磁朱丸对失眠大鼠睡眠时相的影响
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[摘要] 目的：观察磁朱丸对失眠大鼠睡眠时相的影响。方法：在恒温、恒湿、自动光控和电磁屏蔽实验条件下，采用大鼠皮层脑电描记方法，观察了磁朱丸对失眠大鼠睡眠时相的影响。结果：给予大鼠磁朱丸后，大鼠觉醒时间明显减少，睡眠总时间延长，主要表现为延长慢波睡眠Ⅱ期（SWS2）和快动眼睡眠（REMS）。结论：磁朱丸能延长失眠大鼠的SWS2和REMS。
[关键词] 磁朱丸；脑电图；失眠；睡眠时相
[中图分类号] R-332[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）01（b）-020-02
Effect of the Cizhu Pill on the sleep phase of insomnia rats
LI Er-xun**，SUN Chun-yu, LI Ting-li*，XU Guang-hui，GUO Leng-qiu，HUANG Li-li
（Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine ,Harbin150040,China）
[Abstract]Objective:To observe the effect of the Cizhu Pill on the sleep phase of insomnia rats.Methods:Under the conditions of constant temperature,constant humidity, light automatically and electromagnetic shielding, with the method of the cortical EEG inrats, observe the effect of the Cizhu Pill on the sleep phase of insomnia rats.Results:The results showed that the Cizhu Pill can obviously decrease the duration of W and increase TST,primarily prolong SWS2and REMS.Conclusion: The Cizhu Pill can prolong SWS2 and REMS of insomnian rats.
[Key words]Cizhu Pill；Electroencephalogram；Insomnia；Sleep phase
睡眠作为生命所必需的过程，是机体复原、整合和巩固记忆的重要环节，是健康不可缺少的组成部分。良好的睡眠可以使人消除疲劳，更好地恢复精神和体力。然而，随着现代社会生活节奏的加快、工作压力的加大，失眠成为人们生活中一种常见的疾病和其他身体疾病的诱因。因此，睡眠质量问题受到人们越来越多的关注。磁朱丸具有益阴明目、重镇安神作用，在中医临床中常用于治疗心肾不交引起的视物昏花、耳鸣耳聋、心悸失眠之证。本实验采用多导睡眠描记术（PSG）和电刺激诱导大鼠失眠的实验研究方法，通过对脑电图（EEG）的分析，观察磁朱丸对失眠大鼠睡眠时相的影响，为临床应用磁朱丸治疗失眠提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验药物
将神曲粉碎成细粉，过120目筛，按磁石∶朱砂∶神曲为2∶1∶4比例[1]混匀，备用，使用时用蒸馏水配成0.036 g/ml的混悬液。
1.2 动物
Wistar大鼠，雄性，体重（220±5） g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供，许可证号：黑动字第P00101006。
1.3 仪器
ND-97数字化脑电图仪(上海医疗器械高技术公司)， 恒温恒湿自动光控电子屏蔽室，大鼠脑立体定位仪（美国Stoelting公司），大鼠失眠刺激器（哈尔滨电工仪表研究所），有机玻璃笼（自制）。
1.4 方法
