重组aFGF乳酸菌的构建\表达及其对小鼠溃疡性结肠炎的药效研究

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摘要：采用分子克隆技术构建携带人酸性成纤维细胞生长因子（ａｃｉｄic ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ， ａＦＧＦ）基因序列的乳酸菌重组表达载体ｐＧＭＮ４，转化并筛选出高效表达ａＦＧＦ的重组菌株，制成活菌制剂。口服５％葡聚糖硫酸钠（ＤＳＳ）溶液７ｄ诱导小鼠溃疡性结肠炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ， ＵＣ），在造模同时分别给予高、中、低剂量活菌制剂灌胃１７ｄ。通过比较小鼠的毛色、体重、便血、结肠长度、病变组织的髓过氧化物酶（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ， ＭＰＯ）活性，以及观察结肠组织病理形态学变化，验证重组ａＦＧＦ乳酸菌对ＤＳＳ诱导的小鼠ＵＣ的预防和治疗效果。实验结果表明，重组ａＦＧＦ乳酸菌的表达量可达５０μｇ／ｍＬ，高剂量重组活菌制剂能够显著改善小鼠的一般情况和溃疡导致的结肠缩短，促进组织修复，保持结肠结构的完整性，并下调ＭＰＯ的活性。重组ａＦＧＦ乳酸菌对小鼠ＵＣ具有良好的预防和治疗效果，将为ＵＣ治疗制剂的开发提供更加广阔的思路。

关键词：乳酸菌；人酸性成纤维细胞生长因子；溃疡性结肠炎

中图分类号：Ｑ８１５文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2508-03

Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ａｃｉｄｉｃ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ ｉｎ

Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｃ ａｎｄ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ ｉｎ Ｍｉｃｅ

ＴＯＮＧ Ｌｅｉａ，ＺＨＡＮＧ Ｑｉ－ｈａｏａ，ｂ，ＱＩＵ Ｚｈｕａｎｇ－ｗｅｉａ，ＳＵ Ｚｈｉ－ｊｉａｎａ，ｂ，ＣＨＥＮ Ｈｏｎｇ－ｘｉａａ，ＨＵＡＮＧ Ｙａ－ｄｏｎｇａ，ｂ

（ａ． Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｂ． Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｊｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６３２， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｖｅｃｔｏｒ ｐＧＭＮ４ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｃｉｄｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ （ａＦＧＦ） ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． Ｖｅｃｔｏｒ ｐＧＭＮ４ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｉｎｔｏ Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｃ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａＦＧＦ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ． Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌ． ｌａｃｔｉｃ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｅｘｔｒａｎ ｓｏｄｉｕｍ ｓｕｌｐｈａｔｅ （ＤＳＳ）． Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌ． ｌａｃｔｉｃ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｂｙ ｓｔｏｍａｃｈ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｗｉｔｈ Uｌｃｅｒａｔｉｖｅ Cｏｌｉｔｉｓ（ＵＣ） ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｆｏｒ １７ ｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ． Ｓｏｍｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｇｅｎｅｒａｌ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ， ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ， ｓｔｏｏｌ， ｃｏｌｏｎ ｌｅｎｇｔｈ ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ （ＭＰＯ） ｉｎ ｕｌｃｅｒａｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａＦＧＦ ｉｎ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ５０ μｇ／ｍＬ； ｈｉｇｈ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌ． ｌａｃｔｉｃ ｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｌ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ， ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ， ｓｔｏｏｌ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ， ｋｅｅｐ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｏｆ ｃｏｌｏｎ， ａｎｄ ｌｏｗｅｒ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＭＰＯ． Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌ． ｌａｃｔｉｃ ｃｏｕｌｄ ｐｒｅｖｅｎｔ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＵＣ， ａｎｄ ｗｏｕｌｄ ｂｅ ａ ｎｅｗ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｃ； hｕｍａｎ ａｃｉｄｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ； Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ

溃疡性结肠炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ，ＵＣ）［１］又称非特异性溃疡性结肠炎，是一种原因不明的直肠和结肠炎性疾病，普遍结论认为是环境、遗传、免疫、心理及感染等多种因素共同影响的结果。病变主要累及大肠黏膜及黏膜下层，范围多自远端结肠开始，可逆行向近端发展，甚至累及全结肠及末段回肠，呈连续性分布，由于反复发作，迁延不愈，给患者身心带来不适。

