萎缩性胃炎不同亚型肠上皮化生中C—myc蛋白表达与幽门螺杆菌感染的关系

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[摘要] 目的 研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）感染与肠上皮化生不同亚型中C-myc蛋白表达的关系。 方法 应用14碳-呼气试验检测Hp；AB-PAS和HID-AB黏液染色法进行肠上皮化生亚型分型；应用免疫组织化学染色Elivision法检测C-myc蛋白的表达。 结果 肠上皮化生各亚型Hp感染率均高于非萎缩性胃炎组，各亚型之间Hp感染率无明显差异；不完全性结肠化生C-myc蛋白表达率高于其他亚型和非萎缩性胃炎（P < 0.05）；不完全性结肠性化生中Hp阳性患者C-myc蛋白表达率明显高于Hp阴性患者（P < 0.01）。 结论 不完全性结肠化生中C-myc蛋白表达升高，其表达可能与Hp感染有关，Hp感染可能通过C-myc基因参与胃癌发生，同时提示不完全性结肠化生与胃癌关系密切。

[关键词] 肠上皮化生；不完全性结肠化生；C-myc蛋白；幽门螺杆菌

[中图分类号] R573 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）30-0058-03

The association among Helicobacter pylori infection and the expressions of C-myc proteins in different subtypes of intestinal metaplasia

HUANG Jue1 LAl Yuexing2 XU Ping2

1.Department of Internal Medicine， Jiuting Hospital， Songjiang District， Shanghai 201615， China； 2.Department of Gastroenterology，Songjiang Branch of the First People’s Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University， Shanghai 201600， China

[Abstract] Objective To study the association among Helicobacter pylori （Hp） infection and the expression of C-myc protein in different subtypes of intestinal metaplasia. Methods The Carbon-14-Urea Breath Test was used to determine Hp； AB-PAS and HID-AB mucinous staining was used to distinguish intestinal metaplasia subtypes； The immunohistochemical Elivision method was used to determine the expression of C-myc protein. Results The infection rates of Hp in intestinal metaplasia was higher than non-atrophic gastritis； No significant difference between subtypes of intestinal metaplasia in the infection rates of Hp. The expression of C-myc protein in incomplete colonic type of intestinal metaplasial was higher than other subtypes and non-atrophic gastritis， the expression of C-myc protein with Hp positive was higher than those with Hp negative. Conclusion There is higher expression in incomplete colonic type of intestinal metaplasial and the expression may be associated with Hp infection. Hp may promote the occurrence of gastric cancer while incomplete colonic type of intestinal metaplasia has closely relationship with gastric carcer.

[Key words] Intestinal metaplasia； Incomplete colonic type of intestinal metaplasial； C-myc protein； Helicobacter pylori

胃癌是危害人类健康最常见的恶性肿瘤，近年，胃癌的发病率和死亡率虽然有所下降，但其发病率在世界范围内仍占所有癌症发病率第四位，死亡率在肿瘤相关性死亡中占第二位[1]，胃癌是我国消化道高发的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率居各种恶性肿瘤首位[2]。浅表性胃炎萎缩性胃炎肠上皮化生胃黏膜上皮异型增生胃癌（肠型）是胃癌发生、发展的多阶段模式。其中肠上皮化生是胃黏膜良性病变向胃癌演变的关键环节，特别是不完全性结肠型肠上皮化生被认为与胃癌的发生密切相关[3]。幽门螺旋杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡和少见的胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的主要病因，与胃癌的发生也有密切关系。研究肠化生各亚型与胃癌发生的关系以及幽门螺杆菌感染与肠上皮化生的关系对胃癌的高危人群的确定和筛查有积极的临床意义，从而可有效地预防胃癌的发生。本研究应用AB-PAS和 HID-AB黏液染色法进行肠上皮化生分型，免疫组织化学染色Elivision法检测萎缩性胃炎不同亚型肠上皮化生中C-myc蛋白的表达，以讨论Hp感染与肠上皮化生不同亚型中C-myc蛋白表达的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年到上海交通大学附属第一人民医院松江分院行胃镜检查165例，女86例，男79例，年龄31～76例。 根据胃镜病理（标准参考中华医学会消化病学会2006年制定的中国慢性胃炎共识意见[4]），判断为萎缩性胃炎伴肠化125例，非萎缩性胃炎40例。

