SCL-6B色谱系统控制器，ANASTAR色谱工作站），岛津265型紫外分光光度计；METTLER TOLEDO AB135-S 型十万分之一天平（METTLER，瑞士）；XW-80A涡旋混合器（ 上海沪西分析仪器厂）；TGL16M型冷冻离心机（长沙英泰仪器有限公司）；AHL-2001-P痕量型分析型超纯水机（艾科浦，重庆颐洋企业发展有限公司）[2]。
1.2试药 克霉唑对照品：由中国药品生物制品检定研究院提供，批号：100037-200306；克霉唑栓（医院制剂，批号：020314，每支10g装含克霉唑0.3g）；甲醇（色谱纯，天津市化学试31--厂）；磷酸二氢钾：汕头市西陇化工厂有限公司，分析纯，批号：090307；磷酸：天津科密欧化学试剂有限公司，分析纯，批号：110215；纯水：自制去离子超纯水。
1.3实验方法
1.3.1色谱具体条件 流动相：甲醇-水（64：23，庚烷磺酸钠4.54g，三乙胺2.5ml溶于1000ml水中）；色谱柱：Lichrospher C18（212 mm×4.7mn，5 um）波长的检测最适值为：260nm，恒温35.2C，流速1.0mL・min-1。
1.3.2精密度测定 精密吸取克霉唑38.9ug・mL-1的供试液，连续进样6次，计算其峰面积的RSD为0.68%。
1.3.3对照品溶液的制备 克霉唑质量100mg，用100ml容量瓶装，甲醇溶解为1.0mg每毫升的溶液。
1.3.4 标准曲线方程的绘制 称克霉唑质量为52.21mg（用在100℃恒重的克霉唑），溶解在100面临的容量瓶中，加庚烷磺酸钠，三乙胺适量，用超声波来溶解，把溶液溶解到适量，储存用于实验液。把实验液均放在25ml容量瓶当中（5.0ml，10.0ml，15.0ml，20.0ml，25.0ml），摇匀，各进样20止，依法测定。记录各个峰的的峰值，用克霉唑的溶液浓度（C）与对照的各个峰的峰值（A）来求得总体的线性方程：A=3.12×102C-7.52×102，r=0.999 9（n=6），总体说明克霉唑在100.6～498.2 mg.L-1范围内，线性关系良好。
1.3.5 检测波长的选择 以流动相作为空白对照，将克霉唑对照液和供试品溶液在紫外分光光度计上扫描，扫描区间为200～300nm，结果得出，克霉唑在260nm处显示有最大吸收。因此，选择260nm作为检测波长。
2结果
2.1 样品含量测定 取克霉唑栓剂1支（10 g）精密称定，混匀，精密称取适量（约含克霉唑0.28 g）， 放入甲醇，放在热水浴中，待完全融化移植100ml的容量瓶中，用甲醇溶液进行滴定，待完全溶解后，用冰水进行冷却，最后过滤。量取续滤液10.5ml放置在100ml的容量瓶当中，用庚烷磺酸钠，三乙胺定容完成。取25皿注入色谱柱进行分析。写出线性方程，求出结果并分析，见表1。
2.2回收率试验 取克霉唑空白溶液适量，分别精密加入对照品适量，结果见表2。
3讨论
此实验如果用甲醇和水进行试验，杂质峰不明显，并且分离困难。如果用磷酸盐，对水相和有机相的比例等有影响。水相比例达到55%及以上时，色相谱的尾风较长，时间也较长，适当的加入三乙胺，分离效果得到改善，并分离完全；甲醇68%时，杂质峰不好分离，效果不明显。
传统试验中水相比例大，组分保留的时间较长，压力较高，杂质峰的峰形较宽。而本实验恒温加热35.2℃，流速得到了提高，压力减小了，保留时间明显减小，峰值变窄[3]。
流动相的pH值对时间的保留和分离也有相应影响。pH在3.6～4.6分离完全；当pH>7.4的时候，各个成分分离不完全，还要考虑填料的过程中pH过高时的稳定性。总体来说，pH越高，时间保留的相对较长[4]。本实验采用pH为4.3的磷酸，保留时间和分离度为最适值。克霉唑溶液和对照品溶液在200～300扫描，流动相为空白，最大吸收为260nm。本实验的方法可以排除其它成分的干扰，并且操作简单，结果精确，各成分的剂量可以得到有效控制。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社， 2010：319-321.
[2]British Pharmacopoeia Commission.BP 2009.London.UK.The Stationery Office，2010（1）：428-429.
[3]李亦蕾，钟震邦，郑萍，等.高效液相色谱法测定复方酮氯乳膏中酮康唑和丙酸氯倍他索的含量[J].医药导报，2010.29（9）：1216-1218.
[4]王勇.HPLC法测定复方克霉唑乳膏中二苯基（2-氯苯基）甲醇和克霉唑的含[J].中国药品标准，2010，11（3）：227-230.