HPLC测定增液承气口服液中梓醇含量
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摘要：目的 建立增液承气口服液中梓醇的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Eclipse XDB C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99），检测波长为210 nm，柱温为30 ℃，流速为1.0 mL/min。结果 梓醇对照品进样量在0.052～0.258 ?g（r=0.999 9）范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，平均加样回收率为98.23%（RSD=0.76%，n=9）。结论 所建立的定量方法准确、重复性好、专属性强，可作为控制和评价本品质量的方法。
关键词：增液承气口服液；梓醇；高效液相色谱法；含量测定
增液承气口服液为增液承气汤的基础上创制而成，由地黄、玄参、麦冬、大黄4味中药组成。增液承气汤出自清代医家吴鞠通《温病条辨·中焦篇》，具有甘凉濡润、滋阴增液、软坚降泄、通腑泄热之功效，用于治疗温病阳明腑实兼阴液亏损之证。临床上主要用于治疗中老年习惯性便秘、阴虚肠燥便秘证、慢性呼吸衰竭、慢性支气管炎急性发作、流行性出血热少尿期等。随着增液承气汤在临床上的广泛应用，为便于患者服用和携带方便，将其研制开发为增液承气口服液。地黄和玄参为君药，其主要有效成分梓醇为环烯醚萜苷类化合物，具有神经保护、抗老年性痴呆、抗炎、利尿等药理作用[1]，与增液承气口服液主要药理作用相吻合，因此，有必要对梓醇进行含量控制，从而控制药品质量，保证疗效。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，包括G1311A四元泵、G1314A VWD检测器、Agilent1100化学工作站（美国Agilent仪器公司）；Metler-D2025型十万分之一电子天平（梅特勒仪器上海公司）；DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；KH-250DB型数控超声波提取器（昆山禾创超声仪器有限公司，Input：90 W；Output：80 W；FREQ：56 kHz）；HHS-24型电热恒温水浴锅（江苏大地自动化仪器厂）。
梓醇对照品（中国药品生物制品检定所，批号110808-200508），乙腈、甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限责任公司），水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。增液承气口服液样品（甘肃省张掖市人民医院，批号20120101、20120502、20120702、20120902、20121202）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Eclipse XDB C18柱（PN 993967-902，4.6 mm×150 mm，5 ?m）；检测波长：210 nm；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 ?L；理论板数按梓醇峰计算应不低于3000；外标法定量。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h的梓醇对照品6.46 mg，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，超声处理（80 W，56 kHz）10 min，放至室温；精密吸取上述溶液5 mL，置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1 mL含梓醇12.92 ?g）。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取样品口服液5 mL，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至50 mL量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方制备工艺制成缺玄参和地黄的阴性供试品，按供试品溶液的制备方法项下方法制得阴性对照溶液。
2.5 专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（5.72 min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本方法可行，见图1。
2.6 线性关系考察
精密吸取上述对照品溶液4.0、8.0、12.0、16.0、20.0 ?L，注入液相色谱仪，测定梓醇对照品的峰面积值。以对照品进样量（?g）为横坐标，以峰面积值（AREA）为纵坐标进行线性回归，梓醇的回归方程为：Y=235.340X-0.057，r=0.999 9。结果表明，梓醇对照品进样量在0.052～0.258 ?g时，与峰面积值具有良好的线性关系。
2.7 精密度试验
精密吸取同一浓度对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，重复进样6次，进样量10 ?L，记录色谱图，结果梓醇峰面积RSD=0.56%，表明本方法的精密度良好。
2.8 稳定性实验
取上述供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h进样10 ?L，按“2.1”项下色谱条件测定，结果梓醇峰面积RSD=1.10%。结果表明，梓醇含量在8 h 内基本稳定。
2.9 重复性试验
分别精密称取同一样品（批号20120902），共6份。按样品含量测定方法测定，结果梓醇峰面积RSD=1.35%，说明本方法的重复性良好。
2.11 样品测定
取5批样品，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液。取对照品溶液、供试品溶液，经0.45 ?m针筒过滤器过滤，精密吸取10 ?L进样，按外标法计算样品中梓醇的含量，结果见表2。
3 讨论
在色谱条件选择中，紫外扫描中，梓醇对照品溶液在190～400 nm 的最大吸收在210 nm，与药典相同[2]。在确定色谱分离条件时，对甲醇、乙腈、不同浓度的磷酸溶液等不同流动相不同比例进行多次选择比较，结果当乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）时，分离效果好且分离时间短，理论板数按梓醇峰计算不低于3000，并参考文献[3]确定本试验的检测条件，梓醇能够达到基线分离，峰形好，保留时间相对适中，分离度较好，柱压明显降低，其他成分无干扰。
测定结果表明，5批增液承气口服液中梓醇含量差异较大，这可能和原料的质量和生产工艺有关。根据单味药地黄和玄参中梓醇的含量限度，结合本药品中地黄和玄参所加量和制剂工艺中梓醇的平均转移率，建议本品梓醇的含量限度为：本品每1 mL含地黄和玄参以梓醇（C15H22O10）计，不得少于0.45 mg。
hplc测定梓醇的报道很多[3-4]，本试验建立的含量测定方法专属性强，检测可排除其他非测定物质的干扰，测定结果准确，相关性好，为增液承气口服液的质量控制提供了依据。同时，可为含有相同药材的中药复方制剂定性定量方法的确定提供参考。
参考文献：
[1] 李军，张丽萍，张震凌.地黄的研究进展[J].河南中医学院学报，2005， 20（6）：79-83.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：115-116.
[3] 郝武常，朱宇红，朱志峰，等.炮制对地黄中梓醇含量的影响[J].中国中药杂志，1997，22（6）：3451-3454.
[4] 和健，王建国.HPLC法测定清消颗粒中梓醇的含量测定[J].中国中药杂志，2003，28（9）：883-885.