绵阳地区轮状病毒感染性腹泻的血清学分型研究
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摘 要 目的：了解绵阳地区轮状病毒感染的流行情况、血清型情况。方法：采用双抗夹心ELISA技术检测RV抗原，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对RV病毒株进行血清学鉴定。结果：对222例标本进行ELISA法检测，RV阳性121例，阳性率54.5%；血清型检测共测得G1 36例(29.75%)，G2 15例(12.37%)，G3 45例(37.19%)，G4 19例(15.70%)，G9 3例(2.47%)。另有3例未能用现有引物分型。结论：轮状病毒是引起绵阳地区婴幼儿病毒性腹泻的主要原因，绵阳地区流行的RV以G1型为主，其次为G3型。
关键词 轮状病毒感染 血清学 分型
doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2009.03.072
轮状病毒(RV)是人和动物病毒性腹泻的最主要原因。RV属于呼肠孤病毒科，基因组为双股RNA，由11个基因片段组成，目前已知轮状病毒可分为7个组(A～G)，以A组所导致的婴幼儿腹泻最为常见[1、2]。发病高峰期在每年的秋季和初冬季节，是婴幼儿的常见病。
资料与方法
2006年12月～2007年12月我院就诊婴幼儿腹泻222例(肉眼脓血便除外)，其中男126例，女96例，平均年龄12.23±7.14个月。所有粪便标本均做细菌培养及镜检以除外细菌性肠炎。标本置-86℃低温冰箱保存备用。
方法：用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RV抗原，采用IDEIA Rotavirus试剂盒，按说明书操作。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对RV病毒进行血清学鉴定。
统计学方法：采用SPSS 11.0进行统计，计量资料用X±S表示，两组间比较采用t检验，计数资料采用X2检验。
引物设计：所用引物见表1，方法参照JORGE F法改进后进行[2]，扩增A组轮状病毒VP97基因第51～329为核苷酸片段，引物序列如下：
上游引物P1：5’-GRARGGTATTGAATATACCAC-3’
下游引物P2：5’-GATCCTGTTGGCCATCC-3’。
结 果
RV检测结果：本研究共采集绵阳市人民医院就诊婴幼儿腹泻粪便标本222例进行检测，ELISA法检测RV阳性121例，阳性率54.5%。其中住院病人88例，门诊病人33例。男67例，年龄10.97±6.67个月；女54例，年龄11.37±5.69个月。经t检验，显示两组间年龄差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
阳性患儿腹泻时间分布：我们将经ELISA法检测为RV阳性的患儿，按照腹泻月份进行分组研究，发现发病高峰集中在2006年12月份和2007年10、11、12月份。经X2检验显示不同月份的阳性检出率差异有显著性意义(P
PCR检测结果：对121例RV阳性患儿标本运用RT-PCR方法进行血清型检测，检测出G1～G4、G9共5个血清型，共检测出G1 36例(29.75%)，G2 15例(12.37%)，G3 45例(37.19%)，G4 19例(15.70%)，G9 3例(2.47%)。另有3例未能用现有引物分型。
讨 论
轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一，估计全世界约有40%的感染性腹泻由轮状病毒引起[3]，发展中国家每年有60万～87万儿童死于重型轮状病毒腹泻，尽管在发达国家轮状病毒感染后很少发生死亡，但高发病率也带来了很大的经济损失。本文主要针对四川绵阳地区的轮状病毒感染情况进行了具体的研究，以期对婴幼儿轮状病毒性腹泻病的防治有一定的帮助。
本研究结果显示2006年12月～2007年12月间绵阳地区婴幼儿腹泻病因中轮状病毒感染阳性率为达54.5%，可见轮状病毒依然是造成本地区婴幼儿腹泻的主要原因。由轮状病毒感染引发的婴幼儿腹泻常年均可发病，但不同季节的检出率不同，以10、11、12月份检出率最高，这说明轮状病毒是这3个月份婴幼儿腹泻的主要病原，也是流行的主要季节，据上分析，我们建议在每年的8～9月份，采用疫苗接种预防和控制婴幼儿轮状病毒腹泻。本研究发现，本地区23个月的婴幼儿RV检出率较低，与国内相关报道一致[4]，该结论支持了母体抗体对RV感染具有保护作用的观点，也提示了RV疫苗的适应对象为
轮状病毒属呼肠孤病毒属，基因组由11个双链核糖核酸(dsRNA)节段组成，分别编码病毒的6个结构蛋白(VP l～4、VP6、VP7)和5个非结构蛋白(NSP l～5)，其中4种蛋白VP6、VP7、VP4及NSP4具有重要作用。根据VP6抗原性不同可分为7组(A～G组)，其中A组RV主要引起婴幼儿和新生动物的重症腹泻。VP7的抗原特异性与编码基因的核苷酸序列有关，其血清型与基因型的划分相一致，根据VP7特异性不同将RV分为不同的G血清型，至今已发现14个G血清型(G1～G14)，其中G1～G4为主要的流行株。本研究发现绵阳地区轮状病毒的主要流行型为G1和G3，此外还检测出了少量G2、G3、G4、G9型。此结果与其他地区报道不同，上海地区以G1为主，兰州地区以G3为主，这说明轮状病毒的感染存在地域差异。本研究仍有未分型病例，可能原因：①可能为其他的G型感染，暗示可能有新型别和新“G-G”组合的出现。G型分布随时间不同而发生变化的情况见于不同国家和地区[5]。近年来世界各国报道RV异常病毒株感染有增多趋势，相继发现了G5、G10、G8、G12等型[6]，可能与不同毒株之间的基因重组或由动物传播给人等因素有关。②由于粪便中含RNA酶抑制剂或部分标本中病毒dsRNA降解和含量太少，因此RT-PCR不能对部分RV dsRNA进行扩增。
本研究时间仅为1年，样本量有限，相关的研究有待进一步深入。
参考文献
1 金奇.医学分子病毒.北京：科学出版社，2001：540-565.
2 方肇寅，晋圣瑾，秦树民，等.PCR方法用于我国A组轮状病毒的分型研究.病毒学报，1994，10(4)：316-321.
3 胡亚美，江载芳，诸福棠.实用儿科学.北京：人民卫生出版社，2003：1294-1295.4 金玉，黄湘.兰州地区婴幼儿病毒性腹泻的分子流行学研究.中国实用儿科学杂志，2006，21(1)：18.
5 Santos N，Hoshino Y.Global distribution of rotavirus serotypes/genotypes and its implication for the development and implementation of an effective rotavirus vaccine.Rev Med Virol，2005，15(1)：29-56.
6 O’Halloran F，Fanning S.Molecular genotyping of Irish rotavirus strains.Methods Mol Biol，2004，268：89-102.