3种常用化疗药对正常大鼠血清胃泌素及D-木糖醇浓度的影响

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摘要：目的：观察3种常用化疗药对正常大鼠血清胃泌素及D－木糖醇浓度的影响。方法：将动物随机分为4组，即对照组、CTX组、5一Fu组和THP组，检测胃泌素及D一木糖醇浓度等指标。结果：3组化疗组上述指标与对照组比较，差异有统计学意义(P

关键词：化疗药；胃泌素；D－木糖醇

中图分类号：R－33　文献标识码：A　文章编号：1673-7717(2007)05-0874-03

目前恶性肿瘤已是一类严重威胁人类健康的多发病、常见病，在循证医学原则指导下的个体化、综合治疗是主要手段，临床上约有70％左右的癌症患者在接受化疗，而中医中药的应用也发挥着重要作用。化疗药可影响中医证候，但缺乏系统研究，为此笔者观察了3种常用化疗药环磷酰胺(cTX)、5－氟脲嘧啶(5－Fu)、盐酸吡柔比星(THP)对正常大鼠血清胃泌素及D－木糖醇浓度等变化的影响，现报道如下。

1材料与方法

1．1主要材料　动物与分组：SPF级昆明SD大鼠60只，雄性，60日龄，体重(200±20)g。由浙江中医药大学实验动物研究中心提供。大鼠，经编号、标记、称重，采用数字随机法分成4组(对照组，CTX组，5一FU组和THP组)，每组15只，每笼5只，适应性饲养3天后进行实验。

试剂与仪器：环磷酰胺(CTX)，批号：040901，规格：200mg/瓶；5－氟脲嘧啶(5－Fu)，批号：040505，规格：250mg／瓶；盐酸毗柔比星(THP)，批号：040804，规格：10mg／瓶；间苯三酚试剂，60mL×3瓶，为南京建成生物工程研究所产品；13．3mmol／L(2g／L)D－木糖醇标准品储备液2mL×1支，为南京建成生物工程研究所产品；标准品稀释10mL×1支，为南京建成生物工程研究所产品；胃泌素放射免疫分析药盒，为北京北方生物技术研究所产品，批号：050120；SHANGPINC FAl004分析天平仪；数字式温度计7M902C，AnKe CENTRIFUGE DL-5－B离心机；电子天平秤；722型光栅分光光度仪等。

1．2方法与步骤实验第l天，对照组：腹腔注射生理盐水2mL／鼠；化疗组给药剂量和给药途径按文献[1]CIX组：腹腔注射CTX，剂量为200mg／kg，以生理盐水稀释至20mg／mL；5－Fu组：腹腔注射5－Fu，剂量为180mg／kg，以生理盐水稀释至18mg／mL；THP组：腹腔注射THP，剂量为12mg／kg，以5％葡萄糖注射液稀释至1．2mg／mL，均1次给药。

每日定时定量给予标准颗粒饲料，至次日收集剩余食量，称重并计算每日进食量，计算方法：每日给予量一次日剩余食量；每3天记录1次体重、肛温、腹泻、污秽情况、拉尾排便次数、拱背、毛色枯槁、嗜睡疲倦、乏力(悬空拉尾抵抗时间)等情况填入于自制的“化疗药对正常大鼠脾虚证候影响的实验记录表”，作为大鼠脾虚征象详情记录，共观察21天。

实验第7、14、21天分批(每批每组5只，已禁食18h)秤重，眼眶球后取血1―2mL，静置2h，以3000r／min离心10min。取血清O．5～lmL，送检作胃泌素和D－木糖醇浓度测定；后作颈椎脱臼处死，解剖取出胸腺、脾脏，去筋膜及脂肪组织，秤重，与体重之比，作胸腺指数、脾脏指数测定；取出胃窦和空肠组织，生理盐水清洗，10％甲醛溶液固定，作病理形态学检测。

