汉防己甲素注射液细菌内毒素检查方法研究

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摘要：目的：建立汉防己甲素注射液细菌内毒素检查法。方法：采用《中国药典》2005年版附录细菌内毒素检查法。结果：汉防己甲素注射液浓度为0.25mg•mL-1，用灵敏度为0.25 Eu•mL-1的鲎试剂检测细菌内毒素无干扰因素的影响。结论：汉防己甲素注射液可应用鲎试剂进行细菌内毒素检查。

关键词：汉防己甲素注射液;细菌内毒素;干扰试验

中图分类号：R282.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2008）04-0706-02

汉防己甲素注射液的主要成分为汉防己甲素(tetrandrine) ,又称粉防己碱,是中药汉防己的主要化学成分。汉防己甲素注射液为消炎镇痛药。用于抗风湿及镇痛，也可用于治疗硅肺。临床采用肌内注射及稀释后静脉推注或滴注的方法给药[1]。原质量标准中以家兔法进行热原检查。本实验依据《中华人民共和国药典》2005年版附录细菌内毒素检查法[2]，研究建立汉防己甲素注射液细菌内毒素检查法。

1药物和试剂

汉防己甲素注射液（规格：2mL∶30 mg，江西银涛药业制药有限公司061101）；鲎试剂：福州新北生化工业有限公司；规格：0.1mL；批号：06120113；灵敏度：0.25EU•mL-1；湛江安度斯生物有限公司；规格：0.1mL；批号：0612291；灵敏度：0.25EU•mL-1；细菌内毒素工作标准品（中国药品生物制品检定所，批号：2003-3，效价：150EU/支）；细菌内毒素检查用水（中国药品生物制品检定所，规格：10mL，批号：2005120）。

2方法和结果

2.1细菌内毒素限值（L）的确定根据本品说明书[1]得知汉防己甲素注射液用法用量为：肌内注射，1次30mg,1日1次。静脉注射或静脉滴注，1日200～300mg,用5%葡萄糖注射液或氯化钠注射液稀释后，缓慢注射或滴注。若1日1次将300 mg汉防己甲素注射液加至50mL5%葡萄糖注射液或0.9%氯化钠注射液中静脉推注，即每小时最大给药量为300mg/60kg。

根据公式：L=K/M(其中 M为300mg/60kg/h 5mg•kg-1 •h-1;K=5EU•kg-1•h-1)

L=1EU•mg-1

2.2鲎试剂灵敏度复核实验按照《中华人民共和国药典》细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核，结果见表1。

两批鲎试剂经用细菌内毒素国家标准品检查，λc与λ之比均在0.5～2.0之间，灵敏度复核结果均符合规定。

2.3干扰实验预实验① 汉防己甲素注射液有效稀释浓度（MVC）的计算：公式MVC=λ/L，其中L为汉防己甲素注射液的细菌内毒素限值1EU•mg-1；λ为鲎试剂标示灵敏度，目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.5～0.03Eu•mL-1；则汉防己甲素注射液的对应有效稀释浓度为：C0.5=0.5/1=0.5mg•mL-1,C0.25=0.25/1=0.25mg•mL-1,C0.125=0.125/1=0.125 mg•mL-1,C0.06=0.06/1=0.06mg•mL-1,C0.03=0.03/1=0.03mg•mL-1。

②实验操作：将汉防己甲素注射液用细菌内毒素检查用水分别稀释浓度为7.5、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06mg•mL-1的溶液，将其中7.5、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06mg•mL-1系列浓度溶液记为NPC。同时在原液(15mg•mL-1)和4、2、1、0.5、0.25、0.125mg•mL-1上述试验液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的试验液中均含有2λ浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。取灵敏度为0.25Eu•mL-1的鲎试剂，分别与上述PPC和NPC进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性对照记为PC和阴性对照记为NC。结果见表2。

由以上实验结果可以初步了解：两个厂家鲎试剂对汉防己甲素的细菌内毒素的实验结果均在0.5 mg•mL-1以下浓度时无抑制干扰。

2.4正式干扰试验为了最终确认是否存在抑制因素的影响，进行以下正式干扰实验。

取用细菌内毒素检查水分别进行稀释，使其最终干扰试验浓度为0.25 mg•mL-1，按《中国药典（2005年版）》二部附录中的细菌内毒素检查供试品干扰试验项进行实验，结果见表3。

2.5样品细菌内毒素检查按《中华人民共和国药典》细菌内毒素检查法，使用两批不同厂家的鲎试剂分别对样品进行细菌内毒素检查，并同时设立样品的自身阳性对照，结果见表4。

3讨论

汉防己甲素注射液质量标准中规定，以家兔法进行热原检查，检查剂量是9mg•kg-1,仅为临床人用最大剂量的1.8倍[1]。

由于目前仅有一家汉防己甲素注射液生产企业，笔者只得到1批样品，所以仅对1批样品进行了试验研究。

笔者选择2个厂家的鲎试剂进行干扰预试验，结果表明汉防己甲素注射液在0.5mg•mL-1及其以下稀释浓度无抑制性干扰。笔者选择汉防己甲素的浓度为0.25mg•mL-1，用两个厂家的鲎试剂进行正式干扰试验，结果显示 ES/Et均在0.5～2.0范围之内，表明确无干扰影响。汉防己甲素注射液可适用细菌内毒素检查。

参考文献

[1]国家食品药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准[S].第14册，WS-10001-(HD-1380)-2003，2003：208-209.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典•Ⅱ部 [S].北京：化学工业出版社，2005：附录XIE.