免疫金标试纸法与正向间接血凝试验检测猪口蹄疫免疫效果探讨

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中图分类号：Ｓ８５２．５＋３ 文献标识码：B 文章编号：１００７－２７３Ｘ（２０12）09-0022-01

当前国内检测猪口蹄疫抗体水平的方法有ＥＬＩＳＡ法、猪口蹄疫正向间接血凝法和免疫金标试纸法等。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点，但需要比较完备的试验仪器和经验丰富的技术人员，且检测时间较长。而免疫金标试纸检测法是新开发的一种全新的猪口蹄疫抗体检测方法，检测一个样品只需８～１５ｍｉｎ，操作简便、快速、直观，结果容易判定，但其检测结果的准确性尚待验证。鉴于此，为了选择一种切合远安县动物疫病防控实际的检测方法，我们采用两种常用的检测方法（免疫金标试纸检测法和正向间接血凝试验法）对远安县农村散养户的２００份猪血清样品进行了口蹄疫免疫效果对比检测试验，这对于本中心能够及时准确掌握生猪口蹄疫免疫效果具有一定的指导意义。

１ 材料与方法

１．１ 材料

被检样品采自全县７个乡镇的农村散养户。２００份猪血清均为免疫口蹄疫疫苗后１８～２０ｄ所采的全血样品，免疫疫苗均为中牧实业股份有限公司兰州生物药厂提供的猪口蹄疫灭活疫苗。

猪口蹄疫正向间接血凝抗原（包括稀释液）购自深圳市康百得生物科技有限公司，试剂盒批号：２０１２０２１８；猪口蹄疫抗体免疫金标试纸条购自深圳市康百得生物科技有限公司，生产批号：２０１１０９０８；仪器：Ｖ型９６孔１１０度血凝板，台式离心机，精密移液器（５～５０μL），微量振荡器。

１．２ 方法

将２００份全血样品放入离心机离心，５ｍｉｎ后吸取上层血清液，置于试管架上备用。向金标试纸检测卡的椭圆形加样孔内加入２～３滴（５０～１００μＬ）待检猪血清，室温下静置８～１５ｍｉｎ判定结果。加样后８～１５ｍｉｎ与金标试纸附带的参照卡的色带滴度进行对照比较，当被检样品检测线（Ｔ）条带的色泽大于或等于参照卡中１∶３２效价时，说明检测样品中猪口蹄疫抗体的滴度较高，如果低于１∶３２则表示被检猪的口蹄疫抗体水平过低，应及时进行猪口蹄疫疫苗接种。正向间接血凝试验操作程序如下：加稀释液５０μＬ加被检血清５０μＬ在血凝板上倍比稀释被检血清加血凝抗原振荡摇匀３７℃下静置３０ｍｉｎ结果判定。以５０％红血球出现凝集的血清最大稀释倍数为该血清的血凝效价。血凝效价达１∶３２为免疫合格，１∶３２以下为免疫不合格。

２ 结果与分析

由表１、表２可见，免疫金标试纸检测猪口蹄疫抗体效价合格率为８２．５％，正向间接血凝试验检测其合格率为８１．０％。通过数据比较表明，免疫金标试纸检测与猪口蹄疫正向间接血凝试验的结果基本符合，试验结果可靠。

３ 讨论

（１）从上述检测结果中可以看出，远安县农村散养户中有一部分猪只免疫不合格，造成这种现象的原因可能与基层防疫员的技术水平、操作水平、疫苗用量及疫苗质量等有关；也可能是广泛存在的猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒感染而破坏了猪的免疫系统，造成免疫抑制。

（２）从操作方法上看，免疫金标试纸检测法操作简便，更重要的是检测时间短，能快速做出疾病诊断。而间接血凝试验是通过红血球凝集程度来判断结果的，操作者的判断能力不一样，就很有可能出现不同的结果，即便同一操作者每次的试验判断结果都可能有一定的偏差。

（３）从经济成本上看，免疫金标试纸检测也能体现出一定的优势，既能批量检测，也能单独进行检测，且不造成浪费。而间接血凝试验所需抗原一经开启就必须一次用完，在检测量较小的情况下就会造成很大的浪费。

４ 结论

综上所述，猪口蹄疫抗体免疫金标试纸检测法具有操作简便、结果直观、反应时间短等优势，非常符合远安县的实际工作需要，乡镇畜牧兽医服务中心及养殖场均可推广应用，对提高远安县应对重大动物疫病时的应急反应能力将起到举足轻重的作用。