补骨脂乳膏剂的制备及其质量控制

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[摘要] 目的:制备补骨脂乳膏并建立其质量标准。方法:加热回流法提取补骨脂中主要成分补骨脂素和异补骨脂素,浓缩至浸膏。取处方对应量的主药、乳化剂水相和油相制得乳膏剂,采用高效液相法测定乳膏中补骨脂素和异补骨脂素的含量,并考察制剂稳定性。结果:补骨脂素检测浓度在0.014 5～0.362 0 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.20%(RSD=1.79%,n=6);异补骨脂素检测浓度在0.018 8～0.47 0 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.87%,RSD=1.58%,且制备的补骨脂乳膏均匀细腻,易于涂布,质量稳定。结论:补骨脂乳膏的处方及制备工艺合理,质量可控,值得推广,质量控制方法简便准确重现性好,适用于该制剂的质量控制。

[关键词] 补骨脂;乳膏;制备;质量控制

[中图分类号] R943[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)06(a)-071-03

The preparation of Fructus Psoraleae Cream and its quality control

WANG Chuanke

(Yueyang Vocational Technical College, Yueyang 414000, China)

[Abstract] Objective: To prepare Fructus Psoraleae Cream and establish its standard of quality control. Methods: Extracted psoralen and isopsoralen by using heating reflux method and condense to a certain volume. The oil phase and water phase were prepared according to prescription and merged to make Fructus Psoraleae Cream. The HPLC method was used to determined the content of psoralen and isopsoralen. Results: The linear range of psoralen was in the range of 0.014 5-0.362 0 μg (r=0.999 9). The average recovery was 98.20% with a RSD of 1.79% (n=6). The linear range of isopsoralen was in the range of 0.018 8-0.470 0 μg (r=0.999 9). The average recovery was 98.87% with a RSD of 1.58% (n=6). The prepared Cream was even, fine stable and easy to spread. Conclusion: The prescription and preparation of Fructus Psoraleae Cream are reasonable and controllable, worth popularizing. The method for determinetion is simple, accurate and reproducible, applicable to the quality control of the preparation.

[Key Words] Fructus Psoraleae; Cream; Preparation; Quality control

白癜风是一种常见的后天性表皮色素脱失性皮肤病,中医称为“白癜”、“白驳风”,好发于皮肤皱褶及暴露部位,在临床中属于慢性、难治的疾病,临床表现为皮肤上出现大小不等的圆形或椭圆形的白斑,边界清晰,边缘色素较深。该病可发生于任何年龄、性别,多发于40岁以前,我国白癜风发病率为1%～2%,有逐年上升的趋势[1]。因其病因复杂,治疗比较困难,其治疗的主要目的是增加皮损中黑色素细胞的数量,中药补骨脂别名黑故子,为豆科植物补骨脂(Psoralea corylifolia L.)的干燥成熟果实,性味辛、苦、温,归肾、脾经,为中医传统补肾助阳中药,有温肾助阳、纳气、止泻的功效,且有祛白斑增色的作用,常用于治疗白癜风等皮肤顽疾[2-5],临床应用的有口服片剂、胶囊、针剂、酊剂等传统剂型,均可因吸收入血而导致全身不良反应(视网膜毒性、肝毒性)等[6],而外用制剂避免了这些不良反应,成为了补骨脂制剂的主要研究开发方向,为了开发更安全有效的外用制剂,本试验从补骨脂中提取分离获得其中主要有效成分补骨脂素和异补骨脂素[7-9],通过处方的选择,制备了补骨脂乳膏。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(Agilent 1200LC),UV检测器;补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110739-200814),异补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110738-200309),乙醇、甲醇均为色谱纯,双重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 补骨脂的提取工艺

称取补骨脂药材20 g,水煎煮3次,每次加入的水量分别为600、500、400 ml,前2次煎煮的时间各1 h,第3次为45 min,合并3次滤液,过滤,浓缩到100 ml,加3倍量的95%乙醇,边加边搅拌,有沉淀析出,放置24 h,抽滤,滤液回收乙醇至无醇味,加蒸馏水至足量约600 ml,即得补骨脂提取液,备用。

2.2 处方与制备

2.2.1 处方

补骨脂提取液0.020 g、十二烷基硫酸钠0.200 g、十八醇5.000 g、白凡士林5.000 g、羟苯乙酯0.008 g、丙二醇2.400 g。

2.2.2 制备

取十八醇与白凡士林在水浴上熔化,作为油相,加热至75℃,其他成分也加热至75℃,加入约35 ml的补骨脂,提取浓缩液至水相,与油相混合,搅拌至冷凝,即得。

2.3 质量控制

本品为棕色,均匀,细腻的O/W型乳膏。称取本品5 g,加纯化水100 ml,搅匀,滤过,测得滤液pH值为4～5。

2.4 稳定性试验

2.4.1 离心

取本品10 g,置离心管中,以4 000 r/min的转速离心30 min,无出现分层现象。

2.4.2 60℃耐热稳定性试验

取适量样品,在60℃恒温培养箱中试验,6 h内无出现分层现象。

2.4.3 耐寒稳定性试验

取适量样品,加入试管中,放置于15℃冰箱中,24 h后取出,恢复室温后观察,无出现分层现象。

2.4.4 常温留样观察

时间为1年,无霉变和油水分离,表明本制剂稳定性良好。

2.5 刺激性试验

取体质量为2.5～3.0 kg健康家兔5只,分别剃去背部两侧的毛约3 cm2,每天3次,取0.5 g乳膏均匀涂布在一侧剃毛处,用药后在2、4、6、12、24、48、72 h观察家兔涂药侧皮肤与不涂药侧皮肤,结果涂药侧皮肤无红斑、充血异常变化。

