病理试验室细小质嫩穿刺组织行脱水处理的方法及探讨

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【摘要】 目的 细小质嫩穿刺组织应用脱水、透明、浸蜡处理，其处理方法改进后组织有韧性，不易碎裂，石蜡包埋组织后能切出完整组织，易于镜下观察。方法 收到组织后，立即置于中性缓冲固定液中固定，再进行脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色。结果 组织在制片过程中经过改进方法处理后，保证了组织结构的完整，使组织无过度收缩、变硬，切片时无碎裂，着色优质且能准确表达。结论 细小质嫩穿刺组织脱水、透明、浸蜡的处理方法改进后，组织结构最大限度保持与活体组织结构相近，用石蜡包埋组织后，可切出组织结构完整的切片，同时易于切出超薄切片及连续切片，切片染色易着色，镜下观察组织细胞结构完整，细胞表达的效果明显优于未改进之前的效果。

【关键词】

细小质嫩穿刺组织；固定；脱水；透明；浸蜡

The method of Small puncture soft tissue mass in pathology Laboratory

LI Zizi，WANG Xiaohong，ZHENG Yanxuan，et al.Department of Pathology, Fifth Affiliated Hospital Sun Yatsen University,Guangzhou 519000,China

【Abstract】 Objective

Auality tender tiny puncture tissue dehydration applications, transparent, and dip wax treatment, the treatment improved tissue toughness, not easy broken, paraffinembedded tissue can be cut out after the complete organization, easy microscopic observation.Methods After receiving tissue, immediately placed in neutral buffered fixative fixed, then dehydrated, transparent, dipping wax, embedded, sectioned and stained. Results In the production process of the organization through improved methods of treatment, to ensure the integrity of the organizational structure, so that no excessive tissue shrinkage, hardening, no fragmentation when sliced, highquality color and can accurately express. Conclusion Small puncture tissue dehydration tender quality, transparent, dip wax treatment improvements, maintain and maximize organizational structure similar to living tissue structure, paraffinembedded tissue, it can cut out the organizational structure of a complete slice, and easy to cut trade surplus thin sections and serial sections, section staining easy to color, are observed structural integrity of cells, cells did not improve results significantly better than previous results.

【Key words】

Small puncture soft tissue mass; Fixed;Dehydration; Transparent; Dipping wax

作者单位：519000中山大学附属第五医院病理科

随着医学科技的进步及科研方法的需要，在CT、B超引导下行各种部位的穿刺组织，提取活体组织进行病理检查，以明确疾病性质以及做科研时动物试验的组织标本进行病理分析，这些都需要应用病理技术来处理以上各种组织进行石蜡制片，石蜡切片的质量，直接影响到对患者诊断的判断及科研工作的成败。由于各种穿刺活检组织及小动物内脏组织标本小，组织稚嫩，质地柔软、易碎，标本珍贵等特点，如果按照常规标本的处理方法，往往容易造成组织过度收缩脆裂、失去柔韧性，切片时呈碎渣样，不能完整制片，甚至无法制片。我们通过不断的改进，反复的试验，摸索出一套适合活体穿刺组织及细嫩动物试验用的组织制片处理的方法，通过7年来的临床应用及科研试验应用、效果良好。现介绍如下。

1 资料与方法

1.1 材料

所有穿刺组织均为中山大学附属第五医院患者的穿刺组织，动物试验小白鼠组织为我院中心试验室科研用小白鼠。

石蜡包埋前组织固定、脱水、透明、浸蜡用各种试剂。

1.2 方法

1.2.1 收到标本后，立即置于中性缓冲甲醛固定液中，如果标本过小，可先点上伊红后用擦镜纸包起来放在固定液中固定，可防止组织丢失。固定液要保持新鲜、液量要求充足，固定时间为1~12 h。

1.2.2 脱水处理1］

① 75%乙醇30 min。② 85%乙醇50 min。③ 90%乙醇50 min。④ 95%乙醇Ⅰ90 min。⑤ 95%乙醇Ⅱ90 min。⑥ 无水乙醇Ⅰ90 min。⑦ 无水乙醇Ⅱ90 min。

1.2.3 二甲苯透明处理 二甲苯Ⅰ15 min、二甲苯Ⅱ25 min

1.2.4 浸蜡处理 石蜡Ⅰ20 min、石蜡II50 min、石蜡Ⅲ90 min

1.2.5 包埋

1.2.6 切片

1.2.7 烤片、染片

2 结果

各种部位的穿刺组织及试验用动物内脏组织经组织脱水、透明、浸蜡处理后，制片时可保证组织结构完整，最大限度保持了组织结构与活体组织结构相近，使之无过度收缩、变硬、变脆、无碎裂等现象。可制成3 μm以下超薄连续切片。镜下观察组织结构完整，细胞形态完好，细胞间无裂隙、断裂、染色鲜艳、核浆分明。特殊染色和免疫组化染色均能准确表达，同常规标本处理的效果无异。

3 讨论

固定液要求新配制的缓冲中性甲醛固定液，这种固定液它对细嫩的组织在固定时不会引起强烈的收缩，固定组织的作用较温和，对组织抗原保存较好，最大限度的保持了组织原有的结构。固定效果好的组织经处理后包埋成蜡块，在切片后做各种染色时易着色。脱水时各梯度酒精穿透力强，脱水速度快，对细嫩组织有明显的收缩作用，应严格控制脱水时间2］。如果脱水时间过短，会造成脱水不足，二甲苯无法置换组织中残留的水份，造成石蜡无法浸入，形成组织过软，甚至自溶，无法切片。我们在试验中还观察到，即使脱水很到位，在二甲苯透明和石蜡的浸润过程中，时间过长的话，也可使组织变硬、变脆、碎裂、失去柔韧性、无法制片3］。影响镜下观察组织。因此通过试验，我们把二甲苯总的透明时间控制为不超过40 min。石蜡浸润的总时间不超过160 min。掌握以上的几点要求，就可以制出组织软硬适中、切片完整，组织结构良好的切片。还可以完成特殊要求的超薄切片，如：肾小球组织需要3 μm以下的超薄连续切片等。通过几年的临床应用，改进后的组织脱水、透明、浸蜡处理方法无需另外添加别的试剂，简单方便，效果好。

参 考 文 献

［1］ 王伯，李玉松，黄高，等.组织切片技术.病理学技术，2000，6(1)：7694.

［2］ 傅春燕，肖德胜，陈晨.浓度不同的乙醇梯度对小白鼠肝、肾组织制片影响.诊断病理学杂志,2009，16(5)：399.

［3］ 龚志锦，詹焙洲.病理组织制片和染色技术.上海：上海科学技术出版社，1994：19.