1.4.1手术操作采用戊巴比妥钠腹腔注射将大鼠麻醉（40 mg／kg）后，用脑立体定位仪固定，头部剪毛，消毒后，剪去头部皮肤，充分暴露颅骨，剥离骨膜， 用干脱脂棉擦净，直至表面干洁。分别于颅骨上（AP－2，R2；AP+2，R2）钻孔， 将2个直径1 mm不锈钢螺丝钉植入颅骨内，使之与硬脑膜接触，但不穿透硬脑膜， 作为皮层电极；在额骨正中（AP+5，R0）钻孔安置接地电极，并将电极螺丝钉制成微型插座，以牙科水泥固定[2~4]。术后将实验动物置于特制的有机玻璃笼内，置于屏蔽室内单笼饲养。连续3 d腹腔注射4万U青霉素，恢复7 d待测。在正式进行脑电描记前将附有导线的插头与大鼠头部电极插座相连，进行大鼠对电极插座连接的适应性训练，训练4.5 h。
1.4.2 实验环境控制实验环境为通风、隔音、避光、电磁屏蔽状态，采用自动定时光控系统对大鼠生活环境实行每天12 h的明暗光照周期处理，屏蔽室温度（22±2）℃,相对湿度45％～50％。
1.4.3 ND－97数字化脑电图仪运行参数在脑电图描记前设置低频滤波截止频率为0.5 Hz，高频滤波为35 Hz，仪器增益为200，速度为2（每屏20 s）。
1.4.4大鼠睡眠时相区分标准和定量分析指标根据大鼠脑电图，并参考有关文献 [5~9] ，将大鼠觉醒－睡眠周期分为觉醒（Wake）、慢波睡眠Ⅰ期（SWS1）、慢波睡眠Ⅱ期（SWS2）和快动眼睡眠（REMS）四个时相，总睡眠时间（TST）包括SWS1期、SWS2期和REMS期。规定任何一个独立的睡眠时相持续时间至少在20 s以上，并以每20 s作为一个分析单元。
觉醒期：大鼠处于不同的行为状态时，其脑电信号的差别也较大，大致可分为两种脑电图：当大鼠处于走动、爬高、探寻和关注行为时，皮层脑电图以θ波（6～9 Hz）为主；当大鼠擦脸、舔身或静立时，皮层脑电图以不规则的低幅高频信号为主。
SWS1期：大鼠静卧不动，闭目；有时埋头卷身熟睡，皮层EEG以高幅慢波（0.5～5 Hz）、梭形波（10～15 Hz）为主要特征，其中高幅慢波在每个统计单元内所占比例少于50％。
SWS2期：该期皮层脑电图特征也以梭形波和高幅慢波为主，只是高幅慢波比例大于50％。
REMS期：皮层脑电图以低幅高频信号θ波为主，与清醒状态并无明显区别，本方法可通过视频监控系统对大鼠行为活动状态加以区别。因觉醒状态不能直接进入REMS睡眠状态，故REMS睡眠期之前总有SWS睡眠期的存在，而REMS睡眠可直接转为觉醒期或转为SWS睡眠期。REMS持续长度一般不会超过3 min。
1.4.5 实验步骤术后第8天记录非应激状态下的正常大鼠的脑电(EEG)信号，描记时间为9∶00~17∶00，共计8 h。次日上午9∶00，将大鼠置于失眠刺激器内，通过笼底部的电栅刺激大鼠足底部8 h，刺激参数为：电流0.5 mA，波宽15 ms，频率1 Hz，刺激期间电刺激可被两个可调定时器自动启动，这样每刺激30 s间隔30 min, 以造成大鼠失眠[10]。同时进行皮层脑电的描记，描记时间从早9∶00~17∶00共计8 h。刺激结束后第二天，每天8∶30经灌胃途径给予实验动物0.36 g生药量/kg的磁朱丸，连续给药7 d，于末次给药30 min后，再对大鼠进行8 h的脑电描记和电刺激，分别计算此描记时间段内给药前后失眠大鼠Wake、SWS1、SWS2、REMS、TST内各自的总时间，应用自身配对t检验法进行统计分析。
2 结果
实验结果显示，电刺激后大鼠的W、TST与电刺激前相比均有显著性差异，表明失眠模型制作成功。给予供试药物后，明显减少失眠大鼠的觉醒时间，延长睡眠总时间；在睡眠时相上，对SWS2及REMS期均有明显延长作用。
3 讨论
现代医学认为，SWS2期属于深睡，有利于机体的恢复。能使深睡期延长，可以更有效地改善睡眠，提高睡眠质量。REMS是睡眠的特殊时相，能使REMS延长，则有利于机体精力的恢复，促进脑功能的发育和发展。
本研究结果表明，磁朱丸能延长失眠大鼠的SWS2及REMS期，表明该药对失眠大鼠有改善睡眠、提高睡眠质量的作用。
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（收稿日期：2007-12-25）
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