真武汤有效成分提取方法优选

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（1贵州大学 贵州 贵阳 550025；

2云南南诏药业有限公司 云南 昆明 671000；

3北京医药集团中国医药研究开发中心 102206）

【摘要】目的：探讨提取方法对真武汤提取的影响，并筛选出最佳提取工艺。方法：选用醇回流提取法，采用紫外分光光度法对提取药物中乌头碱含量进行测定，先进行提取时间、提取温度、料液比、乙醇浓度的单因素实验以确定水平范围，再利用L9（34）正交实验方法优选提取的最佳工艺，确定最佳工艺条件。结果：最佳工艺条件组合是乙醇浓度为90%，料液比1∶10，提取时间为90min,提取次数为3次。

【关键词】真武汤;乌头碱;提取方法;正交试验法

【Abstract】Objective: explore the extraction method of Zhen Wu Decoction, and then find out the best extraction method.Methods: choose alcohol refluxing extraction, using ultraviolet spectrophotometry detecting the contained Aconitine of the drug aconitine, firstly, use the single factor experiment to find the better scope of extracting time, extracting temperature, Material to liquid ratio and ethanol concentration.Then use the orthogonal experimental method to select the optimum extract technology and determin the best technological conditions. Results: The combination of optimal conditions is 90% ethanol concentration, solid to liquid ratio of 1:10, extraction time was 90min, extracted for 3 times.

【Key words】 Zhen Wu Decoction;aconitine; extraction method; orthogonal

【中图分类号】R286 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455（2011）06-0402-02

真武汤出自《伤寒论》。功能温阳利水气，现仍被广泛应用于临床各科以水液代谢失调为主的病症，具有显著疗效。真武汤其化学成分主要含有乌头生物碱类，芍药苷类，茯苓多糖类，萜类，挥发油及其他一些成分。其中君药附子含有的乌头生物碱类具有强心作用，是用于治疗的主要成分之一，故以乌头碱含量为考察指标来优选最佳提取方案。

1 仪器与材料

1.1 实验材料与试剂：附子、茯苓、白术、芍药、生姜购于贵阳市花果园药材市场；乌头碱标品（中国药品生物制品检定所）；乙醇（95%）（重庆川江化学试剂厂）；无水乙醇（重庆川江化学试剂厂）

1.2 主要仪器设备：JPT-5型托盘天平（常熟市衡器厂）；分析天平；抽滤机；HH-S2s型恒温水浴锅 （金坛市环保仪器厂）；WFZ UV-2000型紫外分光光度计 （龙尼柯有限责任公司）；250ml烧瓶，50ml、100ml、250ml、500ml容量瓶，布氏漏斗，100ml、250ml、500ml量筒，滤纸，玻璃棒等

2 实验操作

2.1 乌头碱标品线性关系的考察:精密称取乌头碱标准品7.7mg，加1mol/L盐酸数滴使之溶解，置于50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得每1ml含乌头碱0.154mg的标准液。精密量取乌头碱标准液10.0ml、20.00ml、25.0ml、30.0ml、35.5ml、40.00ml。分别置于50ml容量瓶中，各加入蒸馏水至标准刻度。同法以蒸馏水作空白对照，用紫外分光光度计于410nm波长处测定吸收度，结果乌头碱含量在7.7mg/l―26.95 mg/l范围内，浓度与吸收度线性关系良好，测得结果经统计学处理，得回归方程回归方程A 800C+0.28

2.2 单因素试验及分析：称取按真武汤复方处方准备好的药材的量各半21.0g（±2.0g），置于250ml烧瓶中，然后按实验要求的料液比向烧瓶中加入乙醇，于70℃水浴锅中回流提取实验要求的时间及次数，趁热过滤提取液，合并滤液置于250ml容量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀后吸取0.1ml置于50ml容量瓶中，无水乙醇定容，在350nm波长处以无水乙醇作参比溶液测定吸光度值并记录数据。

2.2.1 乙醇浓度对提取效果的影响:在5个250ml烧瓶内分别放入按真武汤复方处方准备好的药材的半量21.0g，料液比均为1∶10，在70℃的水浴加热条件下回流提取1次，回流提取时间为60min，乙醇浓度分别为50%、60%、70%、80%、90%。按上述的含量测定方法测定吸光度值。结果表明：随乙醇浓度的增加，提取的乌头碱质量呈增长趋势，故选择乙醇浓度为70%、80%、90%作为溶剂较为合适。