酸性成纤维细胞生长因子（ａｃｉｄｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ａＦＧＦ）是成纤维细胞因子家族中的基本成员，是一类对来源于中胚层和神经外胚层的多种类型细胞具有广泛生物学活性的细胞生长因子［２］。ａＦＧＦ包括促分裂活性与非促分裂激素样活性，其中促分裂活性主要包括促血管生成、组织发生、创伤修复以及神经营养等作用；而非促分裂激素样活性则主要有抑制细胞凋亡、降低血压、调节细胞Ｃａ２＋平衡、促激素分泌和参与中枢反馈调节［３，４］。

在前期研究的基础上，采用分子克隆技术构建人ａＦＧＦ转基因乳酸菌并制成活菌制剂，开展重组ａＦＧＦ乳酸菌对小鼠溃疡性结肠炎的预防和治疗作用研究，为实现ａＦＧＦ口服给药治疗消化道溃疡奠定前期试验基础。

１材料与方法

１．１材料

１．１．１质粒与试剂载体ｐＭＧ３６ｅ、乳酸菌ＭＧ１３６３、植物乳杆菌、Ｅ．ｃｏｉｌ ＪＭ１０９ 由暨南大学医药生物技术研究开发中心实验室保存，乳酸菌ＮＺ９７００购自荷兰ＮＩＣＯ公司。质粒小体提取试剂盒、ＤＮＡ凝胶回收试剂盒购自天根生化科技北京有限公司。限制性内切酶ＳｐｈⅠ，ＳａｃⅠ，ＮｃｏⅠ，ＸｈｏⅠ，ＨｐａⅠ购自ＴａＫａＲａ公司，ＥａｒⅠ购自ＮＥＢ公司。鼠抗人ａＦＧＦ抗体购自Ｒ＆Ｄ公司，羊抗鼠二抗购自广州碧云天公司。ＰＶＤＦ膜购自Ｐａｌｌ公司。ＤＳＳ购于上海西宝生物制剂公司，相对分子量为５ ０００，用生理盐水配制成５％的溶液。ＳＡＳＰ购于上海三维制药有限公司，批号２０１００７１２。髓过氧化物酶（ＭＰＯ）试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

１．１．２培养基ＬＢ培养基（１ ０００ ｍＬ）：蛋白胨１０ ｇ，酵母浸出粉５ ｇ，氯化钠１０ ｇ（固体培养基加琼脂粉１２ ｇ）；ＧＭ１７培养基（１ ０００ ｍＬ）：Ｍ１７培养基３７．２５ ｇ，葡萄糖５ ｇ（固体培养基加琼脂粉１２ ｇ）；ＢＣＰ培养基（１ ０００ ｍＬ）：蛋白胨２０ ｇ，酵母粉５ ｇ，氯化钠４ ｇ，乙酸钠１．５ ｇ，溴甲酚紫４０ ｍｇ，蜜二糖５ ｇ（固体培养基加琼脂粉１２ ｇ）。

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１．１．３实验动物采用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，８周龄，体重（２０±２）ｇ／只，由广东省医学实验动物中心提供。

１．２方法

１．２．１重组人ａＦＧＦ乳酸菌的构建及表达首先从植物乳杆菌基因组中扩增出半乳糖苷酶基因（ｍｅｌＡ）片段，用ＳｐｈⅠ和ＳａｃⅠ双酶切后，与穿梭质粒ｐＭＧ３６ｅ连接构成质粒ｐＧＭＮ１；再与从乳酸菌质粒ｐＮＺ８０４８扩增出来的Ｐｎｉｓ－ＭＣＳ段基因连接，构成质粒ｐＧＭＮ２；将人工合成的乳酸菌密码子偏好型的ＵＳＰ４５－ＬＥＩＳＳ－ａＦＧＦ１４－１５４基因片段用ＮｃｏⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切后，与质粒ｐＧＭＮ２连接，构成质粒ｐＧＭＮ３；用限制性内切酶ＨｐａⅠ敲除红霉素抗性基因后，构成在乳酸菌中表达ａＦＧＦ的质粒ｐＧＭＮ４，并将该质粒电转至乳酸菌ＮＺ９７００菌株中，ＰＣＲ筛选出阳性转化子，转接ＧＭ１７培养基。厌氧培养４８ｈ后，离心收集菌体上清，ＴＣＡ沉淀浓缩上清总蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析筛选出高效表达ａＦＧＦ的菌株，ＥＬＩＳＡ试剂盒测定上清中ａＦＧＦ含量。

