淡竹叶的总黄酮提取技术分析

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[摘要]目的 用正交试验法优选淡竹叶中总黄酮的提取工艺。方法 以20 g原药材的总黄酮提取量为评价指标，选择乙醇用量（倍）、提取时间（h）、提取次数（次）为考察因素，采用正交试验法L9（34）确定醇提取淡竹叶中总黄酮的最佳工艺。结果 最佳提取工艺条件为75%乙醇18倍量提取1.0 h，共提取1次，乙醇用量为显著影响因素。结论 首次进行了淡竹叶总黄酮正交提取工艺的研究，结果比较可靠。

[关键词] 淡竹叶 总黄酮 正交试验

中图分类号：R283.5 文献标识码：：A 文章编号：

淡竹叶为禾本科多年生草本植物淡竹叶（Lophatherum gracile Brongn.）的干燥茎叶，主产于河南、安徽、江苏、浙江、福建、广东、广西等地。该药味甘、淡、寒，归心、胃、小肠经，具有清热除烦、利尿的功效，多用于热病烦渴、口舌生疮、小便赤色淋痛等症[1]。淡竹叶中含有的黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性[2]，因而有效地开发和利用淡竹叶中黄酮类化学成分具有重要意义。笔者选择总黄酮提取量[3]为评价指标，利用L9（34）正交试验，筛选醇提取淡竹叶中总黄酮的工艺条件，可为新药研究和充分利用淡竹叶药材资源提供 参考 依据。

一、仪器、试剂与材料

HH-S型水浴锅（巩义市英峪华仪器厂）；RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市英峪华仪器厂）；754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；AY220 电子 天平（岛津）；DZF-6050真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。

对照品芦丁购自 中国 药品生物制品检定所，批号为100080-200707；淡竹叶产地为浙江，加工单位为安徽丰原铜陵中药饮片有限公司，经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定，粉碎后备用。

医用酒精；甲醇AR级；蒸馏水；其余所用试剂均为分析纯。

二、方法与结果

1 标准曲线的制备

精密称取在105 ℃干燥下的芦丁对照品0.020 0 g，置100 mL

容量瓶中，加适量甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1 mL中含无水芦丁0.2 mg）。

精密吸取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置25 mL容量瓶中，各加水至6.0 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4%氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，进行全波长扫描，在510 nm处均有最大吸收。以510 nm 得的吸收度A对浓度C回归，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线， 计算 回归方程为A=3.865 7C-0.052 5 （r=0.999 4）。在8～48 μg/mL的范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。

2.2 总黄酮提取量的测定

按2.3.3项下方法制备样品。精密称定一定量的干燥品，用甲醇定容至25 mL容量瓶中，再精密吸取3 mL，置25 mL容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0 mL”起，依法测定吸光度。按照2010版《中国药典》（一部）规定的方法测定。

2.3 醇提工艺条件的选择

2.3.1 醇提浓度的选择

将浙江产淡竹叶药材粉碎，称取20 g/份，共3份，加15倍量的50%乙醇，回流提取2 h（85 ℃），3份提取液分别进行抽滤，将滤液在旋转蒸发仪上浓缩（80 ℃，0.08 Mpa），浓缩液在水浴锅上蒸至成稠膏状，再放置真空干燥箱中（80 ℃，0.08 Mpa），24 h后取出，取少量醇浸膏测定总黄酮提取量。同法测定60%、75%、95%醇提液的总黄酮提取量。结果表明，以20 g原药材中总黄酮提取量为考察指标，75%醇提液得到的总黄酮量最多，故采用75%乙醇提取的工艺。

2.3.2 提取工艺的正交试验

按照上述单因素考察结果，进行正交试验。

2.3.3 正交试验方法与结果

将淡竹叶药材粉碎后，称取20 g，用L9（34）正交表安排试验（见表3）。将回流提取液分别过滤，滤液在旋转蒸发仪上浓缩（80 ℃，0.08 Mpa），浓缩液放置在蒸发皿中于水浴锅上蒸至成稠膏状后，放置真空干燥箱中（80 ℃，0.08 Mpa），24 h后取出，于干燥器中干燥1 h后称量，再按照2.2.1项下方法测定总黄酮的提取量。

2.3.4方差分析

由上述直观分析结果可知，以总黄酮提取量为考察指标，最佳提取工艺条件为A1B2C1，即18倍量75%乙醇回流提取1次，每次1.5 h。方差分析结果显示：A因素（加醇量）对总黄酮提出有显著影响，B因素（提取时间），C因素（提取次数）对总黄酮提出无显著影响。结合生产实际，从降低生产成本出发，对提取条件作适当调整，确定醇提工艺条件为A1B3C1，即18倍量75%乙醇回流1 h，提取1次。

2.3.5验证试验

称取20 g原药材，按照A1B3C1进行验证试验。

3 讨论

通过L9（34）正交表试验，最终确定淡竹叶中总黄酮醇提取工艺的条件为：75%乙醇18倍量提取1.0 h，共提取1次，其结果经验证试验确认该条件可行，可以作为大生产的 参考 工艺条件。

参考 文献 ：

[1] 宋秋烨，陈梅，吴启南，淡竹叶中总黄酮提取工艺研究，论文网，2012，05

[2] 韩公羽，沈企华.植物药有效成分的研究与开发[M].杭州：杭州大学出版社，1991.94-102.

[3] 孙佩霞，叶丽卡，张晓丽，等.比色法测定淫羊藿胶囊中总黄酮的含量[J].沈阳药科大学学报，1999，16（1）：68-70.

[4] 国家药典委员会. 中国 药典（一部）[S].北京：化学 工业 出版社，2010.附录28.