生地黄总抗氧化物质超声法提取工艺研究

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摘 要：以筛选生地黄总抗氧化物质超声提取最佳工艺为目的，以FRAP法测定总抗氧化物质的抗氧化能力，并以其为评价指标。通过正交设计方法，优化超声提取工艺。结果表明，提取因素的影响程度为乙醇浓度>提取时间>提取温度>料液比，最佳提取工艺是在提取温度为40 ℃的条件下，用20倍量的80%乙醇超声提取40 min。生地黄总抗氧化物质的抗氧化能力值为0.896 mmol·g-1。

关键词：生地黄；总抗氧化物质；超声提取

中图分类号：R284 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.06.003

生地黄，为玄参科植物地黄（Rehmannia glutinosa Libosch.）的块根，有提高免疫系统、降糖、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种药理作用 [1-2]。研究表明，生地黄具有多种抗氧化成分（酚类、黄酮类、萜类、甾体等化合物），且提取这些成分时宜选择乙醇做为提取溶剂[3]。有关生地黄抗氧化物提取工艺研究的文献报道[4-6]仅是针对某单一或一类成分，这样做忽略了其它的抗氧化成分而浪费了资源；仅是以化学方法作为评价指标，这样做不能体现多类成分综合的抗氧化活性。鉴于用超声法[7]提取生地黄总抗氧化物质未见文献报道，本试验采用FRAP法测定熟地黄提取液体外总抗氧化活性，并以其为评价指标，在单因素试验的基础上，采用正交试验设计，对影响生地黄抗氧化物质提取效果的多个因素进行了考察，以期优选出超声法提取生地黄总抗氧化物质的最佳工艺，为生地黄总抗氧化物质的开发利用提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

生地黄药材（产地河南，购于河南省郑州市药材公司），低温烘干，粉碎0.425 mm备用。抗氧化试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；去离子水。

1.2 仪 器

AB204-N电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司），KQ-700DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），R206D旋转蒸发仪（上海大颜仪器有限公司），SHB-Ⅲ循环水式真空泵（上海豫康科教仪器设备），UV-9200型紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器设备有限公司） ，加样枪（德国普兰德公司）。

1.3 方 法

1.3.2 样品溶液的制备和总抗氧化物抗氧化能力值的计算 准确称取生地黄粉末 5.00 g置于100 mL具塞锥形瓶中，分别于不同的工艺条件下超声提取，将提取液减压浓缩，并定容至 100 mL容量瓶中，即为待测液。取各工艺条件下的待测液溶液10 mL，加入180 μL的FRAP工作液混匀，在37 ℃孵化3～5 min，于593 nm处测定吸光度。根据吸光度值和标准曲线，计算结果表示其抗氧化能力值（mmol·g-1）。

2 结果与分析

2.1 单因素试验结果

2.2 正交试验结果

2.3 验证性试验结果

为考察上述结果的准确性，以保证提取工艺的合理可行，取生地黄按最佳提取工艺条件重复6次试验。结果见表3。验证性结果表明：该工艺合理可行，稳定可靠，具有可操作性和重现性，生地黄总抗氧化物质的总抗氧化能力值为0.896 mmol·g-1。

3 小 结

以总抗氧化物的抗氧化能力值为评价指标的正交试验结果表明，最优超声提取最佳方案为A2B2C2D2，即用样品20倍量的80%的乙醇在温度40 ℃条件下超声提取40 min。在3个因素中， 影响生地黄中总抗氧化物提取率最重要的因素是乙醇浓度，即80%乙醇。

参考文献：

[1] 刘卫欣，卢兖伟，杜海涛，等.地黄及其活性成分药理作用研究进展[J].国际药学研究杂志，2009（4）：277-280.

[2] 曲运琴，任东植，仪蕙兰，等.环境条件对地黄杂交种子活力的影响[J].山西农业科学，2006，34（4）：49-51.

[3] 袁保刚.生地黄提取物抗氧化活性研究[D].杨凌：西北农林科技大学，2011.

[4] 李文波.酶-超声提取地黄多糖及其抗氧化性研究[J].德州学院学报，2009（4）：46-50.

[5] 田春莲，丁文.湖北地黄梓醇超声波提取及含量测定[J].安徽农业科学，2009，37（28）：3788-3789，3792.

[6] 宋子荣，谭梓骏，陈西松，等.地黄提取工艺的优化[J].中国实验方剂学杂志，2006（1）：8-9.

[7] 钟玲，尹蓉莉，张仲林.超声提取技术在中药提取中的研究进展[J].西南军医，2007（6）：84-87.