１．２．２重组ａＦＧＦ乳酸菌制剂对小鼠ＤＳＳ诱导的溃疡性结肠炎的预防和治疗作用

１）实验分组。实验共分７个组，各组小鼠均为１０只，分别为正常组（Ｎ）：正常采食，饮水１７ ｄ；模型组 （Ｍ）：５％ ＤＳＳ自由饮用７ ｄ造模＋无菌生理盐水灌胃17 ｄ；柳氮磺砒啶组（ＳＡＳＰ）：５％ ＤＳＳ自由饮用７ ｄ造模＋ ＳＡＳＰ （０．５ｇ／ｋｇ）灌胃１7 ｄ；ａＦＧＦ乳酸菌高剂量组（ａＦＧＦ－Ｈ）：５％ ＤＳＳ自由饮用７ ｄ造模＋乳酸菌ＮＺ９７００（ｐＧＭＮ４－ＵＳＰ４５－ＬＥＩＳＳ－ａＦＧＦ１４－１５４）高剂量菌液灌胃１７ ｄ；ａＦＧＦ乳酸菌中剂量组（ａＦＧＦ－Ｍ）：５％ ＤＳＳ自由饮用７ ｄ造模＋乳酸菌ＮＺ９７００（ｐＧＭＮ４－ＵＳＰ４５－ＬＥＩＳＳ－ａＦＧＦ１４－１５４）中剂量菌液灌胃１７ ｄ；ａＦＧＦ乳酸菌低剂量组（ａＦＧＦ－Ｌ）：５％ ＤＳＳ自由饮用７ ｄ造模＋乳酸菌ＮＺ９７００（ｐＧＭＮ４－ＵＳＰ４５－ＬＥＩＳＳ－ａＦＧＦ１４－１５４）低剂量菌液灌胃１７ ｄ；乳酸菌组（ＮＺ９７００）：５％ ＤＳＳ自由饮用７ ｄ造模＋乳酸菌 ＮＺ９７００菌液灌胃１７ ｄ。每只小鼠一次灌胃量为２００ μＬ。

２）每天观察比较小鼠的一般情况，包括体重、精神状态、毛色、活动、大便性状，参照表１计算ＤＡＩ积分。

３）样品收集。于实验第１７天，脱臼断髓处死小鼠，取出至盲肠末端的整个结肠和直肠段，观察结肠的大体改变，测量整个结肠长度。用预冷无菌生理盐水将结肠冲洗干净，分别于结肠末端（距１ ｃｍ）处剪取０．５ ｃｍ结肠段，４％多聚甲醛固定，石蜡包埋、切片，ＨＥ染色进行病理形态学检测。另各取远段、中段、近段结肠、盲肠组织约５０ ｍｇ迅速冷冻于液氮中，后转至－８０ ℃保存，用以检测髓过氧化物酶（ＭＰＯ）的活性。

２结果

２．１重组人ａＦＧＦ乳酸菌的构建及表达

２．１．１重组人ａＦＧＦ乳酸菌表达载体的构建及鉴定以来自乳酸菌表达载体ｐＮＺ８０４８的Ｐｎｉｓ启动子和多克隆位点序列（Ｐｎｉｓ－ＭＣＳ）为构建乳酸表达菌所用启动子，以植物乳杆菌半乳糖苷酶基因（ｍｅｌＡ）为筛选标记，经过一系列酶切和连接反应，构建表达ａＦＧＦ的乳酸菌表达载体ｐＧＭＮ４。对构建好的ｐＧＭＮ４进行双酶切鉴定，得到预期大小的目的片段５４５ ｂｐ（图１），同时对目的片段进行测序验证，比对结果表明ＤＮＡ序列与源序列完全匹配。

