HFMD幼儿免疫变化

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肠道病毒 71 型（EV71） 所致手足口病（hand-foot-mouth disease， hfmd） 临床表现差异很大。 本文通过对我院在 2011 年 1 月至 6 月期间收治的 90例 EV71 型 HFMD 患儿细胞免疫功能的分析， 探讨细胞免疫功能改变在 EV71 感染发生发展中的作用以及与疾病严重程度的关系。

1 对象与方法

1．1 对象

2011 年 1 — 6 月期间收治的 HFMD 患儿， 均符合中华人民共和国卫生部颁发的《手足口病诊治指南（2010 年版）》诊断标准， 且外周血 EV71-RNA检测阳性。 其中， 56 例患儿无合并症， 作为普通组， 男 36 例、 女20 例， 平均年龄（2．23 ± 1．43）岁； 34 例患儿经脑脊液检查， 明确合并脑膜脑炎，作为重症组， 男 18 例、 女 16 例， 平均年龄（2．28 ±1．19） 岁。 另以 23 例同期外科收治腹股沟斜疝患儿作为对照组， 男 19 例、 女 4 例， 平均年龄（1．64 ±0．75） 岁。 三组患儿的性别、 年龄差异无统计学意义（χ2＝ 5．29， F ＝ 2．20， P 均 ＞ 0．05）。

1．2 方法

1．2．1 外周血 EV71-RNA 检测 患儿入院后 24 h内采集外周血 2 ml， 采用实时逆转录核酸扩增聚合酶链反应（RT-PCR）进行 EV71-RNA 检测， 检测仪器为 ABI 7500 实时荧光定量 PCR 仪， 试剂盒为广东中山大学达安基因公司出产的 EV71-RNA 检测试剂盒， 操作按试剂盒说明进行。

1．2．2 淋巴细胞亚群检测 患儿入院后 24 h 内采集外周血 2 ml， 置 EDTA 抗凝管， 对样本进行样本计数， 若大于 10 × 109／ L， 则用 PBS 稀释至 5 ×109／ L。 在流式细胞仪专用试管中， 加入荧光标记的相应单抗 20 μl 及 100 μl 稀释血液样本并混匀。室温下避光孵育 15 min， 加入红细胞裂解液， 充分裂解红细胞， 弃去上清液， 用 PBS 洗涤 2 次，上机检测。

1．3 统计学分析

应用 SPSS17．0 统计软件包进行统计学分析， 计量资料以均数 ± 标准差（x ± s）表示， 正态分布并方差齐性进行单因素方差分析（one-way ANOVA），多重组间比较采用最小显著检验法（LSD-t）， 两组间比较采用 t 检验。 以 P ＜ 0．05 为差异有统计学 意义。

2 结果

三组患儿的 CD3＋、 CD3＋CD4＋、 CD3－CD19＋、CD3－CD16＋CD56＋、 CD19＋CD23＋淋巴细胞亚群百分比差异有统计学意义（P 均 ＜ 0．01）， 见表 1。 其中， CD3＋、 CD3＋CD4＋以及 CD3－CD16＋CD56＋亚群，重症组和普通组 HFMD 患儿均较对照组降低， 差异有统计学意义（P ＜ 0．05）； 且重症组表达均较普 通组更低， 差异也有统计学意义（P ＜ 0．01）。CD3－CD19＋和 CD19＋CD23＋亚群， 重症组和普通组HMFD 患儿均较对照组升高 ， 差异有统计学意义（P ＜ 0．01）， 但重症组与普通组之间的差异均无统计学意义（P ＞ 0．05）。 三组患儿的 CD3＋CD8＋亚群百分比差异无统计学意义（P ＞ 0．05）。

