藏药秦皮接骨胶囊提取工艺研究

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[摘要] 目的 优选秦皮接骨胶囊的提取工艺。 方法 采用正交试验法，以秦皮甲素与秦皮乙素总量和西贝母碱总量为指标，结合直观分析和方差分析综合优选秦皮接骨胶囊的提取工艺。 结果 选定的最佳工艺为加70%乙醇提取2次，每次加8倍量乙醇，提取3 h。 结论 优选的工艺合理、稳定，适合工业化生产。

[关键词] 秦皮接骨胶囊；秦皮甲素；秦皮乙素；西贝母碱；提取工艺

[中图分类号] R943 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2013）04（c）-0161-02

秦皮接骨胶囊为藏药骨科经典验方，由秦皮、川西小黄菊、龙骨、川贝母等组成，主要功能活血散瘀、疗伤接骨、止痛，用于跌打、筋骨扭伤、瘀血肿痛等症，临床疗效确切[1]。由于现有胶囊剂为全药粉入药，卫生学指标难以控制，不适合工业化生产，且患者服药量较大，因此，进行技术革新，研发一种适合工业化生产的提取工艺，优化秦皮接骨胶囊的制剂工艺具有重要意义。本文采用正交试验法，以秦皮中秦皮甲素和秦皮乙素总量，及川贝母中西贝母碱含量为评价指标，考察了秦皮接骨胶囊的乙醇提取工艺。现报道如下：

1 仪器与试药

秦皮接骨胶囊处方药材均由金诃藏药股份有限公司提供，经青海省藏医院尼玛鉴定，均为正品；秦皮甲素（中国食品药品检定研究院，110740-200510，供含量测定用）；秦皮乙素（中国食品药品检定研究院，110741-200707，供含量测定用）；西贝母碱（中国食品药品检定研究院，110767-200901，供含量测定用）；日立L-2100型高效液相色谱仪（日立公司）；UV-2450型紫外可见分光光度计（SHIMADZU）；RE-52型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热套；电子天平。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

秦皮接骨胶囊由秦皮、川贝母、川西小黄菊和龙骨组成，其中秦皮、川贝母、川西小黄菊三味药材有效成分均可溶于乙醇[2-4]。根据藏医药理论，秦皮在处方中起主要治疗作用，有效成分主要为秦皮甲素和秦皮乙素，川贝母主要成分为西贝母碱，在处方中，川贝母起辅助治疗作用，而对川西小黄菊的文献报道较少。因此，采用正交试验法，以秦皮中秦皮甲素和秦皮乙素的总量，以及川贝母中西贝母碱的含量为考察指标，考察上述3味药材的乙醇提取工艺。

2.1 因素水平的测定

以加醇量、提取时间、提取次数、乙醇浓度为因素，因素水平见表1。

2.2 提取方法

按处方比例，取秦皮56.5 g，川西小黄菊40.0 g，川贝母40.0 g，共3味药材，总计136.5 g，共9份，按照正交试验设计条件进行处理，提取液分别回收乙醇，浓缩至100 mL，备用。

2.3 秦皮甲素和秦皮乙素的HPLC测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（80∶20）；流速：1 mL/min；检测波长：334 nm；柱温：室温；理论板数按秦皮甲素峰计算应不低于2000[5-6]。

2.3.2 对照品溶液的制备 取秦皮甲素对照品、秦皮乙素对照品各适量，加甲醇制成每毫升含秦皮甲素0.1 mg、秦皮乙素0.05 mg的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 取上述“2.2”项下的备用浓缩液1 mL，加甲醇稀释至25 mL，摇匀，即得。

2.3.4 测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，测定，以外标法计算，即得。

2.4 西贝母碱的测定方法

2.4.1 色谱条件 色谱柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.05%三乙胺溶液（75∶25）；流速：1 mL/min；蒸发光散射检测器；柱温：室温；漂移管温度：40℃；理论板数按西贝母碱峰计算应不低于5000[7-8]。

2.4.2 对照品溶液的制备 取西贝母碱对照品适量，加甲醇制成每毫升含西贝母碱0.1 mg的溶液，即得。

2.4.3 供试品溶液的制备 取上述“2.2”项下的备用浓缩液10 mL，水浴蒸至近干，加甲醇溶解，并稀释至5 mL，摇匀，即得。

2.4.4 测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得。

2.5 结果

以秦皮甲素和秦皮乙素的总量为其中一个考察指标，权重系数为0.7；以西贝母碱的总量为另一个考察指标，权重系数为0.3，对每份样品综合评分。计算公式：综合得分=（秦皮甲素与秦皮乙素总量/最大含量）×0.7×100+（西贝母碱总量/最大含量）×0.3×100。正交试验结果见表2，方差分析见表3。

由表2可知，极差最大的为B因素提取时间，四个因素综合评分的影响排序是：B>D>C>A。表3方差分析结果提示，B因素提取时间和D因素乙醇浓度对试验结果有显著性影响，结合表2中的极差分析，优选B3和D2；A因素加醇量对试验结果影响最小，三个水平以A2最大，结合试验中药材的吸液量，选择A2；C因素提取次数的三个水平以C2最大，且C1与C2有一定差距，为避免有效成分丢失，优选C2，因此，最佳提取工艺条件为A2B3C2D2，即加70%乙醇提取2次，每次加8倍量乙醇，提取3 h。

2.6 验证试验

为验证最佳提取工艺的稳定性，取秦皮56.5 g，川西小黄菊40.0 g，川贝母40.0 g，共3味药材总计136.5 g，共3份，分别加70%乙醇提取2次，每次加8倍量乙醇，提取3 h，分别合并提取液，回收乙醇，并浓缩至100 mL，测定秦皮甲素和秦皮乙素总量以及西贝母碱的含量，结果见表4。可见经正交试验优选的最佳提取工艺稳定，可行。

3 讨论

秦皮接骨胶囊为藏药经典制剂，临床疗效确切。笔者根据处方中药味所含成分的理化性质，结合其在处方中发挥的作用，通过正交试验，优选了处方中3味药材的提取工艺。预试验提示，秦皮接骨胶囊中药材出膏率普遍较低，因此，在正交试验中没有选择药材出膏率作为考察指标。验证试验提示，该正交试验优选的提取工艺稳定，提取后的乙醇可回收后重复使用，提取成本较低，可用于工业化生产。该试验为秦皮接骨胶囊制备工艺的进一步优化提供了试验依据。

[参考文献]

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[2] 张琦，张新申，代勇. 正交试验法优选秦皮香豆素醇提工艺[J]. 林产化学与工业，2009，29（3）：89-92.

[3] 李玉美. 中药川贝母的研究现状[J]. 中成药，2008，30（8）：1202-1205.

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[6] 靳子明，窦霞. 高效液相色谱法测定藏密骨宝胶囊中秦皮甲素及秦皮乙素的含量[J]. 中国医院药学杂志，2009，29（22）：1967-1968.

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（收稿日期：2013-01-22 本文编辑：袁 成）