血清胃泌素测定方法：采用放射免疫方法(步骤操作按药盒说明)。

血清D－木糖醇浓度测定方法：采用间苯三酚法(步骤操作按药盒说明)。

大鼠脾虚证诊断标准：参照文献[2]根据大鼠本身的一些临床特点，结合人类脾虚证的诊断标准，确定以大鼠的食欲不振(食量减少)、消瘦(体重下降)、大便溏泄(拉尾排便次数增多，便形溏稀，污秽)、倦怠乏力(悬空拉尾抵抗力减弱)、毛发不荣、拱背、萎靡嗜睡、眯眼等症状、体征为主要诊断因素。选择几种比较公认的代表脾虚主要病理改变的客观指标作为辅助诊断指标：血清胃泌素、血清D－木糖醇浓度等。

拉尾排便率测试方法：观察1min内，牵拉大鼠尾巴时，出现排便次数，以排便次数与拉尾次数之比表示。

悬空拉尾抵抗力测试方法：手提大鼠尾巴，呈悬空状，从大鼠摇晃挣扎，立即开始计时，直至大鼠无力旋转挣扎，统计其时间，可反映其乏力程度。

统计学处理方法：数据统计采用统计软件包SPSS11．5，数值以均数(x)±标准差(s)表示，两组间比较用t检验。

2　结果

2．1 一般状态实验第2天起，化疗各组出现明显的食量减少，部分有稀便，污秽，神软萎靡，喜聚堆蜷伏，毛色枯槁或散乱竖毛，拱背，活动缓慢，反应迟钝等动物脾虚证候[1]。程度上CTX组最重，THP组次之，5－Fu组相对较轻。第3、4天上述症状表现最明显，CTX组和5－FU组同时全部出现稀便及污秽，THP组大部分出现稀便，且化疗组各组消瘦明显(体重减少明显)，程度仍以CTX组为重。第6天起化疗组全部并出现被毛脱落，逐渐加重，至第10天最为严重，程度以5－Fu组最重，CTX组次之，THP组最轻。第14天起掉毛渐见减少，趋向好转，至第18天掉毛止。其好转程度以THP组为最佳。CTX组和5－Fu组稀便和污秽于第11天起渐见好转，至第14天止。THP组稀便症状第7天即止。CTX组、5－Fu组、THP组3组出现的脾虚症状均以第2-4天为最重，分别以第16天、第12天、第8天开始好转，但至第2l天，症状与对照组比较仍有显著差异，尤以CTX组为最显著。

2．2食量化疗组各组于实验第2天起食量与正常组比较均有明显差异，以crx组最显著，约为正常组的1／7，且持续较低，至第17天后食量渐见有增，21天仍显著低于正常组。5－Fu组和THP组食量以第2、3、4天最低，第7天起食量增加，尤以5－Fu组为显著，至第9天5－Fu组食量与正常组等量，第13天后超过正常组，而THP组食量渐见增加，但直至第21天仍稍低于正常组。

2．3体温　化疗组各组在整个实验周期中每次的肛温测试结果均与正常组无差异。

2．4拉尾排便试验　化疗组各组除见不同程度出现稀便外，拉尾排便率也见增高，其中实验第4天时，CTX组拉尾排便率达13／15(86．6％)、5－Fu组达11／15(73．3％)、THP组达9／15(60％)；而对照组第4天时，拉尾排便率为2／15(13．3％)。在实验第9天时，CTX组拉尾排便率为8／15(53．3％)、5－Fu组为6／15(40％)，而THP组则为2／15

(13．3％)，与正常组无差异。实验第14天起至实验第20天，化疗组各组的拉尾排便率与正常组比较均无显著差异。

2．5体重增长的差异　见表1。

从各组用药前后体重变化来看，化疗前各组无明显差异，用药后各组初期体重呈不同程度下降，第3天最明显，分别为：CTX组为(190．80±8．43)g，5－Fu组为(182．80±5．17)g，THP组为(190．60±9．96)g，p

2．6体力的影响――悬空拉尾时间测定　化疗前各组悬空拉尾时间无明显差异，化疗后第7天各用药组悬空拉尾时间较之对照组明显缩短，对照组为(135．40±29．32)s，CTX组为(54．4JD±5．90)s，5一Fu组为(45．60±13．35)s，THP组为(60．00±22．27)8，差异均有统计学意义(P0．05)，而CTX组和5－Fu组分别为(83．20±24．59)8、(80．20±7．98)s，较第7天略有增长，但较对照组仍然明显缩短(PO．05)，分别为(134．60±12．64)8和(123．60±6．69)8，见表2。

