高效液相色谱法测定地稔中没食子酸的含量

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摘要 目的:测定地稔中没食子酸的含量。方法:采用高效液相色谱法,Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇-0.1%磷酸溶液(3∶97),检测波长273nm,流速为1.0ml•min-1,柱温为室温。结果:在5μg•ml-1～50μg•ml-1范围内,没食子酸浓度(C)与其峰面积(A)呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.2%,RSD=0.93%(n=6)。结论:该法快速简单,稳定可靠,专属性强。 关键词 没食子酸 高效液相色谱法 含量测定 地稔

地稔Melastoma dodecandrum Lour为野牡丹科属植物的干燥全草,具有清热化湿、祛瘀止痛,收敛止血等攻效[1]。用于痛经、崩漏、带下、产后腹痛、便血、痢疾、水肿、肺痈、咽肿、牙痛、痈肿、疔疮、痔疮等[2-3]。化学成份主要有酚类、氨基酸、鞣质及糖类成份[4]。近年来对地稔药材中没食子酸含量的测定有所报道[5-6],我们以高效液相色谱法,采用独特、简便的前处理方法及色谱条件,测定地稔中没食子酸的含量,方法简便快速,精密度高,准确度好,专属性强。

1 仪器与试药

1.1 仪器:日本岛津LC-10AT型高效液相色谱仪,SPD-10A检测器。N2000色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所);TU-1901型紫外可见分光光度计(北京普析通用);SB2200型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。

1.2 试药:没食子酸对照品(批号0831-9501,供含量测定用,购自中国药品与生物制品检定所),经高效液相色谱峰面积归一法测定其含量为99.6%。地稔药材(亳州市永刚饮片厂,批号20050607、20050701、20050718)。甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯,水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:色谱柱:Diaminsil C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(3∶97);检测波长:273nm;流速为1.0ml•min-1;柱温:室温;理论塔板数:按没食子酸峰计算应不低于3000;分离度:应不小于1.5。见图1。

2.2 对照品溶液的制备:精密称取没食子酸对照品适量,加甲醇制成含没食子酸30μg•ml-1的溶液,即得。

2.3 供试品溶液的制备:取地稔药材约10g,粉碎,过二号筛,精密称取5.0g,置250ml具塞锥形瓶中,精密加水50ml,超声处理30min,放冷,滤过,精密吸取续滤液25ml,用稀盐酸调pH值至1,再用乙酸乙酯振摇提取5次,每次20ml,合并提取液,置水浴上蒸至近干,残渣用50%甲醇溶解,并转移至10ml量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。

2.4 线性关系考察:精密称取没食子酸对照品5.0mg,置100ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml至10ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,进样20μl。以浓度C为横坐标,峰面积A为纵坐标,得回归方程为A=33846.00×C+81.21,r=0.9999。表明没食子酸在5μg•ml-1～50μg•ml-1范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验:精密吸取没食子酸对照品溶液(30μg•ml-1)20μl,重复进样测定5次,记录色谱,没食子酸峰面积的RSD值为0.28%。

2.6 稳定性试验:取同一供试品溶液20μl,分别于0、2、4、6、8、12h进样,记录色谱没食子酸峰面积的RSD值为0.32%,供试品溶液在室温下12h内稳定。

2.7 重复性试验:精密称取同一批地稔样品6份,按“供试品溶液的制备”项下所述方法,制备6份供试品溶液,分别进样20μl,记录色谱,计算,地稔中没食子酸的平均含量为0.4526mg•g-1,RSD值为0.98%。

2.8 加样回收率试验:取已知含量(0.4526mg•g-1)的地稔样品,分别精密加入一定量的没食子酸对照品溶液,按“供试品溶液的制备”项下操作,分别进样20μl,记录色谱,计算回收率。结果见表1。

2.9 样品测定:精密称取三批地稔样品各3份,按“供试品溶液的制备”项下所述方法,制备供试品溶液,分别吸取供试品溶液各20μl,进样,记录色谱,测定峰面积,计算含量。结果见表2。

3 讨论

3.1 检测波长的选择:称取没食子酸对照品约1.0mg,置100ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,用紫外可见分光光度计在200~400nm范围内扫描,对照品溶液在273nm处有最大吸收。

3.2 色谱条件的选择:曾选用文献[5]报道的流动相四氢呋喃-甲醇-0.2%磷酸(0.5∶0.5∶99)进行试验,分离度较差。经对比采用本试验色谱条件,没食子酸与其他组分色谱峰得到较好的分离。

3.3 供试品溶液制备方法的选择:采用文献[6]报道的供试品溶液制备方法,测得地含量为0.2388mg•g-1。取同一批样品,采用超声方法提取,制备供试品溶液,地稔中没食子酸的提取率提高了89%。结果表明,采用本试验提取方法,提取率较高,分离度较好,测定时杂质少。

3.4 不同超声处理时间对含量的影响:精密称取同一批地稔若干份,按“供试品溶液的制备”项下方法操作,超声处理时间分别设置为10min、20min、30min、40min,测定结果表明,样品超声处理30min即可提取完全。

4 参考文献

[1]广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准(第1册)[S].广州:广东科技出版社,2004:83.

[2]贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[S].贵阳:贵州科技出版社,2003:157.

[3]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海人民出版社,1977:804.

[4]赵守训,黄泰康,丁志遵,等.中药辞海(第一卷)[M].北京:中国医药科技出版社,1997:1955.

[5]何迅,李勇军,刘丽娜,等.RP-HPLC测定地稔药材中没食子酸的含量[J].中国中药杂志,2005,30(3):180-181.

[6]李才堂,宋友昕,李晶,等.高效液相色谱法测定地稔药材中没食子酸含量[J].江西中医学院学报,2005,17(4):37.

收稿日期 2009-11-18