2.2.2 提取时间对提取效果的影响:在5个250ml烧瓶内分别放入按处方准备好的药材的量各半21.0g，料液比均为1∶10，乙醇浓度为90%，在70℃的水浴加热条件下回流提取1次，回流提取时间分别为30min、60min、90min、120min、150min。按上述的含量测定方法测定吸光度值。结果表明：随提取时间的延长，提取的乌头碱质量呈增长趋势，继续延长提取时间，乌头碱质量无增长现象；由于提取时间较短时，不利于材料溶解和提取液过滤，提取的乌头碱质量也较少；而提取时间较长时，提取的质量并无增加，故提取时间以60min～100min时较为适合。

2.2.3 料液比对提取效果的影响:在5个250ml烧瓶内分别放入按真武汤处方准备好的药材的量各半21.0g，乙醇浓度为90%，在70℃的水浴加热条件下回流提取1次，回流提取时间为60min,料液比分别为1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14。按上述的含量测定方法测定吸光度值。结果表明：随提取料液比的增加，提取的乌头碱质量呈增长趋势，继续提高料液比至1∶14时，乌头碱质量有明显的下降现象；由此可知提取料液比较大时，提取的乌头碱质量并无增加，故提取料液比以1∶8～1∶12较为适合。

2.2.4 提取次数对提取效果的影响:在5个250ml烧瓶内分别放入按真武汤处方准备好的药材的量各半21.0g，乙醇浓度为90%，料液比为1∶10，在70℃的水浴加热条件下回流提取，回流提取时间为60min,提取次数分别为1次、2次、3次、4次、5次。按上述的含量测定方法测定吸光度值。结果表明：随提取次数的增加，提取的乌头碱质量呈增长趋势，但至提取5次时，乌头碱质量增加较为缓慢，综合考虑，提取次数以2～4次较为适合。

2.2.5 正交试验数据与分析:由单因素试验结果可以看出，单因素试验中乌头碱的提取含量相对较高的分别是乙醇浓度为70%、80%、90%，料液比1∶8、1∶10、1∶12，提取时间60min、90min、120min,提取次数为2次、3次、4次，依据这些因素制定工艺参数，故采用L9（34）正交试验优选最佳提取方案。见表1：

表1 正交试验因素水平表

结果见表2：

表2正交试验结果表

结果表明：提取因素的主次顺序为：提取时间>提取次数>乙醇浓度>料液比，因此本试验中提取时间是主要因素，本实验最佳水平组合

是A3B2C2D2,即提取的最佳工艺条件组合是70℃水浴下乙醇浓度为90%，料液比1∶10，提取时间为90min,提取次数为2次。由试验结果也可以看出A3B2C2D2条件下乌头碱的提取含量是最多的，因此，本次试验的最佳水平组合是A3B2C2D2，证明了本次正交设计实验的结论是正确的。

3 讨论

真武汤自古以来就是医家常用的方剂，有多方面的临床疗效，近几年的研究显示其在心血管病治疗、慢性肾功能疾病治疗以及降脂、减肥作用方面具有诱人的前景。本实验在参考陈鹏英、戴航、荆蕴杰、刘 倩以及阙慧卿等做的提取实验的基础上［1，2，3，4，5］，通过单因素试验先确定各因素的水平，后通过正交试验进行工艺优选，得出醇提取法的最佳提取条件组合为：乙醇浓度为90%，料液比1∶10，提取时间为90min,提取次数为3次。本实验是通过对提取药物中的乌头碱进行含量测定，因为乌头碱是其中君药附子的主要成分，是用于治疗的主要成分之一，故以乌头碱含量为考察指标来优选最佳提取方案是非常合理的，因此，本提取工艺设计合理，优选的工艺稳定可行，成本便宜，操作简便。目前，真武汤除了传统的汤剂以外的各种剂型正在不断被开发出来，对于真武汤中有效成分的研究也越来越深入，本实验为进一步深入研究开发真武汤作一定的基础研究，使真武汤得到更好的开发利用，更好地为祖国中医药学作出贡献！

参考文献

［1］ 陈鹏英，金德珍等，正交试验法优选复方黄芩喷雾剂的提取工艺，中国医院药学杂志，2006，26（4）：497-498

［2］ 刘倩，刘永刚等，正交试验法优选复方茜草胶囊提取工艺的研究，中国实验方剂学杂志，2010，（16）1： 4-6

［3］ 戴航，侯小涛，程世贤等，正交试验优选复方百部止咳颗粒中黄芩苷的提取工艺，世界中西医结合杂志，2008， 3（3）：139-141

［4］ 荆蕴杰，黄薇葳等，正交试验优选复方脚癣灵最佳提取工艺，中华中医药学刊，2 0 0 8，26（3）：655-656

［5］ 阙慧卿，邓思珊等，正交试验优选复方益精胶囊处方提取工艺的研究，中草药，2006，37（11）：1674-1675