2．7血清胃泌素的测定　化疗后第7、14和21天，化疗各组在血清胃泌素水平与正常组相比均明显降低，其中第1、14天，p

2．8血清D一木糖醇浓度的测定　化疗后第7、14和2l天，血清D－木糖醇水平化疗各组与正常组相比均明显降低。各组自身前后比较，以第14天降低最明显，而后血清D－木糖醇平略有上升；第21天，THP组和5-FU组血清D－木糖醇水平较第14天略有升高，而较第7天仍然降低，且均p0．05，无统计学意义，说明CTX组小肠吸收功能已经恢复至第7天水平，与病理学改变相应。具体见表4。

3　讨论与分析

肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病，近年来发病率有上升趋势，全球每年新发病人数约为1000万人，而我国为200万，循证医学原则指导下个体化、综合治疗的模式已被广泛接受，中医药在这综合治疗大家庭中占有一席之地[3]。中医药的应用讲究的是在中医理论指导下的辨证施治，那么现代治疗尤其是化疗对中医证候的影响规律是被关注的问题。

笔者选择了临床最常用的3种化疗药CTX、5－FU和THP观察对正常大鼠脾虚证的影响。化疗各组大鼠从实验第2天起出现典型的脾虚证，第7天至14天最严重，各种化疗药所表现的脾虚证程度可不一样，但却是一种普遍现象。各化疗组在整个实验周期中肛温与正常组无差异。说明化疗所致脾虚证以脾气虚为主，从体重的变化也说明了这一点。大鼠悬挂拉尾试验观察的是耐力和心理疲劳的程度，本实验中发现对照组大鼠耐力持续稳定增长，而化疗各组耐力增长较对照组明显减慢，其中crx组出现明显减慢并且持续2l天仍明显少于正常组，而5－Fu组和THP组则在第14天开始好转，至第2l天与对照组比较，无明显差异。祖国医学认为脾胃后天之本，气血生化之源，机体能量代谢与消化功能都与脾胃有密切关系，只有脾胃的运化功能正常，才能够产生足够的气血以营养全身，脾为卫，脾输精于肺才能有产生足够的卫气以温煦全身；脾主肌肉，脾虚则肌肉不充，致乏力，反应迟钝。脾虚运化功能失常，水谷精微不能化生气血，还会导致多个脏腑器官功能失常。脾虚则气血生化不足，化疗后大鼠多数出现严重脱毛，亦可能与此有关。动物实验观察证明了化疗可致脾虚。

中医的脾胃功能与胃肠内分泌活动一胃肠激素关系密切，已有研究表明脾虚患者消化道功能处于低下或紊乱的状态，血清胃泌素含量降低[4-6]，本研究发现化疗后大鼠出现了典型脾虚症状时血清胃泌素较正常大鼠明显减低，其水平与脾虚症状一致，可能是化疗致胃黏膜受损，G细胞数量减少和功能降低所致，且笔者发现胃泌素水平下降程度还与胃黏膜损伤程度相应(另文报道)。

木糖是一种水溶性戊糖，它和葡萄糖及半乳糖一样由同一转送系统吸收，正常人口服后约65％以上由十二指肠和上段空肠吸收，吸收后不被组织同化，亦不受肝脏、胰腺和甲状腺机能的影响，测定D－木糖醇的血清含量可反映小肠吸收功能的强弱。脾主运化，脾气虚弱主要表现为消化系统功能的低下，由此选择较能准确反映小肠吸收功能的D一木糖醇试验作为脾虚的观测指标，已被许多学者认可[7-8]。本实验发现，正常大鼠用CTX、5－FU、THP后，血清D－木糖醇含量明显降低，伴随脾虚症状的出现。符合脾虚证诊断标准，说明上述3种化疗药物可以导致正常大鼠脾虚小肠吸收功能的减弱可能是其病理基础之一。

本动物实验从临床表现、胃肠功能等方面提示了3种化疗药物可以导致正常大鼠脾虚证的发生，为临床深入研究提供了依据。

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