对L菌的认识
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于今对L菌的认识已不仅是细菌形态学问题,而是涉及到传染病学、遗传学、病理学、细胞生物学、免疫学及生物制品质控等广泛领域的重要问题[1]。因而笔者依据文献资料介绍如下。
1.L菌的形态与生物学特性
1.1形态学特性(1)细胞壁缺损:此型细菌虽然胞壁缺如或残缺不全,但是只要其胞浆完整无损,在高渗环境中依然具有生命力,可生长繁殖;(2)基本形态:高度多形性,可表现为球状、杆状、链状及丝状形,且大小不一;菌落微小,直径只1μm左右;在琼脂培养基上,进而细胞壁便遭破坏菌落内陷,与普通的菌落外凸不同;在低倍显微镜下,菌落呈“油煎蛋”样;在高倍镜下,菌落边缘为大形菌,比亲本菌株要大,中心为小形菌。
1.2生物学特性(1)嗜高渗性:只有在高渗环境中才能生长,在普通的培养基上不生长;由于已经失去了坚固的菌壁,只剩下一层胞浆膜,故在非高渗的环境中,菌体就会迅速地溶解而死亡;如L型金葡菌在蒸馏水中3min就会裂解,2h后消失,在0.1%～0.2%的氯化钠溶液中,15min后,细菌减少90%,而在2%～15%的氯化钠溶液中,菌体则无变化;(2)返祖性:这是一个重要的生物学特性;当抑制、破坏菌壁的因素去除后,L菌又恢复了完整的细胞壁,变回亲本菌株,又有了亲本菌株的特性,这就是返祖性。返祖性又可分为下列两种,即①易变性L菌:当抑制、破坏细胞壁的因素去除后很快回复到亲本菌株的L菌称之;临床分离到的多为此型;通常刚形成的或细胞壁缺陷较轻的L菌较易返祖,细胞壁完全缺如者则不易返祖;②稳定性L菌:当抑制、破坏细胞壁的因素去除后,经过多次传代仍然保持着L菌的特性称之;严格地说,只有这一型的细菌才能称为L菌;(3)弱抗原性:细菌的主要抗原在胞壁及其表面的附属物上,一旦菌壁缺失,就会导致抗原性大为减弱,乃至消失;L菌可长存于宿主的体内,并抗拒宿主的防卫机制;它虽具抗原性,但抗原性薄弱,因此能逃避宿主免疫系统的自卫性攻击;这就是L菌得以长存于宿主体内的原因。
2.L菌的培养
它可分为3种类型,即液体增菌培养基、液体培养基和固体培养基。在普通培养基中可加入渗透压稳定剂20%的人血浆(或马血浆)和5%氯化钠,也有用10%马血浆和3%～5%氯化钠(或12%～15%蔗糖);固体培养基现多用成品Kagan培养基;国内多用改良培养基。要用特殊的高渗培养剂是因为L菌的胞膜内蛋白质含量高,导致渗透压高于胞膜外,培养时需要有一定的高渗环境才能稳住菌形不变。这也就是L菌常规培养阳性率不高的原因。现在知道L菌也存在于红细胞内,当红细胞裂解时此菌就大量释入于血中,故有学者就把采得的血标本用溶血法把红细胞溶解来培养L菌,结果常规培养检出率为1.4%(3/210份),溶血培养检出率为48.5%(102/210份),检出率明显提高[3]。
3.L菌与支原体的实验室区别
两者极易混淆,必须认真鉴别,其鉴别点如下:L菌的形成是外界因素影响所致,而支原体则是固有形态,在分类学上毫无关系;L菌的菌落较大,为0.5～1.0mm,支原体的菌落则较小,为0.1～0.3mm;L菌有返祖性,支原体则无此特性;保色时间有别,L菌因为菌壁缺陷,致结晶紫易渗入,和支原体一样均可被染成蓝色,但前者的保色时间较长,后者则相反,很快褪色;两者无共同的抗原性,不发生交叉反应;L菌在增殖期不需要胆固醇,而支原体则需要此种物质。
4.L菌与临床疾病
此型细菌可引起人类各部位的感染,并反复发作致疾病慢性化。据报道,曾用过抗生素的出血原因不明的慢性尿道炎患者作尿L菌培养,检出率竟高达96%。至目前已从败血症、流脑、伤寒、布氏菌病、肺炎、关节炎、骨髓炎、子宫内膜炎、宫颈糜烂、心内膜炎和肺结核等患者的相关标本中分离到了L菌,且多呈慢性过程。结核菌在宿主免疫力增强和药物作用下可被消灭或转变为L菌,致使临床症状缓解;找不到致病菌的复发型结核病,有可能是L菌所致;有学者认为如果分离到结核菌的L型,便可拟诊为结核病,且处于活动期。脑膜炎双球菌的L型及其返祖的亲本菌株,均可引起非典型性化脓性脑膜炎。在抗生素用于临床前的年代里,在风湿性患者的血液中常分离到溶血性链球菌,但当今则否,在部分此种患者的血液中分离到的则是此菌的L型。很多的尿道炎患者,尿标本普通培养阴性,在改用高渗透压培养基后,即培养到了L型致病菌,现在用溶血法培养检出率大为提高;L菌培养阳性多见于病程的缓解期;在一定条件下,L菌株会返祖为亲本菌株,于是不断复发,继而转为慢性尿道炎。慢性宫颈炎中,L菌最高占80.0%～82.4%,是宫颈炎持久不愈的重要原因;子宫内膜炎也可为L菌所致,并引起不育症;其基底层血管丰富,有利于L菌长期生存、繁殖,致内膜长期不规则地出血。有报道发现功能性子宫出血者也屡见L菌感染;因为子宫出血易并发感染,故多用抗生素预防性给药,这就导致了L菌的产生;一旦宿主免疫力低下,L菌便返祖成为亲本菌株,毒力大增,以致反复出现临床症状;子宫内膜炎表层可因脱落、刮宫后而清除或致炎症减轻,但基底层感染却难以消失,其所感染的亲本菌株常于抗生素或宿主因素诱导下转变为L菌,并感染于间质层。L菌也是医院内感染的重要致病菌之一;据一组报道从1870例住院患者的血、尿、胸水、胆汁和脑脊液做细菌常规培养,均阴性,而做L菌培养却分离到427株L菌,检出率为22.8%,菌种达11种之多,说明L菌医院内感染的严重性。L菌的毒力要比亲本菌株低,故常无急性过程,菌株长期保存于宿主体内,使患者成为持久的传染源。
L菌感染的诊断必须依据细菌学,因其生长缓慢,故细菌学诊断较为困难,培养前必须为其选择好适宜的培养基,创造好良好的条件。