UF—100检测脑脊液的临床应用价值研究

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[摘要] 目的 研究一种简便、快速、准确的脑脊液（CSF）常规检测方法。 方法 对128份CSF标本进行uf-100及显微镜检测，结果与生化所得结果相比较。 结果 利用UF-100和显微镜检分别测得的结果，经t检验差异无统计学意义（P > 0.05），呈现很好的相关性（红细胞r = 0.989），（白细胞r = 0.980）。对细菌的计数与白细胞计数（r = 0.397）和CSF总蛋白（r = 0.333）呈现正相关（P < 0.05），与CSF糖的浓度呈现负相关（r = -0.327，P < 0.05）。在某些病例中，发现UF-100对淋巴细胞分类不准确引起白细胞计数低于预测值；血性标本和通过脑室引流得到的标本，红细胞及细胞碎片产生干扰，细菌计数不准确。另外，检测无色透明CSF标本，UF-100提示“bacterial”的背景信号，可以认为是无菌CSF。 结论 UF-100为CSF白细胞和红细胞分析提供了快速可靠的方法，对神经系统疾病的诊断有一定帮助。

[关键词] UF-100；脑脊液；显微镜

[中图分类号] R742.3 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210（2013）06（b）-0086-03

UF-100是一种以流式细胞术为基础的通道式仪器，可以对各种有形成分提供自动分析，近几年被广泛地应用于临床实验室。本研究旨在探讨该仪器检测脑脊液（CSF）中红细胞（RBC）、白细胞（WBC）及细菌，其结果与显微镜计数结果、生化（蛋白质、糖）及微生物学数据（革兰染色和培养）相比较，建立一种简便、快速及准确的CSF常规检测方法，为神经系统疾病诊断提供有效数据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

患者均来自2010～2011年总医院住院患者，CSF标本大多采用腰椎或脑室引流，用无菌容器收集128份，平均分成2～4份，快速送往不同的实验室（生化室、细菌室、常规室）。这些标本中86份为男性，42份为女性。其中，中枢神经系统感染47份，中枢神经系统损伤35份，肿瘤患者28份，自身免疫性疾病（如多发性硬化和肌萎缩侧索硬化）10份，痴呆和脑脊髓炎8份，经脑室排出41份，腰穿87份，标本收集后8 h内进行分析检测。仪器为日本sysmex公司生产的UF-100全自动尿沉渣分析仪，试剂为该仪器配套试剂。

1.2 UF-100全自动尿沉渣分析原理

UF-100全自动尿沉渣分析仪采用氩离子激光流式细胞仪，通过检测传导性对体液中有形成分进行分析，计数粒子数量。用前向散射光知粒子大小，用荧光染料菲啶测DNA，用染料羰氰测膜，从前向散色光和荧光的脉冲强度和宽度，结合阻抗数据，基于粒子大小、性状、数量和染色特点不同，多参数计算而将粒子进行分类，结果显示散点图及每微升的数量，对RBC、WBC、细菌进行检测和计数[1-2]。UF-100的操作方法按仪器使用说明书进行。

1.3 显微学分析

手工细胞计数方法按《全国临床检验操作规程》进行，用牛鲍计数板显微镜检，每一样品要计数10个大方格内细胞总数，单位为cell/mm3。对于WBC >5/μL的标本和被疑似中枢神经系统（CNS）肿瘤CSF标本进行WBC分类，取25～150 μL CSF（根据细胞量）用细胞离心机进行离心5 min（2500 r/min），涂片，瑞氏染色，光学显微镜检，在100×油镜下观察，若存在细胞，计数100个细胞进行分类。

1.4 生化检查

用雅培（美国）全自动生化分析仪按照仪器说明书检测CSF生化指标、总蛋白、葡萄糖。

1.5 微生物学检查

按照《全国临床检验操作规程》进行，对128份标本进行革兰染色和CSF培养。CSF标本进行离心2500 r/min，离心10 min，弃上清液，余250 μL，取15 μL涂两张片，进行常规革兰染色，在光学显微镜100×油镜下镜检。对于CSF培养，将离心后标本取15 μL接种于绵羊血平板。

1.6 操作及干扰因素

在培养出患者独立菌落中取大肠埃希菌（n = 3）和链球菌（n = 3）菌落至于5 mL生理盐水中进行分析，对于富含血小板的血浆在枸橼酸钠抗凝后2000 r/min，离心10 min（n = 3，血小板数量485×109/L）用于研究血小板对细菌计数的干扰。

