HPLC测定五味子根茎叶中6种木脂素含量

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[摘要] 目的：比较五味子根茎叶6种木脂素含量的差异。方法：采用色谱柱Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈-水，梯度洗脱；检测波长 250 nm，流速 1 mL·min-1，柱温 30 ℃。结果：野生五味子根茎叶总木脂素含量高于栽培品种，其根茎叶总木脂素含量差别挺大，其中根>主枝>侧枝>叶。结论：该方法稳定、可靠，能较好的对五味子根茎叶进行质量评价。

[关键词] 五味子；根茎叶；木脂素

中药五味子是著名的长白山道地药材，具有益气生津、补肾养心、收敛固涩的作用[1]。五味子中含有多糖、挥发油和木脂素类成分[2]。五味子植物Schisandra chinensis （Turcz.）Bail1.的藤茎，具有很好的保健、调味功能[3]。民间常采其藤茎晒干代花椒炖肉做菜用，习称“山花椒藤”[4]。目前，现有文献对五味子及炮制品进行测定[5-6]，对五味子藤茎的含量测定还不够全面[7-8]。本文选用多个典型样地进行分析，可为五味子根、茎、叶质量评价及控制提供数据。

1 材料

五味子藤茎（采于辽宁省辽东地区），经辽宁中医药大学药学院药用植物教研室王冰教授鉴定为木兰科植物五味子S. chinensis的藤茎，见表1。色谱乙腈（美国Fisher）、分析甲醇（天津大茂）、重蒸馏水。对照品五味子醇甲（110857-200507）、五味子酯甲（111529-200503）、五味子甲素（110764-200609）、五味子乙素（110765-200710），购自中国食品药品检定研究院，五味子醇乙、五味子丙素，购自成都思科华生物技术有限公司，所有对照品纯度均大于98%。

Agilent 1100高效液相色谱仪，四元泵，VWD检测器；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；JD200-3G型电子分析天平（沈阳龙腾电子有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公司）；万能粉碎机（屹立牌）；KQ3200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；标准筛（浙江上虞市道墟五四仪器厂）；JD60-4型电子分析天平（沈阳龙腾电子有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0 ～ 20 min，50% A； 20～32 min，50%～55%A； 32～38 min，55% ～65% A； 38～45 min，60%A； 45～60 min， 60% A）；检测波长 250 nm，流速 1 mL·min-1，柱温 30 ℃，进样量10 μL。色谱图见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 分别取五味子根、茎、叶粉末

约1.0 g（过40目筛），精密称量，置50 mL三角瓶中，加甲醇约23 mL，常温下超声处理30 min，滤过，滤液用甲醇定容到25 mL量瓶中，摇匀，静置。经过0.45 μm的微孔滤膜， 取续滤液作为供试品溶液，备用。

2.2.2 对照品溶液 分别取五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素对照品适量，精密称定，色谱甲醇超声溶解，并定容至25 mL量瓶中， 经过0.45 μm的微孔滤膜， 依次得到质量浓度为0.205 2，0.209 2，0.213 2， 0.197 6，0.203 6，0.202 8 g·L-1的对照品溶液，备用。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系的考察 分别精密吸取各对照品溶液0.1，0.25，0.5，0.75，1.0，1.5 mL置于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度。按上述色谱条件同法进样20 μL，测定峰面积。分别以对照品质量浓度X（mg·L-1）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。得到回归方程如下：五味子醇甲Y=35.41X+38.37，R2=0.999 8；五味子醇乙Y=30.04X-10.66，R2=0.999 9；五味子酯甲Y=21.81X+7.518，R2=0.999 9；五味子甲素Y=36.54X-17.65，R2=0.999 7；五味子乙素Y=26.88X+19.44，R2=0.999 8；五味子丙素Y=23.47X+8.172，R2=0.999 7。结果表明五味子醇甲在2.05～30.7 mg·L-1、五味子醇乙在2.09～31.3 mg·L-1、五味子酯甲在2.13～31.9 mg·L-1、五味子甲素在1.97～29.6 mg·L-1、五味子乙素在2.03～30.5 mg·L-1、五味子丙素在2.02～30.4 mg·L-1呈良好线性关系。

