卵巢子宫内膜异位症恶变中SPOCK2基因表现失活作用分析

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摘要：目的 研究分析卵巢子宫内膜异位症恶变中spock2基因表现失活的作用。方法 选取2005年8月~2013年9月，在我院接受治疗的30例卵巢子宫内膜异位症恶变患者作为观察组，同期选取30例单纯卵巢子宫内膜异位症患者作为对照组，通过显微切割技术获取观察组患者的恶变组织、异位内膜组织和对照组患者的异位内膜组织，通过免疫组化检测比较两组患者组织中SPOCK2基因甲基化情况以及蛋白表达情况。结果观察组的恶变组织中SPOCK2基因甲基化率43.3%（13/30）显著高于异位内膜组织中SPOCK2基因甲基化率4.3%（1/23）（P0.05）；观察组患者的病变组织中SPOCK2基因蛋白表达缺失率50%（15/30）显著高于异位内膜组织中SPOCK2基因蛋白表达缺失率8.7%（2/23）（P0.05）。结论 SPOCK2基因表现失活能够证明卵巢子宫内膜异位症恶变。

关键词：卵巢子宫内膜异位症；SPOCK2基因；失活卵巢子宫内膜异位症是临床常见的妇科疾病之一，其发病率占育龄妇女的15%左右[1]。虽然内异症属于良性疾病，但其具有类似恶性肿瘤的生物学特征。恶变的卵巢子宫内膜异位症会导致卵巢癌。本次研究通过检测SPOCK2基因甲基化情况以及蛋白表达情况，探究该基因失活在卵巢子宫内膜异位症恶变的作用，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料本次研究选取2005年8月~2013年9月，在我院接受治疗的30例卵巢子宫内膜异位症恶变患者作为观察组，同期选取30例单纯卵巢子宫内膜异位症患者作为对照组。观察组患者年龄32～68岁，平均年龄（42.3±12.6）岁；对照组患者年龄33～69岁，平均年龄（43.5±11.5）岁；本次实验中所有患者均已被详细告知实验内容，自愿参与本次实验且已签署知情同意书，符合医学伦理学要求。

1.2方法

1.2.1诊断标准①癌组织和异位内膜共同存在于同一病变组织，癌组织内有内膜异位病灶；②两者具有组织学相关性；③排除其他原发肿瘤的存在；④排除内分泌、免疫及代谢性疾病的患者。

1.2.2检测方法①显微切割：采用石蜡包埋组织标本，进行连续切片，切片厚度4～10μm，脱蜡后行常规HE染色。取1张4μm切片封片后进行组织切割，在取一张10μm切片不封片进行显微切割获取靶组织。依据封片的样片镜下识别靶组织，在显微镜下对切片中的靶组织进行定位，使用手术刀片切割靶组织。观察组患者的卵巢组织中获取恶变组织30份，异位内膜组织23份；对照组患者的异位内膜组织23份。②酶切技术检测组织中的SPOCK2基因甲基化：采用试剂盒提取靶组织基因组的DNA，基因组DNA经亚硫酸盐修饰后悬于双蒸水中，在修饰的过程中使用足量的甲基转移酶处理[2]。SPOCK2基因的启动子经引物扩增后，由限制性内切酶消化，在紫外灯下观察检测结果。③免疫组化法检测SPOCK2基因的蛋白表达：采用SPOCK2山羊抗人多克隆抗体以1：200进行稀释，以PBS替代其作为阴性对照， 其试剂盒附带阳性作为阳性对照。SPOCK2正常表达细胞质，免疫组化结果判定在光镜下观察。免疫组化结果评定标准依据阳性细胞百分比及阳性细胞染色强度进行评分（a×b）：a代表阳性细胞的百分比对应评分，无阳性细胞，a=0；阳性细胞＜10%，a=1；阳性细胞10～50%，a=2；阳性细胞＞50%，a=3。b代表阳性细胞的染色强度，不显色，b=0；浅黄色，b=1；棕黄色，b=2，深黄色，b=3.评分结果为0～3分则为阴性，4～9分则为阳性。

1.3统计学方法所有资料均采用统计学软件SPSS17.0进行处理，计数资料采用（n，%）表示，用χ2进行检验，P

2结果

2.1不同组织中SPOCK2基因的甲基化情况观察组的恶变组织中SPOCK2基因甲基化率43.3%（13/30）显著高于异位内膜组织中SPOCK2基因甲基化率4.3%（1/23）（P0.05）。

2.2不同组织中SPOCK2基因的蛋白表达情况观察组患者的变组织中SPOCK2基因蛋白表达缺失率50%（15/30）显著高于异位内膜组织中SPOCK2基因蛋白表达缺失率8.7%（2/23）（P0.05）。

2.3SPOCK2基因启动区域中甲基化与蛋白表达情况在出现SPOCK2基因甲基化的23份组织标本中，有22份组织标本的蛋白表达缺失，而在83份SPOCK2非甲基化组织标本中，只有5份出现蛋白表达缺失的情况，由此可见，SPOCK2的甲基化能够导致蛋白表达缺失（P

3讨论

近年来，随着内异症的发病率不断增加，恶变的病例数也有上升的趋势，内异症恶变的预防及治疗是急需解决的问题[3]。基因异常甲基化是一种和肿瘤形成密切关系的表观遗传学改变，也是肿瘤相关基因失活的主要机制。有研究表明hMLH1基因启动子区域的异常甲基化后的基因能够表达沉默致使内异症恶变为卵巢及生殖道外内膜样癌[4]。还有研究表明hMLH1基因表现失活与卵巢内异症的恶变也有着密切的相关[5]，上述研究结果显示，表观遗传改变在内异症恶变过程中具有十分重要的作用。

SPOCK2属于糖蛋白的一种，由一个蛋白结构及软骨素和乙酰肝素组成，在功能上具有与核心蛋白反向的作用。通过本次研究发现，恶变组织中SPOCK2基因甲基化发生率及蛋白表达缺失率均要高于异位内膜，可见SPOCK2基因甲基化导致的蛋白表达缺失可能是由于卵巢内异症恶变而引发的重要靶点，SPOCK2基因的表现失活可作为内异症恶变的早期征兆。

参考文献：

[1]Xu B，Hamada S，Kusuki I，et al．Possible involvement of loss of heterozygosity in m alignant transformation of ovarian endometriosis[J]．Gynecol Oncol，2011，（120）：239-246.

[2]任芳，任风岩，波．在位内膜hMLH1异常甲基化与卵巢子宫内膜异位症恶变相关性研究[J]．中华妇产科杂志，2010，（45）：252-255.

[3]任芳，王单波，李彤．SPOCK2基因表现失活在卵巢子宫内膜异位症恶变中的作用[J]．中华妇产科杂志，2011，46（11）：822-823.

[4]Baylin SB，Herman JG．DNA hypermethylation in tumorigenseis：epigentics joins genetics[J]．Trends Genet，2010，16:63-70.

[5]Martini M，Ciccarone M，Gargenese G，et al．Possible involvement og Hmlh1,P16(INK4a)and PTEN in the m alignant teansfomation of endometriosis[J]．Int J Cancer，2012,102,398-406.