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肾炎宁对IgA肾病大鼠血Scr和BUN的影响

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摘要:目的 通过动物实验,观察肾炎宁对iga肾病(IgAN)大鼠肾脏病理学改变的影响,探讨该方对IgAN的治疗效果及作用机制,为中医药治疗IgAN提供实验依据,拓展IgAN的临床治疗领域。方法 将30只健康雄性SD大鼠,体重130g±10g,适应性喂养1周后用代谢笼收集检测尿蛋白和潜血均为阴性,按体重随机分为3组,每组10只,分别为正常组(Normol Group)、模型组(Model Group)和肾炎宁(Syn Group)组。除正常组外其余各组均给予隔日口服0.1%牛血清白蛋白(BSA)酸化水6周,第7周开始每周连续3天尾静脉注射BSA缓冲液,连续6周,于第8周追加注射葡萄球菌肠毒素B(SEB),每周1次,连续3周以复制IgAN模型,正常组大鼠口服及注射等量生理盐水。第9周开始肾炎宁组给予肾炎宁煎剂灌胃,正常组、模型组均灌服等量生理盐水,共给药8周。分别于造模前、造模后第6周末、8周末、12周末、第16周末代谢笼收集24h尿液,行24h尿蛋白定量测定。造模后第16周末处死大鼠,股动脉取血,分离血清,用全自动生化分析仪检测血清肌酐(scr)、尿素氮(bun)含量。结果 与正常组相比,模型组大鼠血清Scr有所升高,但无明显差异(P>0.05),肾炎宁组大鼠血清Scr有所降低,但无明显差异(P>0.05),且模型组与肾炎宁组相比差异也不明显(P>0.05);与正常组相比,模型组与肾炎宁组大鼠血清BUN均有所升高,但无明显差异(P>0.05),且模型组与肾炎宁组相比差异也不明显(P>0.05);

关键词:IgA肾病, 肾炎宁,大鼠血Scr和BUN

IgA肾病又称Berger病, 是我国常见的肾小球疾病之一,也是终末期肾衰的主要原因之一。目前认为IgA肾病是导致肾纤维化的主要原因。多数学者认为多种细胞因子(如IL-1、IL-6、TNF-α等)参与了本病的发病过程,它们直接或间接导致肾小球系膜外基质的沉积,加速了肾小球的硬化。本研究通过肾炎宁对大鼠肾组织肾脏病理学改变的影响,探讨其对肾脏的保护机制。

实验材料与方法

1.1实验动物

健康雄性SD大鼠30只,清洁级,体重130g±10g,由河北医科大学动物实验中心提供

1.2 实验药物

受试药物:中药(黄芪、生地黄、党参、茯苓、白术、白茅根、女贞子、墨旱莲、川芎、三七粉、仙鹤草、甘草),由河北省中医院提供,药物水煎浓缩至含生药3.9g/ml,放入瓶中密闭4℃存放备用,18.7g/kg. cd灌胃。

1.3 主要试剂

牛血清白蛋白.葡萄球菌肠毒.琼脂糖 .反转录试剂盒.异硫氰酸(FITC)标记羊抗大鼠IgA抗.兔抗鼠多克隆TGF-β1抗体

1.4 主要仪器

匀浆器 .冰冻切片机.荧光显微镜.医学图像定量分析系统等

2 实验方法

2.1 动物分组

适应性喂养动物1周后用代谢笼留取尿液,用试纸条检测尿蛋白,尿潜血均为阴性,根据体重排序,随机分为3组:正常组10只 ,模型组10只,肾炎宁组10只。

2.2 模型制备

2.2. 1 酸化水的制备 新鲜的双蒸水中加入盐酸,浓度为8. 5 mmol/L。即1 000 ml双蒸水中加入10%盐酸3. 2 ml。1% BSA 酸化水的制备, 1 g BSA加入1000ml酸化水。4℃保存备用。

