HPLC法测定金果饮咽喉片中橙皮苷的含量
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇HPLC法测定金果饮咽喉片中橙皮苷的含量范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
[摘要] 目的：建立hplc法测定金果饮咽喉片中橙皮苷含量的方法。方法：色谱柱C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相为甲醇-醋酸-水（35∶4∶61），流速为1.0 ml/min，检测波长为283 nm。结果：橙皮苷的线性范围为6~48 μg/ml，r=0.999 03；平均回收率为100.57%，RSD=0.99%。结论：本方法操作简便、准确，重复性好，可作为该制剂的定量分析方法。
[关键词] 金果饮咽喉片；橙皮苷；HPLC
[中图分类号]R917[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）08（b）-086-02
Determination of hesperidin in Jinguoyin Yanhou Pian by HPLC
PIAO Chun-xiang1，JIN Dong-ri2，ZHANG Shan-yu3
（1.Forest Science Department,Agricultural College of Yanbian University,Longjing133400, China；2. College of Science and Engineering，Yanbian University，Yanji133002，China；3.Medical School of Yanbian University，Yanji 133002，China）
[Abstract] Objective: To establish the method for determining the content of hesperidin in Jinguoyin Yanhou Pian by HPLC. Methods:The column was C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm) with methanol-HAc-water（35∶4∶61)as the mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min and the detective wavelength was 283 nm. Results:The calibration curve was linear at a range of 6~48 μg/ml for the tesperidin(r=0.999 03).The average recovery was 100.57% and the related standard deviation(RSD) was 1.68%. Conclusion: The method is simple and accurate with a good reproducibility and can be used as quantitative analysis method for this preparation.
[Key words] Jinguoyin Yanhou Pian；Hesperidin；HPLC
金果饮由地黄、胖大海、西青果、陈皮等10味中药组成，具有养阴生津、清热利咽、润肺开音的功效[1]。陈皮中的橙皮苷具有维持血管正常渗透压、降低血管脆性、缩短流血时间等作用[2]。金果饮收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第五册，标准中只有鉴别，无定量指标。为了控制金果饮咽喉片的质量，本研究建立了HPLC法测定金果饮咽喉片中橙皮苷含量的方法。实验结果表明，本方法简便、快速、准确。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
HITACHI液相色谱仪（包括HITACHI Integrator D-7500，HITACHI Pump L-7150，HITACHI Detector L-7420UV-VIS；HP 1100 LC/MS 1949 A，美国安捷伦公司（惠普公司）制造）
1.2 试药
橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，110721-200211）；金果饮咽喉片（按《中华人民共和国卫生部药品标准-中成药制剂》中收载的制备方法自制）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）；流速为1.0 ml/min；检测波长为283 nm；柱温35℃；进样量 10 μl。
2.2 对照品贮备液的制备
精密称取橙皮苷对照品3.0 mg，置25 ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理2 min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。
2.3 供试品溶液的制备
取金果饮咽喉片适量，研细，精密称取2 g，置三角瓶中，精密加甲醇50 ml，称定重量，超声提取40 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，过滤，滤液用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
2.4 阴性对照液的制备
按处方比例制备不含陈皮的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照液。
2.5 空白对照试验
精密吸取0.1 mg/ml对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液各10 μl，在上述色谱条件下依次进样，记录色谱图。结果阴性对照液在对照品溶液色谱图相应的保留时间处无吸收，且供试品溶液的色谱中橙皮苷吸收峰分离效果较好, 表明其他组分对橙皮苷的测定结果没有影响（图1）。
2.6 线性关系考察
精密吸取对照品贮备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇定容至10 ml，摇匀，按上述色谱条件测定，依次进样10 μl，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y=10.593 86X－0.187 72，r=0.999 03（n=3），橙皮苷浓度在6~48 μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。
2.7 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样5次，橙皮苷对照品峰面积的RSD为0.71%。
2.8 稳定性试验
取样品溶液分别在0，1，2，3，4 h进样测定，峰面积基本无变化，RSD为0.78%。
2.9 重复性试验
取同一批号供试品，平行处理5份，按上述方法测定，每份注入2次，RSD为2.13%。
2.10加样回收试验
精密称取阴性样品2 g，加入2.4 mg对照品，照2.2项下方法制备供试液，共5份，每份注入2次。结果，平均回收率为100.57%，RSD为0.99%，见表1。
2.11 样品的测定
精密吸取样品溶液10 μl，按上述色谱条件测定，5批样品中橙皮苷的含量见表2。
3 讨论
3.1 提取溶剂
分别采用100%、80%、50%和30%的甲醇溶液为提取溶剂，按照供试品溶液制备项下制备后分析。结果显示，甲醇提取效果最好，30%甲醇最差，故选择甲醇为提取溶剂。
3.2 提取方法
供试品加甲醇后，分别水浴回流提取30 min[3]和超声振荡提取40 min[4]。结果显示，超声振荡提取率略高于回流提取，故采用超声振荡提取方法。
3.3 超声提取时间
供试品加甲醇后，分别超声振荡提取10，20，40 min。结果显示40 min时的最高，故提取时间选择40 min。
方法学研究结果表明，本方法简便、准确，重现性好，空白无干扰，可作为金果饮咽喉片中橙皮苷含量的测定方法。
[参考文献]
[1]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2000.149.
[2]毛彦杰,岳敏,谷学新,等. HPLC测定小儿至宝丸中橙皮苷含量[J].中成药,2004,26(5):附7-附9.
[3]张寓云,毛素芳,郑奕辉,等. HPLC测定胃舒散中橙皮苷的含量[J].中成药,2004,26(3):256-257.
[4]郭天义,杨双杰,张现军,等. 高效液相色谱法测定健胃消食片中橙皮苷的含量[J].中国药业,2004,13(2):52.
（收稿日期：2007-07-03）
“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”