HPLC法测定骨痛灵巴布剂中雪上一枝蒿甲素含量
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作者：李军红 金日显 赵彬 李曼玲 刘淑芝
【摘要】 ：目的 建立骨痛灵巴布剂中有效成分的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,kromasil-c18色谱柱,ph 7.3的磷酸盐缓冲溶液-甲醇(28∶72)为流动相,检测波长210 nm,测定骨痛灵巴布剂的有效成分雪上一枝蒿甲素的含量。结果 雪上一枝蒿甲素在0.212 0～4.770 0 μg范围内线性关系良好(r＝0.999 99),平均回收率100.10%, rsd＝2.53%。结论 该方法精密度高,回收率稳定,重复性好,可以用于骨痛灵巴布剂的质量控制。
【关键词】 骨痛灵 巴布剂 雪上一枝蒿甲素 高效液相色谱法
abstract：objective to establish a method for the determination of bullatine a in gutongling babu plaster. method the bullatine a was determined by hplc on kromasil-c18 column, and the mobile phase consisted of phosphate buffered solution (ph 7.3) - methanol (28∶72), the detection wavelength was 210nm. result a good linear relationship of bullatine a was showed in the range of 0.212 0～4.770 0 μg (r＝0.999 99), and the average recovery was 100.10%, rsd＝2.53% (n＝6). conclusion the method is accurate and reliable, and can be used for quality control of gubitong babu plaster.
key words：gutongling；babu plaster；bullatine a；hplc
骨痛灵由雪上一枝蒿、乳香、没药等药味组成,功能温经散寒、祛风活血、通络止痛,用于治疗腰、颈椎骨质增生,骨性关节炎等症。巴布剂是目前中药经皮给药系统(tts)研究的热点之一,其基质由水溶性高分子材料制成,具有载药量大、透皮效果好、贴着舒适、对皮肤无刺激等特点,尤其适合于中药制剂。骨痛灵由酊剂改为巴布剂,能够克服剂型的某些不足,延长药物的作用时间,保持传统药物的确切疗效。为控制制剂的质量,本试验以hplc法测定了骨通灵巴布剂君药中有效成分雪上一枝蒿甲素的含量,方法简便、可靠、重现性好。现报道如下。
1 仪器与试药
美国waters 1515高效液相色谱仪,2487紫外检测器, empower色谱工作站。
骨痛灵巴布剂：自制(批号070510、070517、070524)；雪上一枝蒿甲素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110895-200303)。甲醇(色谱级,天津四友精细化学品有限公司),其余试剂均为分析纯；水为高纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：kromasil-c18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；检测波长：210 nm；柱温：35 ℃；流速：1 ml/min；流动相：磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钠1.97 g,磷酸二氢钾0.22 g,加水溶解并稀释至1 000 ml,用80%磷酸溶液调节ph至7.3)-甲醇(28∶72)[1]。
2.2 供试品溶液的制备
取骨痛灵巴布剂,揭去保护膜,对折后剪碎,置锥形瓶中,加入氨试液15 ml,振摇,使巴布膏均匀、充分的完全吸收氨试液；精密加入氯仿50 ml,称定,水浴回流2.0 h,取下,放至室温,称定,用氯仿补足减失的重量,摇匀,静置；精密吸取氯仿液25 ml,水浴蒸干,残渣加甲醇超声溶解,转移,甲醇定容至10 ml；用0.45 μm微孔滤膜过滤,进样测定。hplc图谱见图1。
2.3 标准曲线的绘制
取雪上一枝蒿甲素对照品适量,精密称定,甲醇溶解,制成0.106 0 mg/ml的对照品溶液。取对照品溶液分别进样2、4、8、15、20、30、45 μl；以进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,计算回归方程,结果：y＝704 672x＋31 485,r＝0.999 99,表明雪上一枝蒿甲素在0.212 0～4.770 0 μg之间线性关系良好。
2.4 精密度试验
取对照品溶液连续重复进样6次,每次进样20 μl,记录峰面积,计算平均值,rsd＝0.80%(n＝6)。表明本方法精密度良好。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液分别在0、3、6、9、12、24 h重复进样,每次20 μl,测定峰面积,计算,rsd＝1.48%。表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.6 重复性试验
取同批骨痛灵巴布剂6片,揭去保护膜,对折后剪碎,混合,称取6份,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,分别进样测定,计算含量及平均值,结果rsd＝0.86%(n＝6)。
2.7 回收率试验
取已知含量的骨痛灵巴布剂,揭去保护膜,对折后剪碎,称量,加入雪上一枝蒿甲素对照品,按“2.2”项下方法进行实验,制备供试品溶液,进样测定,计算,结果平均回收率为100.10%, rsd＝2.53%(n＝6)。表1 骨痛灵巴布剂雪上一枝蒿甲素加样回收试验(略)
2.8 含量测定
按“2.2”项下方法实验,制备供试品溶液,分别进样,测定3批骨痛灵巴布剂中雪上一枝蒿甲素的含量,结果见表2。表2 3批骨痛灵巴布剂中雪上一枝蒿甲素的含量测定（略）
3 讨论
巴布膏的含量测定难点在于排除基质的影响,找到最简单、可靠的方法。前期的预实验结果表明,由于中药巴布膏由中药提取浸膏、多种水溶性骨架材料、甘油、氮酮等组成,对供试液的制备带来很大的影响。雪上一枝蒿是本制剂的君药,又属有毒药物,测定其有效成分雪上一枝蒿甲素的含量对制剂的质量控制具有重要意义。本研究确定了一种简单、可靠、重复性好的含量测定方法,可以作为骨痛灵巴布膏的质量控制指标。
实验中进行了供试品溶液制备的方法学研究：①对提取溶媒进行比较,结果发现甲醇使巴布膏皱缩,某些辅料能溶解其中,使提取液的杂质太多,后续的处理繁琐；乙醚的提取率较低；在加入氨试液后氯仿的提取率高,并且处理方法简单,能够达到测定的要求。②对氨试液加入量的选择,在保证巴布膏能够均匀充分湿润下10、15、20 ml结果差别不大,选择15 ml作为巴布膏的润湿量,既能保证整片巴布膏的完全充分浸润,又使其中雪上一枝蒿甲素能完全碱化。③对提取溶媒氯仿的加入量选择,结果以加入50 ml为好。④对提取方法进行了水浴回流、超声、冷浸的比较,结果以水浴回流提取最完全。⑤对提取回流时间的选择,实验结果证明,回流2.0 h能够提取完全。
本研究中在供试品溶液的制备过程中加入氨试液,目的在于：一方面巴布膏吸收氨试液使膏体膨胀,提高了氯仿对膏体的穿透性,又碱化了目标成分,使其易溶于氯仿；另一方面,能够减少水溶性基质、甘油等在氯仿相的溶解。
目前《中华人民共和国药典》(一部)中尚未有关于中药巴布膏含量检测控制的标准,本试验方法可为其他巴布膏的质量标准研究提供参考。
【参考文献】
[1] 高绍阳,喻 萍,陈武元,等.rp-hplc法测定雪上一枝蒿中雪上一枝蒿甲素含量[j].药物分析杂志,2005,25(11)：1382.