S100A8在胃癌中的表达及临床意义

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【摘要】 目的 探讨胃癌中s100a8基因的表达情况，以及与胃癌患者临床病理特征之间的相关性。方法 采用Real time RT-PCR和Western blot方法分别检测46例胃癌和相应癌旁组织中S100A8基因mRNA和蛋白的表达情况，并用统计学方法分析其表达与临床病理特征的关系。结果 在46例胃癌标本中，分别有22例（47.8%）和20例（43.5%）出现S100A8基因mRNA和蛋白的表达显著升高。S100A8的表达异常升高与肿瘤的浸润深度和淋巴结转移密切相关（P

【关键词】 胃癌； S100A8； mRNA； 蛋白

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.03.008

胃癌是严重危害人类健康的疾病之一，我国是胃癌的高发区，目前，胃癌是我国第三常见的恶性肿瘤[1]。近年来有研究发现，S100A8在多种肿瘤中发挥着重要作用[2,3]。为了解S100A8与胃癌的关系，笔者研究了S100A8在胃癌中的表达情况以及与胃癌患者临床病理特点之间的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 共选取46例胃癌患者，男25例，女21例；年龄33～76岁，中位年龄61岁。术中收集切除的胃癌原发灶、癌旁正常黏膜。所有患者术前均未作化疗、放疗等抗肿瘤治疗。经影像学和病理学确诊为胃癌。根据国际抗癌联盟（UICC）2002年第6版的标准进行TNM分期。

1.2 RNA和蛋白的制备 取自临床的标本，迅速保存于-80 ℃深低温冰箱内。采用美国Invitrogen公司的Treizol试剂提取总RNA，具体方法参照说明书进行。采用Western及IP细胞裂解液（江苏南通碧云天公司）参照说明书抽提胃癌组织及癌旁正常组织总蛋白，BCA法测定蛋白浓度。

1.3 Real time RT-PCR 将总RNA用M-MLV逆转录酶（Takara公司）逆转录成cDNA，随后进行PCR反应。目的基因S100A8和作为内参照的GAPDH基因引物通过Primer5软件设计，由上海生工生物技术服务有限公司合成。用荧光定量PCR仪进行扩增。所有样品均复管检验。数据收集由荧光定量PCR仪支持软件完成。S100A8 mRNA相对表达水平=S100A8总拷贝/GAPDH总拷贝。

1.4 Western blot 配置10％SDS-PAGE分离胶，上样量50 μg蛋白，100～150 V电泳约1 h，应用湿转装置（Bio-Rad）转移至PVDF膜（Millipore），100 V 90 min。5％脱脂牛奶封闭2 h。一抗孵育4 ℃过夜：S100A8（Santa Cruz，羊抗人多克隆抗体，1∶400）。二抗（Santa Cruz，1∶5000）室温孵育2 h，暗室曝光显影。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行统计分析，S100A8的表达情况与胃癌临床病理特征之间的相关性用卡方检验。以P

2 结果

2.1 S100A8 mRNA在胃癌中的表达情况 全部46例胃癌及相应的癌旁正常黏膜组织中均收获了较高质量的总RNA。S100A8 mRNA在其中的22例胃癌组织中相对表达量显著升高（22/46，47.8%），明显高于癌旁正常组织（P

2.2 S100A8蛋白在胃癌中的表达情况 全部46例胃癌标本中，有20例出现S100A8蛋白表达显著升高（20/46，43.5%），明显高于癌旁正常组织（P

2.3 S100A8表达与胃癌临床病理特征的关系 S100A8表达升高与胃癌的浸润深度、淋巴结转移程度显著相关（P

3 讨论

S100A8是S100蛋白家族中的一员，又叫S100钙结合蛋白A8（S100 calcium binding protein A8），它与S100A9形成非共价复合物结合于细胞膜脂质体，具有广泛的生物学功能，如参与信号传导，诱导细胞凋亡，影响细胞骨架形成等[4]。已有研究发现，S100A8在肝癌，食管癌等多种恶性肿瘤中出现异常过表达[2,3]。为了解S100A8与胃癌之间的关系，本研究观察了S100A8在胃癌组织中的表达情况。

笔者分别检测了胃癌组织中S100A8 mRNA和蛋白的表达情况，结果表明，在近半数的胃癌组织中出现了S100A8表达的显著升高。在出现S100A8 mRNA表达升高的22例中，有20例出现了S100A8蛋白表达升高，这也说明了本研究方法和结果的准确性。结合胃癌患者的临床病理资料发现，S100A8的异常表达升高，与肿瘤的浸润深度和淋巴结转移程度密切相关。随着浸润深度和淋巴结转移的进展，S100A8的表达也越高。

以往的研究中发现，在TPA（12-o-tetrade canoylphorbol-13-acetate）诱导小鼠皮肤肿瘤的模型中，恶性肿瘤中S100A8表达明显升高，而良性肿瘤中无表达[5]。相似的，用azoxymethane诱导的小鼠结肠癌中S100A8表达也发现升高[6]。这些均提示S100A8可能参与了上皮来源的恶性肿瘤的发生发展过程。结合本研究的结果提示，S100A8很可能参与了胃癌发生发展的过程，因此，深入研究S100A8在胃癌发生发展中生物学功能的分子机制，将有助于了解胃癌分子机制，也为阐明S100和胃癌的相关性提供重要理论依据。

参 考 文 献

［1］ Yang L, Parkin DM, Ferlay J, et al. Estimates of cancer incidence in China for 2000 and projections for 2005［J］. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2005,14(1):243-250.

［2］ Luo A, Kong J, Hu G, et al. Discovery of Ca2+-relevant and differentiation-associated genes downregulated in esophageal squamous cell carcinoma using cDNA microarray［J］. Oncogene,2004,23(6):1291-1299.

［3］ Arai K, Yamada T, Nozawa R. Immunohistochemical investigation of migration inhibitory factor-related protein (MRP)-14 expression in hepatocellular carcinoma［J］. Med Oncol,2000,17(3):183-188.

［4］ Kerkhoff C, Klempt M, Sorg C. Novel insights into structure and function of MRP8(S100A8) and MRP14(S100A9)［J］. Biochim Biophys Acta,1998,1448(2):200-211.

［5］ Gebhardt C, Breitenbach U, Tuckermann JP, et al. Calgranulins S100A8 and S100A9 are negatively regulated by glucocorticoids in a c-Fos-dependent manner and overexpressed throughout skin carcinogenesis［J］. Oncogene,2002,21(27):4266-4276.

［6］ Chaurand P, DaGue BB, Pearsall RS, et al. Profiling proteins from azoxymethane-induced colon tumors at the molecular level by matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry［J］. Proteomics,2001,1(10):1320-1326.

（收稿日期：2011-11-25）