1.7 统计学方法

采用SPSS for windows 16.0软件，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，进行t检验，并进行相关性分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 红细胞和白细胞计数

UF-100和显微镜检测红细胞和白细胞结果见表1、2，经t检验两种方法比较差异无统计学意义（P > 0.05）；并呈现很好相关性（RBC r = 0.989，WBC r = 0.980），见图1、2。标本中有3例显微镜检WBC>1000/mm3，WBC分类中淋巴细胞>10%，而UF-100 WBC计数淋巴细胞被误划分到“其他细胞”中，导致WBC计数值偏低。在这几例中，淋巴细胞可在散点图（菲啶荧光相对前向散色光）中很容易被确认，存在于细菌和白细胞区域之间的一群散色光谱；但1例急性淋巴细胞白血病合并脑转移的原淋细胞被正确认为WBC。

2.2 细菌

UF-100细菌计数与血培养，革兰染色结果相比较差异无统计学意义（P > 0.05）；UF-100细菌对数换算结果与WBC计数、总蛋白和葡萄糖做散点图。由图3～5散点图可见与WBC和CSF总蛋白呈现正相关（WBC r = 0.397；总蛋白r = 0.333）；与CSF糖存在负相关（r = -0.327）（均P < 0.05）。UF-100细菌计数显示CSF培养为阴性的标本，通过仪器可检测到细菌。经腰椎穿刺收集的细菌数低，但脑室引流液则较高，平均RBC>100/μL的细菌数（n = 47）高于那些非血性（RBC

2.3 干扰因素研究

取29例细菌数高于参考值CSF标本，6例革兰染色和血培养呈阳性。29例中21例来自脑室引流，23例为血性标本（RBC>100/μL），18例既是脑室引流又为血性，只有2例通过腰穿所得并且RBC100/μL，CSF蛋白>1 g/L，CSF糖

3 讨论

本研究采用UF-100全自动尿沉渣分析仪和显微镜法测定脑脊液常规，测定结果相比较差异无统计学意义（P > 0.05），两种方法测定红细胞和白细胞结果呈正相关（RBC r = 0.989；WBC r = 0.980），与国内外报道接近[3-8]。细菌计数与WBC计数，CSF总蛋白呈现正相关（WBC r = 0.397，总蛋白r = 0.333），与CSF糖的浓度呈现负相关（r = -0.327）。

研究中发现在WBC和RBC较高的CSF标本，用UF-100计算结果低于显微镜结果。在19例中有3例CSF WBC显微镜计数>1000/mm3，分类淋巴细胞>10%。UF-100测定WBC计算值较显微镜偏低，淋巴细胞可在散点图细菌和WBC区域出现一群散色光谱，被误划分到“其他细胞”中；其原因可能由于淋巴细胞形态异常无法分类造成。但对于1例急性脑转移的患者原淋细胞可以准确地出现在散点图WBC区域，对临床诊断提供证据。

用UF-100细菌的计数与WBC、总蛋白及葡萄糖有相关性，说明细菌的感染可引起这几种指标的改变，这几种指标增高或减少反映脑内感染程度。研究发现细菌测定结果中，通过腰椎得到CSF细菌计数较脑室引流液低，可能是由于CSF通过旁道引流有污染的。另外，血性CSF（RBC>100/μL）细菌计数大于那些非血性（RBC

干扰试验显示细胞碎片，细菌和RBC影响UF-100细菌计数，使细菌计数升高，但血小板在细菌计数中不产生干扰。因此血性（RBC>100/μL）或（WBC>100/μL）的CSF细菌计数结果仅供参考。

近年UF-100全自动分析仪以其简单、快速及结果准确等特点广泛应用于临床实验室，对尿液中有形成分进行分析，为泌尿系统疾病的进一步诊断提供重要依据。但应用该仪器检测脑脊液及浆膜腔液中有形成分还少有报道。以上结果表明UF-100可以快速准确对脑脊液中RBC和WBC检测；对无色透明脑脊液标本，UF-100提示“bacterial”的背景信号，可以立即向临床提供细菌阴性初报结果，对血性及脑室引流液的CSF细菌计数由于例数少待进一步研究。

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（收稿日期：2012-11-13 本文编辑：张瑜杰）