胸腺肽中赋形剂对多肽检测的影响

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[摘要]通过对胸腺肽溶液中加入赋形剂甘露醇前后多肽浓度的检测，确定甘露醇对多肽的影响程度，从而进行生产工艺的改进或指导生产。按照国家药品标准规定的检测方法（Folin-酚法），模拟生产配方，进行多肽浓度的检测。结果表明，胸腺肽中的赋形剂甘露醇对多肽的检测有不同程度的干扰。而且，甘露醇对多肽检测的影响，随着加入量的变化而变化。

[关键词]赋形剂；甘露醇；多肽；影响；胸腺肽

[中图分类号] R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）09（c）-103-02

胸腺肽是从健康猪或小牛胸腺中提取的分子量

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 仪器恒温水浴箱，紫外分光光度计UV-2450，机械秒表，具塞试管，移液管。

1.1.2 试剂牛血清白蛋白对照品（中国药品生物制品检定所分发，配制浓度0.304 mg/ml），甘露醇（原产地：法国，批号：E13JA），碱性铜试液（按标准规定自配），酚试剂（116，按标准规定自制并稀释），胸腺肽超滤液（本公司自产），牛血清白蛋白（BSA，华美生物工程公司）。

1.2 实验方法

为考察甘露醇在以Folin-酚法检测多肽时的空白影响，以水为溶剂，配制含甘露醇4%、5％、8％、10%的溶液进行多肽含量检测。

参照标准规定的方法，为保证检测结果的可靠性，将多肽浓度稀释至0.10~0.15 mg/ml左右。考虑到甘露醇对多肽检测的影响，先以水为空白检测不含甘露醇的胸腺肽溶液中多肽的含量，然后以该胸腺肽溶液为空白对照，直接检测不同浓度的甘露醇对该胸腺肽溶液中多肽的影响（检测时消除多肽的吸收度）。

为排除检查中可能因工艺的原因带入影响检测的其他干扰物质，以华美生物工程公司的牛血清白蛋白(BSA)配制的甘露醇进行对照实验，同时考察不同多肽浓度下含一定量甘露醇的检测结果。

1.3 标准曲线的制备和样品的检测

标准曲线的制备按标准规定的方法进行，同时对配制好的样品进行多肽浓度的检测。

2 实验结果

2.1 标准曲线的制备

以吸收度Y为纵坐标，浓度X为横坐标，得回归方程Y=0.956 77X+0.039 22，r=0.996 29。标准曲线见图1。

2.2甘露醇水溶液的多肽检测

以水为空白，用水配制成含4%、5%、8%、10%甘露醇水溶液，多肽检测结果见表1。

2.3 自产胸腺肽溶液的多肽含量检测

多肽检测结果见表2。表2中，多肽检测结果1为以本公司生产的胸腺肽超滤液进行配制的溶液，多肽检测结果2为以华美生物工程公司提供的BSA进行配制的溶液；0％下的浓度是指配液所用胸腺肽超滤液（或BSA）中含多肽的检测结果，4％、5％、8%下的浓度中不含多肽的浓度。

2.4 两种多肽溶液对检测结果的影响比较

以华美生物工程公司提供的BSA配制不同浓度的多肽溶液，并同时配制含甘露醇为5%的溶液进行对照，检测结果见表3。

3 讨论

从以上结果可以看出，按Folin-酚法，加入甘露醇后对多肽溶液检测有一定程度的影响。以水为空白，配制不同浓度的甘露醇溶液时，基本不影响其多肽检测结果(0.2 mg/ml左右)；但在多肽溶液中加入甘露醇后，其含量变化较大，随溶液中甘露醇含量的不同(4%、5%、8%、10%)其影响程度也不同，而且随着甘露醇浓度的增加影响也会加大：在不同浓度的多肽溶液中加入相同比例的甘露醇(5%)，进行含量检测，其影响并不相同。

黄瑾等[2]对胸腺素制剂按双缩脲法、半微量凯氏定氮法、Folin-酚法三种方法进行了含量检测对比，认为溶液中的芳香族氨基酸被灵敏度很高的Folin-酚法同时检出，从而干扰了对BSA的测定。

周淑平等[3]认为胸腺肽的λmax在260 nm附近，而牛血清蛋白对照品的λmax为278 nm，这是蛋白质中酪氨酸和色氨酸的吸收，而文献报道胸腺肽中含芳香族氨基酸甚微，因而使用牛血清白蛋白作为标准品是不恰当的。

[参考文献]

[1]国家药品监督管理局,国家药典委员会. 国家药品标准・化学药品地方标准上升国家标准[S].第16分册.WS1-XG-042-2000-2003.

[2]黄瑾,倪宏. 胸腺素含量测定方法的比较[J].中国生化药物杂志,1998,19(6):387-390.

[3]周淑平,苏芳. 胸腺肽制剂含量测定方法的研究[J].中国生化药物杂志,1993,14(4):37-40.

（收稿日期：2007-07-24）

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