高效液相色谱法测定广豆根中苦参碱的含量
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【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2011）02-0200-01
【摘要】目的:建立广豆根中有效成分苦参碱的含量测定方法。方法:应用高效液相色谱法，以乙腈∶无水乙醇∶水(80∶16∶4)为流动相，检测波长为210nm，以外标法按峰面积计算含量。结果线性关系良好（γ=0.9998 n=5）,平均回收率为9996%，RSD=0.98%(n=5)。结论方法可靠，结果可信，适用于广豆根中苦参碱有效成分的含量测定。
广豆根的主要有效成分为苦参碱和氧化苦参碱。为了控制本品的质量，采用高效液相色谱法对苦参碱和氧化苦参碱的含量进行了大量的研究，结果发现氧化苦参碱的含量少且极不稳定。因而选择苦参碱为本品的有效成分进行含量测定研究。苦参碱的测定方法已有报道有薄层色谱扫描法、气相色谱法、分光光度法、高效液相法等。其中高效液相色谱法具有分离效能高、灵敏准确等优点，故本文主要对高效液相色谱法测定苦参碱含量进行研究。
1 仪器与材料
高效液相色谱仪（岛津LC2010A型）；苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：805-20068）。
2 试验方法与结果
2.1 供试品溶液的提取：样品采用2%NH3氯仿液，超声波法提取3次，每次提取30分钟，过中性Al2O3进行纯化。
2.2 供试品溶液的配制：精密称取研细样品5.0g，置于具塞的锥形瓶中，加入2% NH3氯仿液50ml，超声法提取3次，每次30分钟，合并氯仿提取液，使通过中性氧化铝柱（10cm×5.0cm）,收集过柱氯仿；再用50ml氯仿-甲醇（7∶3）洗脱，收集洗脱液，合并，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇溶解，定容至25ml,过0.45μm滤膜,即得供试品溶液。
2.3 色谱条件：色谱柱：Kromsil NH2 (5μm,4.6mm×200mm)，流速：1.0ml/min，柱温：25℃，流动相：乙腈-无水乙醇-水(80∶16∶4)用磷酸调pH为2，检测波长检测波长：210nm，进样量：20μl。
2.4 线性关系考察：精密称取在105℃干燥的苦参碱对照品3.4mg，用无水乙醇定容20ml。精密吸取对照品溶液20、2.5、3.0、4.0、5.0 ml分别置5ml容量瓶中，加无水乙醇定容，摇匀。自动进样上述对照品溶液各20μl测定，记录峰面积，以苦参碱含量（μg）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标作线性回归，得回归方程为：苦参碱A=241243C+117891（γ=09998n=5），结果表明苦参碱在选定的浓度范围内（27.2μg～68μg）标准曲线线性关系良好，符合外标法测定含量的要求(表1)。
2.5 稳定性试验：取供试品溶液在室温放置下，每隔2小时测定1次，12小时共测定7次，记录峰面积，根据峰面积值计算，表明供试品在12小时内稳定（表2）。
2.6 重现性试验:精密称取供试品5份，分别按含量测定法提取制成供试品溶液，进样分析。根据所得的峰面积计算2.7 加样回收率试验:精密称取已知含量(0.84mg/g)的供试品5份，每份约2.0g,分别加入苦参碱对照品溶液（017mg/ml），混匀，按供试品溶液制备，测定，根据所得峰面积计算（表4），表明本方法具有良好的回收率，测定方法可靠。
2.8 样品含量测定：按含量测定方法共测定3批样品，根据峰面积，计算苦参碱含量（表5），样品中苦参碱的平均含量为6.73mg/g。
根据对三批中试产品的苦参碱含量的测定，最后确定按苦参碱计算，本品每克含苦参碱不得少于6.0mg。
3 结果讨论
本方法操作简单，实验方法可靠，精密度高，回收率好，稳定性12小时内良好，适用于广豆根中苦参碱有效成分的含量测定。
参考文献
[1] 方立琼,郭济贤．中药山豆根与北豆根的质量评价．上海医科大学学报，1992;19(2):124
［2］ 金莉霞,等．苦参生物碱的高效液相色谱法测定．药学学报，1993;28(2):136
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