2.2.2 1% BSA缓冲液的制备 将1gBSA溶于100ml生理盐水中。现用现配。

2.2.3 造模方法 根据文献的方法[1], 除正常对照组小鼠自由饮食水外,其余两组均在其基础上隔日口服含0.1% BSA的酸化水6周, 6周后按10mg/Kg每日1次定期尾静脉注射1%BSA缓冲液,每周连续3天,于第8周按0. 4mg/kg,每周1次,连续3周,复加尾静脉注射SEB。正常组口服及注射同等量生理盐水,于16周末处死动物。

2.3治疗方法

于造模第9周开始给药,每日一次,肾炎宁组给予中药煎剂18.7g/kg.d灌胃,正常组和模型组给予相当剂量的生理盐水灌胃,各 组共给药8周。血浆标本的制备及检测

2.4造模后第16周末处死大鼠,股动脉取血,分离血清,用全自动生化分析仪检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量。

结 果

1正常组大鼠饮食正常,反应敏捷,被毛有光泽,体态充盈。其余两组在口服BAS缓冲液期间饮食、外观都与正常组大鼠无差别。尾静脉注射BAS后,两组大鼠出现倦怠,嗜睡,食欲减退等症状,3天后上述症状好转。尾静脉注射SEB后,模型组大鼠精神萎靡,少动抱团,1周以后症状改善。

2.与正常组相比,模型组大鼠血清Scr有所升高,但无明显差异(P>0.05),肾炎宁组大鼠血清Scr有所降低,但无明显差异(P>0.05),且模型组与肾炎宁组相比差异也不明显(P>0.05);与正常组相比,模型组与肾炎宁组大鼠血清BUN均有所升高,但无明显差异(P>0.05),且模型组与肾炎宁组相比差异也不明显(P>0.05);

讨论

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是一组常见的肾小球疾病,肾活检免疫病理学检查显示在肾小球的系膜区有IgA或以IgA为主的颗粒样物质沉积,临床表现以血尿为主,伴或不伴有蛋白尿,是导致慢性肾功能衰竭的一个主要原因。

1.西医认为IgAN的发病机制相当复杂。IgA的血清含量增加及其IgA1 -O糖位点基化异常是IgAN的主要诱因,多种细胞因子参 与了其发病过程,且细胞因子之间相互作用加剧了疾病的发展,基 因的多态性与IgAN的发病和进展有着密切的关系。现阶段,IgAN的确诊不是很明确,治疗也不是很成功,根本原因在于IgAN的发病机制不清楚。但我们相信,随着科学技术的发展和人类对于疾病认识深入,IgAN的发病机制会被进一步阐明。

2.中医认为 本病属本虚标实,虚实夹杂之证。先天禀赋不足,阴亏质燥,或脾胃虚弱,运化失司,阴虚则虚火旺,热伤血络,脾虚则失统摄,血不归经,则可见血尿;外感风热之邪,肺脏受袭,母病及子, 移热于肾;或内感湿热之邪,湿性趋下,流注于下焦, 灼伤肾络,皆可使血溢于脉外,形成血尿。肾主封藏,脾主固摄,脾肾不足,水谷精微自小便而出,而见尿浊。病情久延 ,气血阴阳不足,气虚不运可导致瘀血内停。湿热、痰浊、瘀血既是病因又是病理产物,三者之间亦相互影响,热邪劫津灼液,烧炼其血 ,或湿热之邪壅滞气机、阻碍血行,血行不畅,皆可使血液留滞为瘀,而血瘀气行不畅,郁而化热而成湿热。病深则阴阳俱虚而出现元气衰败,溺毒潴之灾变,最终危及生命。

参考文献

1 刘宏伟,卢影,李彩熙,等滋肾止血片对实验性IgA肾病小鼠肾组织氧自由基的影响[J]中国中医基础医学杂志,1996,(6):24

2焦坤,陈佩东,等.白茅根研究概括[J].江苏中医药, 2008, 40(1): 91-93.