母婴血清HBV-DNA定量分析及其相关意义

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[摘要]目的:通过研究乙肝孕妇血清中HBV-DNA含量、血清学指标与胎儿宫内感染的关系，找出可致胎儿宫内感染的孕妇血清HBV-DNA临界值，以指导临床。方法：对孕妇于分娩前应用ELISA法检测乙肝标志物5项指标，选择64例阳性病例再用FQ-PCR技术进行HBV-DNA定量检测。同样对64例新生儿脐血分别进行上述两项检测。结果：①HBsAg、HBeAg阳性组血清HBV-DNA含量明显高于其他模式组，有显著性差异，说明HBV-DNA含量与HBeAg的存在有明显的关系；②对孕妇血清HBV-DNA含量与脐血HBV-DNA含量进行等级相关分析，显示二者呈正相关；③当孕妇血清HBV-DNA含量≥105拷贝／ml时其宫内感染率明显高于含量≤104拷贝／ml组， HBV母婴传播率有显著性差异。结论：①HBV-DNA定量分析可准确测量孕妇体内HBV复制水平，且优于ELISA法，二者结合更有意义；②孕妇血清hbv-dna含量的高低反映HBV垂直感染的强弱，脐血中HBV-DNA含量与母血含量呈正相关；③孕妇血清HBV-DNA含量≥105拷贝/ml时其宫内感染率明显增高，可以作为HBV母婴传播的预测指标指导临床。

[关键词]肝炎病毒；乙型；定量测定；母婴传播

[中图分类号]R511

[文献标识码]A

[文章编号]1673-7210（2007）02（c）-016-02

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）的母婴传播是造成HBV感染的主要传播途径，准确监测HBV感染妇女孕期病毒复制水平对阻断HBV母婴传播是非常重要的。本研究采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测孕妇血清HBV标志物（HBV M），同时采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对孕妇血清和脐血中的乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）进行定量检测，结合二者作相关性分析，以探讨孕妇HBV感染状态、血清中HBV-DNA含量对HBV母婴传播的影响。

1 对象与方法

1.1 研究对象

对2004年7月～2006年8月在本溪市本钢总医院待分娩者，于分娩前进行HBV M 5项指标检测，对除HBsAb阳性外其他指标阳性者定为HBV M阳性，选取64例阳性病例再进行HBV-DNA检测。同样对64例新生儿脐血分别进行上述两项检测。

1.2 实验方法

1.2.1 血清免疫学标志物检测应用ELISA检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，乙肝ELISA试剂盒由中山生物制剂厂提供。

1.2.2 HBV-DNA定量检测应用FQ-PCR检测HBV-DNA含量，试剂盒由深圳市匹基生物工程股份有限公司提供，操作按说明书进行。

1.2.3 结果表达HBV-DNA定量结果以指数形式表示，测定范围为102～109拷贝／ml。

1.3 统计分析方法

全部数据用SPSS10.0统计软件处理。P＜0.05为有显著性差异。

2 结果

2.1 孕妇血清HBV-DNA定量检测结果与ELISA检测结果的比较

结果显示：HBsAg、HBeAg阳性组血清HBV-DNA定量阳性率均为100%，且HBV-DNA含量明显高于其他组，有显著性差异，说明这两种血清学标志模式组具有很强的传染性(表1)。

2.2 孕妇血清HBV-DNA含量与新生儿脐血HBV-DNA含量的关系

等级相关分析显示二：者HBV-DNA含量呈正相关，经检验具有显著性差异（P＜0.01），即随着孕妇血清HBV-DNA含量的增加，脐血HBV-DNA含量也增加（表2）。

2.3 孕妇血清HBV-DNA含量与新生儿宫内感染的关系

随着孕妇血清HBV-DNA含量的增高，宫内感染率增高。当孕妇血清HBV-DNA含量≥105拷贝／ml时，其宫内感染率明显高于含量≤104拷贝／ml组(P＜0.05)（表3）。

3 讨论

3.1 孕妇血清HBV-DNA含量与ELISA检测结果的关系

乙肝病毒感染的诊断主要依赖于血清特异性抗原抗体和HBV-DNA的检测。ELISA方法检测的是ng水平的HBV，是人体对HBV的免疫状态，而FQ-PCR方法可直接检测到fg水平的HBV，反应病毒载量和传染性的大小[1]。所以孕妇体内是否有活动性复制及其水平如何，单靠HBV M检测是无法准确判断的，必须进行HBV-DNA的定量检测。但FQ-PCR的反应体系复杂，易受多种因素影响，待测标本的溶血、处理不当都会导致其假阳性或假阴性，且FQ-PCR只能检测血中游离的HBV-DNA，当病毒整合到肝细胞染色体上，随同肝细胞一起复制、表达时，ELISA法可出现阳性反应，但血清中已没有HBV颗粒存在，此时FQ-PCR为阴性反应[2]。因此，在乙肝病毒感染的诊断上，二者有各自的优点，不可互相替代。

3.2 孕妇血清HBV-DNA水平与脐血HBV-DNA含量的关系及影响因素

卢建溪等[3]报道，孕妇血清HBV-DNA含量的高低可以反映HBV垂直感染的强弱，随着孕妇血清HBV-DNA含量的增加，脐血HBV-DNA含量也增加，两者呈正相关。同时发现HBeAg阳性组其脐血HBV-DNA的阳性率及含量均高于HBeAg阴性组。本研究结果与上述报道一致，母亲HBeAg阳性是影响脐血HBV-DNA含量的重要因素。

3.3 孕妇血清HBV-DNA含量与母婴传播的关系及其意义

本研究显示，随着孕妇血清HBV-DNA含量的变化，存在一个影响HBV母婴传播的临界值。当孕妇血清HBV-DNA含量≥105拷贝/ml时，其宫内感染率明显高于≤104拷贝/ml组，当孕妇血清HBV-DNA含量≥108拷贝/ml时，宫内感染率＞80%，而含量≤104拷贝/ml时，宫内感染率明显降低，仅为6%以下。因此可将105拷贝/ml作为HBV传播浓度临界值，用于预测HBV母婴传播概率。

综上所述，在孕妇妊娠期做血清学及HBV-DNA定量监测，对HBeAg或HBsAg阳性孕妇通过检测其HBV-DNA含量，估计其宫内传染情况，当孕妇血清HBV-DNA含量≥105拷贝/ml时，及时进行免疫防护，可极大地降低宫内感染的发生率。

[参考文献]

[1]Yu MW,Chang HC,Liaw YF,et al.Familial risk of hepatocellular carcinoma among chronic hepatitis B carriers and their relatives[J].J Natl Cancer Inst,2000,92:1159-1164.

[2]陈兆鹏,黄瞻云,张文芳,等.荧光定量PCR和ELISA测定乙肝病毒标志物2005例结果分析[J].同济大学学报,2003,24(2):138-139.

[3]卢建溪,林潮双,钱师宇,等.孕妇血清与胎儿脐血HBV-DNA定量检测及其相关性研究[J].中国妇幼保健,2002,17(4):235-236.

(收稿日期：2007-01-16)

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