微柱凝胶法鉴定婴幼儿血型的探讨
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【摘要】 目的 分析微柱凝胶法在婴幼儿血型鉴定中的临床应用价值。方法 选取我院2010年6~12月份门诊或住院350名0~4月龄婴幼儿血标本，采用试管法和微柱凝胶法进行ABO正反定型和Rh(D)血型鉴定。结果 在鉴定婴幼儿ABO和Rh(D)血型时，试管法正反定型符合率80.6%(282/350)，微柱凝胶法符合率98.3%(344/350)，且微柱凝胶法的正定型结果全部正确。RH(D)检测结果两法一致。结论 微柱凝胶法检测婴儿的ABO和Rh(D)血型时，具有操作简单、快速、准确、易于标准化、优于传统试管法，是血型鉴定的好方法。
【关键词】微柱凝胶技术；婴幼儿；血型
ABO血型鉴定对临床输血和疾病的诊断十分重要。传统的血型鉴定方法是采用玻片法和试管法，不仅费时费力，而且敏感性差，同时操作难以规范化、标准化，检测结果不易保存［1］。鉴定错误可以引起严重后果。婴幼儿的血型鉴定常因抗体效价低或红细胞血型抗原形成不足而出现不凝集或凝集很弱，给血型鉴定带来一定困难。微柱凝胶试验是一种血型免疫学检测的新技术，在世界先进国家，该技术成为血型鉴定的通用方法，但在我国尚未普遍开展。其原理是将分子排阻层析原理应用于血型血清学检测，即在充有凝胶的微柱腔中，加入红细胞和血清［2］。如果血清中有该红细胞特异性抗体，则形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如血清中无该红细胞特异性抗体，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定的离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔尖低部。现就采用微柱凝胶法鉴定婴儿ABO及Rh(D)血型的结果进行分析，报告如下。
1 资料与方法
1.1 仪器 试剂来源TD-3A型血型血清学用离心机由长春博研科学仪器有限提供，BASO离心机有台湾贝索提供。微柱凝胶血型卡及ABO反定型细胞，均由长春博迅有限公司提供。抗A抗B血清有南京欣迪药业工程有限公司提供。RH(D)由上海血液生物医药有限公司提供。
1.2 检测对象 选择我院2010年6~12月门诊或住院婴幼儿共350例，采末梢或静脉血，用EDTA抗凝。
1.3 检测方法
1.3.1 试管法ABO及Rh(D)定型 正定型取受检者5%红细胞悬液50 μl，抗-A，抗-B，抗-D血清各50 μl，反定型取受检者血清50 μl，A、B、O细胞各50 μl混匀，3200r/min离心15sec，显微镜观察结果，镜下凝集者应判为阳性。
1.3.2 微柱凝胶法ABO及Rh(D)定型 操作按照其说明书执行，在微柱凝胶血型卡中的A、B、D和Control凝胶管腔中各加受检者0.8%红细胞悬液50 μl，在反定腔中各加0.8%A、B细胞和患者血清各50 μl，置卡于专用定速离心机内离心，离心速度和时间均按厂商推荐标准执行，肉眼观察结果。
2 结果
350例婴幼儿检测ABO血型，试管法正反定型符合率80.6%(282/350)，68例不符合的标本用微柱凝胶技术复查，仍有6例正反定型不符，占1.7%(6/350)，符合率为98.3%，后证实这6例微柱凝胶正定型结果是可靠的，其反正定型因抗体弱或未产生而错误。试管法结果为“镜下散在凝集(mf)”者在微柱凝胶法显示出较强的凝集。Rh(D)定型两方法相同。
3 讨论
婴幼儿ABO血型红细胞定型与血清定型不符在临床上比较常见，为血型工作者的一大难题，究其原因大都与婴儿出生后在其个体发育过程中红细胞表面血型抗原不足、抗体产生量少或不产生有关。一般认为，A、B型新生儿的A、B抗原数量约为成人的1/4，O型新生儿的H抗原约为成人的1/5 ;其ABO抗原弱的原因并非缺少糖苷转移酶，而是由于红细胞上酶的底物少，婴儿可以从母体获得IgG ABO抗体，但IgM ABO抗体却在出生后3-6个月才合成［3,4］。而人体天然血型抗体为IgM，但不同个体因所处环境不同，受天然血型物质刺激的程度与强度也不同，且不同个体对天然血型物质的反应性也不同，从而使某些婴儿不产生天然血型抗体或其效价极低，与相应红细胞不产生可见的凝集反应。因此人们一直在寻找更为敏感的检测技术。另有学者认为，6个月以内的婴幼儿其血清中抗体比较微弱，以标准红细胞检测其血清中的抗体，鉴定意义不大，而应以标准血清测定红细胞抗原来鉴定血型。微柱凝胶技术是建立在传统的血型血清学方法检测血型基础上的一项全新技术，它是在微柱管中利用凝胶介质进行的一种经过改良的血凝反应红细胞抗原与相应抗体在凝胶介质中可出现肉眼可见的凝集反应，此方法还能通过正反对照显示出特异，因此克服了血型血清学方法检查的不足;该技术的敏感性也显著提高，文献报道较试管法可提高10倍左右;此外，微柱凝胶法具有准确，可重复性强、操作简便、保存时间长、易于规范化和标准化等优点。微柱凝胶法对所有检测对象来说，正反定型的符合率高达98.3%，明显高于试管法80.6%，这充分说明微柱凝胶法在对婴幼儿患者的血型检测中确实具有高度敏感性的特点;本文同时还发现微柱凝胶试验的结果清晰易读，保存时间长，且加样量少，因此解决了婴幼儿标本血样少的问题。本试验中婴幼儿红细胞定型与血清定型不符的主要原因仍是由于婴儿相应抗体未产生或产生的量很少引起，这与理论相符。本文认为，使用微柱凝胶技术鉴定血型尤其是鉴定婴幼儿血型确实给血型工作者带来了很大的方便，其结果准确、可靠、敏感性高，这对确保临床安全输血及临床诊断疾病提供了可靠的技术支持和保障，具有临床实用意义，值得应用和推广。
参考文献
［1］ 罗伟琼，杨玉发,李庚娣.微柱凝胶试验技术在新生儿溶血病检测中的应用.临床和实验医学杂志,2008,(07).
［2］ 章文,徐刚,跃平.微柱凝胶技术在婴幼儿输血中的应用.国际检验医学杂志,2006,(04).
［3］ 张钦辉.临床输血学.上海:上海科学技术出版社,2000:97-100.
［4］ 王培华.输血技术学.北京:人民卫生出版,1998:135-136.