2.6 含量测定

2.6.1 色谱条件

色谱柱: Zorbax EclipseXDB-C18 (4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相:甲醇-水(55∶45);流速:0.6 ml/min。检测波长:249 nm;柱温:25℃。

2.6.2 对照品溶液的制备

2.6.2.1 补骨脂素对照品溶液的制备精密称取对照品补骨脂素3.8 mg,甲醇定容于10 ml量瓶中。从其中另取0.1 ml,甲醇定容于10 ml量瓶中,即得3.8 μg/ml的补骨脂素对照品溶液。

2.6.2.2 异补骨脂素对照品溶液的制备精密称取对照品异补骨脂素8 mg,甲醇定容于10 ml量瓶中。从其中另取0.1 ml,甲醇定容于10 ml量瓶中,即得8.0 μg/ml的异补骨脂素对照品溶液。

2.6.3 供试品溶液的制备

取本品约2.5 g,置100 ml量瓶中,加75 ml甲醇,超声20 min,迅速水浴30 min,用甲醇定容,取干燥滤纸迅速过滤上清液,精密量取续滤液5 ml,置50 ml量瓶中,用流动相定容,摇匀,经0.45 μm的微孔滤膜过滤,得供试品溶液。

2.6.4 系统适应性试验

分别取标准曲线制备项下对照品溶液及样品测定项下供试溶液各10 μl,注入色谱仪,记录色谱图,见图1。补骨脂素、异补骨脂素分别于11、12 min左右出峰,分离良好,峰形对称。

2.6.5 空白干扰试验

按处方制备不含补骨脂素、异补骨脂素的阴性样品,照“2.6.3”项下方法制备阴性样品供试液,取阴性样品供溶液在色谱条件下进样20 μl,得色谱图,结果见图1。由图可见,阴性样品对样品的含量测定无干扰。

2.6.6 线性关系考察

取对照品贮备液,定量稀释后分别进样补骨脂素0.014 4、0.036 2、0.072 0、0.144 0、0.216 0、0.288 0、0.362 0 μg,异补骨脂素0.018 8、0.047 0、0.094 0、0.188 0、0.282 0、0.376 0、0 470 0 μg。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得补骨脂素的线性方程:Y1=6.091×106X1+2 224.6(r=0.999 9);异补骨脂素线性方程:Y2=6 276×106X2+3 929.3(r=0.999 9),表明补骨脂素在0.014 5～0.362 0 μg范围内、异补骨脂素在0.018 8～0.470 0 μg范围内分别与峰面积呈良好的线性关系。

2.6.7 精密度试验

精密吸取供试品溶液20 μl,注入液相色谱仪,重复进样5次,分别测定补骨脂素及异补骨脂素的峰面积,结果补骨脂素RSD为1.9%,异补骨脂素RSD为2.1%,表明本法精密度良好。

2.6.8 重复性试验

取制成的补骨脂乳膏5份,分别按“2.6.3”项下方法制成供试品溶液,样品含量测定项下方法测定含量,结果补骨脂素RSD为2.4%,异补骨脂素RSD为2.5%。结果表明本方法重复性良好。

2.6.9 稳定性试验

精密吸取供试品溶液20 μl,分别于配制后0、2、4、8、17、26 h,测得色谱峰面积,计算补骨脂素RSD为1.3%,异补骨脂素RSD为1.5%,表明供试品溶液在26 h内基本稳定。

2.6.10 加样回收率试验

取已知补骨脂素和异补骨脂素含量的乳膏1 g,精密称定,共6份,分别准确加入对照品贮备液2.0、2.5、3.0 ml各2份。按“2.6.3”项下制成供试品溶液,分别进样20 μl,测定,计算回收率,结果表明,补骨脂素回收率平均值为98.20%,RSD=1.79%,异补骨脂素回收率平均值为98.87%,RSD=1.58%,见表1和2。

表 1 补骨脂素回收率试验结果(n=6)

Tab.1 Recovery test of psoralen(n=6)

表 2 异补骨脂素回收率试验结果(n=6)

Tab.2 Recovery test of isopsoralen(n=6)

2.6.11 样品含量测定

分别精密吸取3批供试品溶液,各20 μl,依上述色谱条件测定,结果见表1。

3 讨论

目前国内尚未见补骨脂乳膏剂成品上市,本文所得补骨脂乳膏剂具有光洁细腻、涂展性好、不油腻、稳定性好、刺激性低等优点,具有药物释放快和穿透皮肤强的优点,主要用于白癜风的局部治疗, 可降低补骨脂制剂不良反应的发生。

通过对基质的处方和制备工艺的考察结果发现,处方中不同乳化剂之间的不同配比均能够影响膏体的稠度以及其他各项指标。同时主药加入顺序、搅拌方式、乳化剂加入顺序以及温度控制等也能够影响膏体的性状及稳定性。由于补骨脂提取液中的有效成分补骨脂素和异补骨脂素为脂溶性,所以在制备乳膏制剂的时候,应该先加入油相,再与水相混合。

乳膏剂的质量控制主要是以基质的外观性状、稳定性和有效成分的含量为考察指标[10],从而对基质处方和制备工艺进行综合筛选,以获得安全、稳定、有效的乳膏剂。

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(收稿日期:2010-04-15)