1.2 方法

1.2.1 14碳-呼气试验 嘱患者空腹或进食2 h后用20 mL凉开水口服一粒尿素胶囊，静坐25 min后用一次性吹气管向含CO2吸收剂瓶中吹气，吹气1～3 min，若5 min不变色，停止吹气，予收集瓶加闪烁剂后加盖放入14 C呼气仪器测试1 min。

1.2.2 肠化分型 标本以中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，制成4 μm厚冷冻切片，采用AB-PAS和HID-AB黏液染色法把肠上皮化生分为四种亚型：即完全性小肠化生、不完全性小肠化生、完全性结肠化生和不完全性结肠化生。

1.2.3 免疫组织化学染色 Elivision法进行C-myc蛋白的表达的检测： C-myc一抗和二抗均购自Labvision公司，石蜡包埋胃黏膜组织切片放于60 ℃烤箱中过夜，二甲苯脱蜡，乙醇梯度水化，微波修复组织抗原 3%过氧化氢溶液阻断内源性过氧化物酶的活性，滴加一抗室温下孵育150 min，加聚合酶辅助剂，室温下孵育20 min，滴加二抗，室温下孵育30 min，新鲜配置 DAB显色5～15 min，在显微镜下观察终止显色，苏木素复染，中性树胶封固，晾干后显微镜下观察。每批染色均以PBS替代一抗为阴性对照。

1.3 结果判断

14碳-呼气试验检：检测数值大于100即判断阳性；肠化分型：完全性小肠化生镜检呈蓝色；完全性结肠化生镜检呈棕黑色和蓝色；不完全性小肠型肠化生镜检呈蓝色、红色或两者混合色（紫红色）；不完全性结肠型肠化生镜检呈棕黑色、紫棕色、蓝色、红色、紫红色；C-myc表达产物阳性判定：阳性细胞表现为细胞核和/或细胞质内出现深浅不一的棕黄色颗粒，在光学显微镜下观察5个具有代表性的高倍视野，阴性：阳性细胞数< 25 %，弱阳性（+）：阳性细胞为25% ～50%，阳性（++）：阳性细胞为50%～75%，强阳性（+++）：阳性细胞> 75%，表达（+）～（+++）者均可记作为阳性。

1.4 统计学处理

采用SPSS17.0统计软件包进行统计学处理。不同胃黏膜病变中Hp感染率及不同胃黏膜病变中C-myc蛋白阳性率的比较采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

125例萎缩性胃炎胃黏膜肠化生标本中，不完全性结肠化生占45例，不完全性小肠化生占47例，完全性结肠化生占17例，完全性小肠化生占16例。

不同胃黏膜组织Hp感染率见表1。不完全性结肠化生组Hp阳性率为55.56%，不完全性小肠化生组Hp阳性率为53.19%，完全性结肠化生组Hp阳性率为58.82%，完全性小肠化生组Hp阳性率为56.25%，非萎缩性胃炎组Hp阳性率为40.00%。肠上皮化生各亚型组间比较幽门螺杆菌感染无统计学差异（P > 0.05）；肠上皮化生各亚型幽门螺杆菌阳性率均高于非萎缩性胃炎组，但差异无统计学意义（P > 0.05）。