２．１．２重组人ａＦＧＦ乳酸菌的筛选及表达重组表达载体ｐＧＭＮ４电击转化乳酸菌ＮＺ９７００中，以重组质粒ｐＧＭＮ４为阳性对照，以水为阴性对照，ＰＣＲ扩增筛选阳性克隆，结果如图２所示，Ａ１～Ａ１０均为阳性克隆。将阳性克隆接种培养，１２％ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ Bｌｏｔ分析结果表明已成功筛选出高表达ａＦＧＦ的乳酸菌菌株（图３）。ＥＬＩＳＡ检测上清中ａＦＧＦ含量为５０ μｇ／ｍＬ。

２．２重组ａＦＧＦ乳酸菌制剂对小鼠ＤＳＳ诱导的溃疡性结肠炎的治疗试验结果

２．２．１体重变化小鼠每日体重变化见表２和图４。由表２和图４可见，Ｍ组、ａＦＧＦ－Ｌ组和ＮＺ９７００组小鼠体重在６～７ ｄ较正常组极显著下降（Ｐ＜０．０１）；ＳＡＳＰ组和ａＦＧＦ－Ｈ组、ａＦＧＦ－Ｍ组体重变化轻微，但与模型组比较具有统计学差异（Ｐ＜０．０１）。

２．２．２小鼠的一般情况和ＤＡＩ值经观察，模型组小鼠毛色暗淡，恶动，精神状态不佳。在饮用ＤＳＳ后３～５ ｄ出现腹泻，５～１０ ｄ出现不同程度的肉眼血便。而ＳＡＳＰ组和ａＦＧＦ－Ｈ组、ａＦＧＦ－Ｍ组小鼠毛色光亮，喜动，精神状态良好。在饮用ＤＳＳ后３～５ ｄ出现腹泻，肉眼血便次数和量明显减少，部分动物在整个试验过程中未见血便，体重变化如上（表２和图４）所示。ＤＡＩ评分在正常组为０；在试验的第１７天，对比ＤＳＳ模型组，ＳＡＳＰ阳性药物组和ａＦＧＦ－Ｈ处理组ＤＡＩ值显著下降（差异水平分别为Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５），而ＳＡＳＰ阳性药物组和ａＦＧＦ－Ｈ处理组间没有统计学差异；不同剂量ａＦＧＦ乳酸菌处理组间未见明显剂量依赖关系（表３）。

２．２．３小鼠结肠长度变化ＤＳＳ造模组（M组）小鼠结肠长度较Ｎ组显著缩短（Ｐ＜０．０１）；ＳＡＳＰ组、ａＦＧＦ－Ｈ组和ＮＺ９７００乳酸菌液处理组小鼠结肠长度相对于DSS造模组（M组）有不同程度的改善，以ＳＡＳＰ组、ａＦＧＦ－Ｈ乳酸菌液处理组的效果较为显著（Ｐ＜０．０１），两者之间没有统计学差异；ａＦＧＦ乳酸菌３个剂量处理组中，仅高剂量组显示有改善效果（图５）。

２．２．４小鼠结肠组织病理学变化大体病理改变：肉眼可见正常小鼠结肠黏膜完整，薄而光滑，有一定透明度；模型组小鼠结肠黏膜普遍水肿、糜烂、溃疡、附着伪膜，并覆盖有连结成片的脓苔。镜下组织病理改变：正常组小鼠结肠组织见腺体排列整齐，隐窝正常，杯状细胞无减少，未见黏膜糜烂、出血；模型组小鼠结肠溃疡病变部位可见部分隐窝破坏变形，淋巴组织增生，肠壁各层中血管普遍扩张充血，腺体排列紊乱，杯状细胞减少，小肠腔内可见炎性分泌渗出物，其中含纤维素、浆细胞、红细胞等；ＳＡＳＰ组和ａＦＧＦ－Ｈ乳酸菌液处理组黏膜组织结构完整，炎症细胞浸润少，有轻微的充血现象；ａＦＧＦ－Ｍ乳酸菌液处理组黏膜组织结构尚完整，炎症细胞浸润较多，小血管充血较明显；ａＦＧＦ－Ｌ乳酸菌液处理组和ＮＺ９７００处理组黏膜组织结构不完整，炎症细胞浸润多，充血明显，可见炎性分泌渗出物（图６）。

