HPLC输液压力异常上升时的检验方法
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关键词：输液压力 过滤 press max
在HPLC法分析中,经常会遇到输液压力异常现象,有人认为是柱的问题,但实际上常常不是柱的问题(堵住了),而是其他地方的堵塞问题,现在就这个问题笔者作出了如下的看法。
1.预备知识
首先,看一下压力异常上升时引起的问题。
A.柱填充剂受压过大时会发生填充剂的损坏,形成扁平状态,挤向深处。因此受到更大的压力。入口填充处产生间隙则峰变形。在排阻色谱上由于孔隙变小，分离也变坏。并且在柱的下流处受到压力，柱自身的压力斜度较缓时，损坏相对减少。
B.检测池所受的压力过大时，漏液或池被破坏。
C.配管、过滤器被不溶物堵塞时,液体流通不畅,而且由于那里吸附成分,产生峰变形。
D．输液压力过高时，不能按所定的分析流量输液。而且缩短易耗品的使用寿命。
〈输液装置的press max的设定〉
为及早发现异常，输液装置的press max的设定在柱耐压的1/2～2/3（硅类5um分析柱时约为10～15MPa），倘若，输液装置和进样器之间阻尼管或高灵敏度阻尼器、前置柱时,由于它们承受压力,press max的设定值应增加这部分压力。
2．流路检验法
＜首先观察流动相瓶＞
如果见到流动相瓶中有白色混浊时肯定是不溶物，会堵塞流路的物体。虽然有吸滤器，但是一般下流处的过滤器孔隙小。流动相虽经过滤，但很接近溶解度的状态下放置后会析出。另外一方面，即使纯水，放置后也会有细菌繁殖。另外，缓冲液和有机溶剂的梯度洗脱，须预先在烧杯或烧瓶中确认混合后有没有析出。有机溶剂相互间会根据混合比也可产生白色混浊！白色混浊析出时，除流路洗净以外，必须再研究一下流动相。
〈流路检验，基本上从下流开始，卸下配管〉
为了寻找压力异常上升的地方，基本上从下流一侧依次卸下配管，输液，检查压力。如果很快达到press max时，降低流量进行。
首先，UV检测器进液接头进行输液。如果压力一下子降下来，则是背压管堵塞。如果压力未降下来再往上流找堵塞的地方，卸下一个接头（检验检测器），进行检查。同样地依次检查分析柱、防护柱、线路过滤器、进样器、输液装置的线路过滤器等。
根据需要，其他的连接件也分别卸下。如果配管和池、过滤器、进样器本身有数百个kpa以上的压力的话,则有问题、容易堵塞的地方有过滤器与细配管的入口处应特别注意。
在检验柱温箱内的流路时，由于在柱温箱打开的状态下，也就是接近室温的情况下进行，如仍按分析时的流量不变时，有可能柱承受压力过大。通常用一半的流量问题不大。
3．流路各部分解决措施
流路中的堵塞,有的不能洗净,有的可以洗净。不能洗净的，采用反向清洗或更换配管部分。
〈配管管道〉
容易堵塞的地方是由内径粗的管向细的管的接缝处，或流路拐弯处。在配管管子的入口一侧切掉1cm，也是解决的一种办法（为此，在接口上使用手拧的公螺母PEEK很方便）。检查池的压力极高时，为防止损坏，将池卸后清洗。
〈柱〉
柱压稍高时，试检查柱（用出厂时检查条件进行理论塔板数测定），看看是否能满足使用目的。压力极高时，基本上是更换柱。但是堵塞如果是在入口侧柱端的压滤器时，虽不能保证但可用下速办法试着恢复。①试用流量的一半，进行反冲。②检查入口侧柱端的压力。压力高时用超声波清洗，如不能改善，更换柱端。
如果入口侧过滤器经常堵塞时，在与进样器之间安装线路过滤器可得改善。但是，有些峰变宽。
〈线路过滤器、进样器〉
用反冲或拆卸后用超声波清洗.
4.在不同情况时的想法
试样溶液一定要经膜滤器过滤!
隔了好久再使用时,或对以前的使用条件不清楚时,首先在没有柱的状态下,清洗流路。
〈低流量输液，压力仍然极高时〉
低流量输液也很快达到press max时，不从下流开始拆卸，而是拆卸整个流路，相反，从上流部分开始分别与输液装置的连接，进行检查。
〈每次注入试样的压力缓缓上升〉
这应考虑，试样中是否有不溶物，或者，虽然溶于试样溶剂，但在流动相中不溶解而析出。
〈注入时一旦稍许上升后又下降〉
这应考虑试样成分的溶解度不够，试样溶剂与流动混合时的粘度阻力压上升。
5.日常须留意的事项
〈流动相和试样溶液要过滤〉
流动相和样品溶液，特别是样品溶液一定要经膜滤器过滤。然后，将梯度洗脱溶液之间混合，并将流动相与样品溶液混合确认是否有不溶物产生。
〈养成记录分析时压力的习惯〉
为及时发现偏差，应记录日常分析的压力。
〈输液装置的压力调零〉
为了准确进行压力监控，应定期地进行零点调整。调零时，打开排液阀在没有液流的状态下进行。
〈分析完了时检测器的出口管前端的处理〉
检测器的出口管（背压管）前端，因接触空气，是管内溶剂容易蒸发的地方。用缓冲液的分析完了时，管的前端放入废液（混浊时更换）中。或用石蜡膜缠上。放置数日后，卸下柱，LC流路用水，然后用甲醇替换。使用能缩短柱使用寿命的流动相条件里保管前必须充分洗净。