免疫组化结果见图1、图2。C-myc蛋白阳性判定为胃黏膜肠化灶细胞核和（或）细胞质内出现深浅不一的棕黄色颗粒（图1）。Hp感染与不同亚型肠上皮化生和非萎缩性胃炎胃黏膜中C-myc蛋白表达率的关系见表1。结果显示：不完全性结肠化生C-myc表达阳性率明显高于非萎缩性胃炎（χ2=21.167，P < 0.01），统计学上有显著差异；不完全性结肠化生C-myc表达阳性率分别高于不完全性小肠化生、完全性结肠化生、完全性小肠化生等其他肠上皮化生各亚型，差异有统计学意义（P < 0.05）；非萎缩性胃炎、不完全性小肠化生、完全性结肠化生、完全性小肠化生组间比较C-myc表达阳性率差异无统计学意义（χ2=3.143，P > 0.05）；不完全性结肠化生组幽门螺杆菌阳性者中C-myc蛋白表达率为76%，而阴性患者中C-myc蛋白表达率为30%，两组比较差异有统计学意义（χ2=9.522，P < 0.01）。不完全性小肠化生、完全性结肠化生、完全小肠化生和非萎缩性胃炎者中幽门螺杆菌阳性组中患者C-myc蛋白表达率分别为32.00%、20.00%、30.00%和18.75%，幽门螺杆菌阴性组中患者C-myc蛋白表达率分别为13.64%、14.29%、14.29%和4.17%，各组幽门螺旋杆菌阳性和阴性患者C-myc蛋白表达差异无统计学意义（P > 0.05）。

图1 不完全性结肠化生胃黏膜C-myc蛋白表达阳性（Elivision×400）

图2 非萎缩性胃炎胃黏膜C-myc蛋白表达阴性（Elivision×400）

3 讨论

C-myc是基因研究中较常见的原癌基因，是myc基因家族的成员之一， 在细胞增殖、细胞周期、基因稳定性等方面发挥重要作用[5，6]。C-myc的激活在多种肿瘤的形成过程中起作用，是胃癌细胞中常见的高表达的癌基因之一。病理学调查显示C-myc基因的过度表达在某些GC的形成过程中，尤其在细胞癌变的早期起一定的作用，同时也对胃癌的转移起一定的促进作用[7]。肠上皮化生是胃黏膜良性病变向胃癌演变的中间过程，不同类型的肠化生是胃黏膜病变的不同阶段[8]。本研究显示C-myc蛋白从非萎缩性胃炎到不同亚型肠化生胃黏膜中呈逐渐增高趋势，不完全性结肠化生患者C-myc蛋白表达率高于其他亚型和非萎缩性胃炎，表明不完全性结肠化生患者对于其他肠化生类型患者发展成胃癌的危险性更大。Hp感染为胃黏膜肠上皮化生发生的重要因素[9]，从正常胃黏膜向胃癌的演变中，Hp感染主要起了一个引导作用[10]。而本研究显示肠上皮化生各亚型Hp感染率均高于非萎缩性胃炎组，而在各亚型之间Hp阳性率无明显差异，这进一步揭示肠上皮化生的发生和Hp感染有关，但同时表明Hp感染可能与肠化类型无关。本研究显示在肠化生各亚型中，Hp阳性患者的C-myc蛋白阳性表达率均高于Hp阴性患者，特别是不完全性结肠化生组中Hp阳性患者中C-myc蛋白表达率明显高于Hp阴性患者（χ2=9.522，P < 0.01），其与瞿春莹等[11]研究结果一致，表明C-myc蛋白的过度表达可能是黏膜上皮癌变的早期促发因素， C-myc基因可能参与胃黏膜的癌变过程，并且与Hp密切相关。

由此可见，不完全性结肠化生中C-myc蛋白表达高于其他亚型肠上皮化生和非萎缩性胃炎，不完全性结肠化生幽门螺杆菌阳性患者中C-myc蛋白表达率明显高于不完全性结肠化生阴性患者，提示我们C-myc表达可能与Hp感染有关，且Hp感染可能通过C-myc基因参与胃癌发生，故对于不完全性结肠化生合并Hp感染患者需加强监测和定期随访，其对胃癌的早期发现有重要意义。

[参考文献]

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[11] 瞿春莹，徐雷鸣，陈惠芳，等. 幽门螺杆菌感染与胃癌及癌前病变中C-myc、p53、C-erbB-2及bcl-2蛋白表达关系的研究[J]. 临床消化病杂志，2009，21（4）：209-211，219.

（收稿日期： 2012-09-03）