３．５小鼠结肠组织髓过氧化物酶（ＭＰＯ）的检测

测定组织ＭＰＯ活性，作为评价中性粒细胞浸润的指标，依照南京建成ＭＰＯ试剂盒操作说明处理样品，在４６０ ｎｍ处测光密度（ＯＤ）值，以获取该组织样品的ＭＰＯ活性。由图７可见，ＳＡＳＰ组和ａＦＧＦ－Ｈ乳酸菌液处理组能够显著降低ＭＰＯ活性，与模型组比较有统计学差异（差异水平分别为Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５），而ＳＡＳＰ阳性药物组和ａＦＧＦ－Ｈ处理组间没有统计学差异。

３讨论

ＵＣ是一种原因不明的肠道慢性非特异性炎症，对其治疗必须是快速而有效的。传统的治疗药物包括氨基水杨酸盐、皮质类固醇、别嘌呤硫醇、甲氨蝶呤和抗肿瘤坏死因子等，而这些药物在临床应用上都会存在不恰当用药的误区，给病人带来不同程度的副作用，因此优化治疗方案和开发安全有效的药物非常重要［５］。在ＵＣ的发病过程中，肠道微环境的破坏是重要的环节之一，而作为维持肠道内环境稳定的益生菌也因此被应用到ＵＣ的预防和治疗上。Ｈｅｒｉａｓ等［６］发现，单独应用乳酸杆菌并不能有效地阻止ＤＳＳ诱发的小鼠ＵＣ，只能部分改善临床整体状况，而益生菌的联合应用则是今后治疗的发展方向。乳酸杆菌和丁酸梭菌联用可能通过抑制结肠上皮细胞凋亡，促进结肠上皮细胞增殖，从而加速受损伤上皮层的修复，降低上皮层的通透性，达到治疗ＵＣ的有效作用［７］。

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乳酸菌也是继大肠杆菌以及酵母菌之后又一具有实用价值的表达系统，开创了口服疫苗的新前景。乳酸菌作为表达系统的优势在于安全、无内毒素，表达的外源蛋白不用经过纯化即可直接连菌体一起服用，同时可以在肠道中存活定殖，持续表达外源靶蛋白［８］。因此，本研究把乳酸菌作为表达系统，构建人ａＦＧＦ转基因乳酸菌，探讨其对ＤＳＳ诱导的ＵＣ的预防和治疗作用。ＵＣ的愈合与局部组织中成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）水平升高相关，而ＦＧＦ通过抑制细胞凋亡和促进新生血管生成发挥作用［９，１０］。口服ａＦＧＦ蛋白药物经胃肠道后存在酶解现象，半衰期短，而重组ａＦＧＦ乳酸菌可以避免胃肠道的酶解问题，并且可以在体内增殖，从而可以持续不断地表达ａＦＧＦ蛋白，促进溃疡愈合。与此相符，该试验结果表明，高剂量活菌制剂对小鼠溃疡性结肠炎具有很好的预防和治疗效果，表现为改善小鼠的一般情况和溃疡导致的结肠缩短状况，促进组织修复，保持结肠结构的完整性。此外，有研究表明［１１］，ＦＧＦ能够显著降低ＩＬ－１β的分泌，有效改善局部炎症反应。本试验中，ａＦＧＦ乳酸菌能够显著降低溃疡结肠组织中的ＭＰＯ活性，与病理形态学结果中减轻中性粒细胞浸润的效果是一致的，提示ａＦＧＦ乳酸菌治疗ＵＣ与其抗炎效应相关。重组ａＦＧＦ乳酸菌对小鼠ＵＣ具有良好的预防和治疗效果，将为ＵＣ治疗制剂的开发提供更加广阔的思路。

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