2.3.2 重复性试验 取同一批样品，按照2.2.1方法平行制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下同法进样测定，根据所得6个木脂素类成分的峰面积并计算其含量。结果样品中6个指标含量的RSD依次为1.7%，1.5%，1.7%，1.9%，2.0%，1.9%，表明重复性良好。

2.3.3 精密度试验 精密吸取相同五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素与五味子丙素混合对照品溶液20 μL（等比列混合），在上述色谱条件下连续进样6次，记录峰面积并计算RSD。结果五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素与五味子丙素峰面积的RSD依次为1.8%，1.7%，1.7%，1.9%，1.8%，2.0%，结果表明精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液20 μL，在0，2，4，6，8，12 h时间点分别进样并测定峰面积，6种木脂素峰面积的RSD依次为2.1%，1.9%，2.0%，1.8%，2.0%，1.9%。结果表明，供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.3.5 回收率试验 选取已知含量的同一批次五味子藤茎粉末，每份约1.0 g，精密称量，分别加入5，5，1，1，3，1 mL上述2.2.2对照品溶液，按2.2.1方法制备，平行操作此过程，制得6份回收率试验供试品溶液，在上述色谱条件下同法进样测定，计算回收率，结果见表2。

2.4 样品含量测定 分别精密吸取供试品溶液10 μL，在上述色谱条件下进样，记录峰面积并根据外标法中的标准曲线法计算含量，样品测定结果见表3，4。

3 讨论

北五味子作为常用的中药，主要来源于野生资源，由于森林面积的减少及五味子果实的掠夺性开采，致使北五味子的产量逐年减少。茎叶来源丰富，对根茎叶等非药用部位的开发也是必不可少。

本实验提取溶剂考察了不同浓度乙醇与甲醇，并考察了超声提取时间10，15，30，45，60 min，结果表明，甲醇超声提取0.5 h，提取效率较高且方法简便易操作。

流动相考察了不同比例的甲醇-水和乙腈-水，最后流动相选择乙腈-水梯度系统，分离效果较好。

本研究选取辽宁省10个典型样品，5个野生，5个栽培。从表3中可以看出，五味子根茎叶总木脂素含量差别挺大，其中根>主枝>侧枝>叶；表3中可以看出，五味子根茎叶中五味子醇乙含量明显较高；表4可以看出，野生五味子根茎叶总木脂素含量高于栽培品，但二者差距不是太大，优良的栽培品种完全可以代替野生品。

[参考文献]

[1] 中国药典.一部[S]. 2010：61.

[2] 沈文，叶正良，郭巧生，等. 东北不同产地五味子药材品质研究[J].中国中药杂志，2010，35（22）：3016.

[3] 武新亮，赵敏，邹连春，等.北五味子藤茎的化学成分研究[J].时珍国医国药，2011，22（2）：290.

[4] 张崇禧，徐海波，贾桂燕，等. 北五味子藤茎的生物学研究[J].人参研究，2005（1），15.

[5] 周艳，祁英杰，闫小玉，等. 北五味子及其不同炮制品中6 种木脂素类成分的含量测定[J].中国中药杂志，2011，36（24）：3449.

[6] 胡俊扬，陆兔林，毛春芹，等. hplc法同时测定五味子饮片中6 个木脂素类成分的含量[J].药物分析杂志，2011，31（12）：2225.

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[8] 姚莹，上官盈盈，王玮. HPLC测定北五味子果实、藤茎超临界萃取物中木脂素的含量[J].中国药学杂志，2010，45（21）：166.

HPLC determination of six lignans in different parts of Schisandra chinensis

DING Pu， WANG Bing*， SONG Xin， LI Xian-kuan， CHEN Ting， LIU Cong

（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Dalian 116600， China）

[Abstract] Objective： To compare the content of six lignans of different parts of Schisandra chinensis. Method： Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm） was used with acetonitrile-water gradient system as mobile phase. Wave length was 250 nm. The flow rate was 1 mL·min-1. Column temperature was 30 ℃. Result： The total lignans content of wild Schisandra chinensis was higher than that of the cultivated varieties. The total lignans content of different parts varied significantly， wherein the root > main branch > side branches > leaf. Conclusion： This method is stable， reliable， can be used for the quality evaluation of different parts of Schisandra.

[Key words] Schisandra chinensis； stem； different parts； lignans

doi：10.4268/cjcmm20131308