3 讨论

HFMD 是由肠道病毒感染所致的传染性疾病[1]。 流行病学研究显示， 人群对于肠道病毒普遍易感， 各个年龄组均可发病， 但是重症 HFMD 以 3岁以下多见[2]； 全年散发可见， 高峰在夏、 秋季节。HFMD 病原以柯萨奇病毒 A 组 16型（COXA16） 和肠道病毒 71 型（EV71） 最为多见， 二者常交替出现[3]。 2011 年， 我院收治的 HFMD 患儿中以 EV71感染居多， 大部分患儿临床表现为发热、 咽痛，手足出现斑丘疹或水疱疹， 病程在 1 周左右， 预后良好， 属于普通型； 少数患儿先出现发热、 皮疹、 食欲减退等症状， 继而出现头痛、 呕吐、 意识障碍、 脑膜刺激征或病理反射阳性等临床表现和体征； 极少数患儿出现肢体弛缓性瘫痪、 昏迷和呼吸衰竭[4， 5]， 属于重症 HFMD。本研究发现， EV71 感染后， 无论是重症型还是普通型 HFMD 患儿， 淋巴细胞亚群均发生明显变化， 调节 B 淋巴细胞活化的 CD3－CD19＋亚群及调节 B 细胞分化、 黏附的 CD19＋CD23＋亚群的百分比较对照组升高， 但是在重症组与普通组之间， 差异无统计学意义。 文献报道， 对于病毒感染， 尤其是肠道病毒感染， 参与防御的主要是 T 淋巴细胞或是 NK 细胞。 在病毒入侵机体时， 首先参与应答的是 NK 细胞， NK 细胞作为固有免疫应答细胞，无需抗原致敏， 就可以直接杀伤病毒感染的靶细胞， 是机体防御病毒感染的第一道防线。 NK 细胞活化后， 通过分泌 INF-γ、 IL-2、 TNF 等细胞因子，诱导 Th1 型免疫反应， 上调 Th1／Th2 表达， 从而发挥免疫调节作用[6， 7]。 在本研究中， EV71 感染重症 HFMD 患儿 CD3－CD16＋CD56＋亚群的表达水平明显低于普通组， 这或许提示重症组患儿病情急性加重首先与 NK 细胞功能受抑有关。CD3＋主要表达在 T 细胞表面， 是 T 细胞成熟的重要表面标志。 CD3＋T 细胞可分成 CD3＋CD4＋T 细胞和 CD3＋CD8＋T 细胞两大类 。 CD3＋CD4＋T 细胞主要是 T 辅助细胞， 分为 Th1 型 T 细胞和 Th2 型 T细胞： Th1 细胞辅助机体对病毒或肿瘤的免疫反应，而 Th2 细胞则参与对过敏性疾病或寄生虫感染的免疫反应。 CD3＋CD8＋T 细胞主要是细胞毒性 T 细胞， 活化后可以有效清除 EV71 病毒， 是细胞免疫反应的主要执行者。 王笑梅等[ 8 ]研究发现， 在SARS 病毒感染时， CD3＋、 CD3＋CD4＋、 CD3＋CD8＋均下降， 且随着病程进展呈现动态变化。 储矗等[9]研究发现， 在甲型 H1N1 感染时， CD3＋、 CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋亦全面受抑。 本研究结果显示， 在感染EV71 时， 重症患儿的 CD3＋、 CD3＋CD4＋下降比普通患儿更明显， 表明在对抗 EV71 感染时， 重症患儿的 CD3＋、 CD3＋CD4＋明显受抑。

综上所述， 在 EV71 型 HFMD 患儿中， 存在细胞免疫功能紊乱。 重症 EV71 型 HFMD 患儿的细胞免疫功能紊乱更加明显， 尤以 CD3＋、 CD3＋CD4＋、CD3－CD16＋CD56＋突 出 。 早 期 监 测 HFMD 患 儿CD3＋、 CD3＋CD4＋、 CD3－CD16＋CD56＋亚群的动态变化， 或许可以作为判断疾病严重程度的临床指标。另外， 对于临床治疗来说， 在给予常规抗病毒、对症、 支持治疗的同时， 给予调节细胞免疫功能的药物治疗， 或许能够获得更好的临床疗效。