清半夏炮制过程中化学物质及刺激性变化

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【摘要】目的本文探讨炮制清半夏的过程中药物的刺激性变化以及含有的氨基酸和有机酸以及白矾等化学物质的残留量变化，揭示药物的炮制规律，最终为科学炮制提供依据。方法本文通过多种方法对炮制清半夏的刺激性和部分化学成分的含量进行测定，主要用到的方法有使用鸡胚胎的尿囊膜进行染色试验，通过氨基酸的分析仪，以及电位滴定法和EDTA钠滴定法进行测定。结果通过测定，炮制时间越长，清半夏的刺激性就会逐渐的减弱，而其中的氨基酸的含量出现先升后降的现象，其他有机酸的含量开始缓慢降低，而白矾却会随着时间延长逐渐增加。结论通过实验可知炮制清半夏的过程中，含有的各种成分和刺激性都会有规律的变化，遵循变化规律可以经过试验确定最终的炮制终点，从而控制炮制质量。

【关键词】半夏；炮制；物质基础；刺激性；化学成分

半夏作为一种中药材，是半夏干燥的块茎，半夏属于天南星科。该药材主要的功效为燥湿化痰、消痞散结和降逆止呕[1]。主要的成分包括生物碱、胆碱、葡萄糖苷和胡萝卜苷、以及草酸钙和半夏蛋白，含有氨基酸和有机酸以及一些无机元素，还含有半夏的胰蛋白酶抑制物。由于野生的半夏植物具有很强的毒性，在临床应用时，需要经过炮制才能使用。泡制成清半夏，毒性会被很大程度上降低，炮制方法是用8%的白矾溶液对生半夏进行浸泡，直至品尝时微微感觉到麻舌时为终点。本文主要研究炮制清半夏的过程中一些化学成分和刺激性的变化，探讨矾制过程对这些成分的影响，同时，探索用生物评价来代替口尝法对炮制的终点进行确定，起到保护工作者，控制稳定性的最终目的。

1实验材料

实验仪器有北京普析仪器公司生产的TU-1091光度计，日立公司的50型氨基酸分析仪。实验用药材生半夏采购于四川新荷花公司，并经专家鉴定，其他材料有十日龄的鸡胚胎，台盼蓝，自制的磷酸盐水溶液，化学试剂有甲酰胺和白矾、HCL和NaOH，所有用到的试剂全部分析纯，水则是去离子水。

2实验方法

2.1供试样品的制备炮制清半夏方法：取半夏需要大小一致，在室温的条件下进行浸泡，浸泡液为8%的白矾溶液，然后在规定时间进行取样，将半夏经烘干和粉碎最后过筛，留着备用。配制生半夏和炮制品的混悬液：称取过200目筛的半夏粉一定量，然后加水进行研磨，配制成每50毫升200mg和100mg的混悬液。

2.2鸡胚尿囊膜试验配制一系列的甲酰胺溶液，含有不同浓度的台盼蓝。通过595纳米的波长光测定溶液的吸光度，根据吸光度对台盼蓝作标准的曲线。然后取十日龄的鸡胚胎，找出鸡胚的气室并沿着边缘画出范围，剥掉蛋壳，暴露出并剥去蛋壳膜，使尿囊膜暴露出来。挑选在肉眼观察下完整且没有出血点的尿囊膜进入下步试验。

首先加入PBS（即磷酸生理盐水溶液）缓冲CAM的渗透压，在其上放硅胶环并将0.3毫升的半夏混悬液滴入硅胶环内，等待作用2分钟左右，用生理盐水进行清洗CAM的表面。等待5分钟，然后使用0.4毫升的0.1%台盼蓝滴入硅胶环对CAM作用约1分钟，然后用蒸馏水漂洗干净。分离被染色CAM，用甲酰胺对台盼蓝进行提取，随后用光度计测定在595纳米的波长下吸光度，对照标准曲线可得到台盼蓝量。对照分别为不同强度的刺激物，比如前刺激性的磺酸钠、中度刺激的二甲亚砜和弱刺激的丙二醇为阳对照；空白对照则是没有经过处理的尿囊膜；PBS作为溶剂的对照。

2.3测定氨基酸含量按照我国的国家标准对氨基酸的含量进行测定，检测的温度为常温24摄氏度，采用的测定方法为酸水解中常规的水解法。

2.4测定有机酸的含量分别取5克炮制程度不同的半夏粉末，置于锥形瓶，然后加入50毫升的乙醇，进行一个小时的加热回流，重复操作提取两次，然后放冷并滤过，将滤液合并，蒸干。残渣放入氢10毫升浓度为每升0.1摩尔的氧化钠溶液等待滴定，然后对溶液进行超声波处理半个小时，然后在50毫升的量瓶中加入煮沸后冷却的蒸馏水至刻度，摇匀溶液，量取25毫升，按电位滴定法用浓度为0.1摩尔每升的盐酸进行滴定，将结果用空白试验进行校正。该测定中，每1毫升的氢氧化钠滴定液等量于5.904毫克C4H6O4（琥珀酸）。

2.5白矾残留量测定分别取5克炮制程度不同的半夏粉末，置于坩埚中，加热至碳化完全，升温到450摄氏度，使其灰化4小时，冷却后，加入约10mL稀盐酸于坩埚内，坩埚用表面皿进行覆盖，水浴加热10分钟，用5mL热水冲洗表面皿，并将洗液收集到坩埚中，然后过虑，清洗坩埚和滤渣，将滤液和洗液合并，加入1滴甲基红的乙醇溶液，浓度为0.025%，然后往溶液里滴加氨至显微黄色。添加缓冲液加20毫升的醋酸铵（pH值为6.0），用每升0.05摩尔的乙二胺四醋酸二钠进行滴定至溶液转变成红色。每1mL滴定液等量于23.72毫克的KAl（SO4）2·12H2O[含水硫酸铝钾][2]。

3实验结果

3.1鸡胚尿囊膜试验试验结果证明，浓度为每50毫升100毫克的生半夏混悬液刺激性很强，损伤细胞的强度和SDS相当。相同浓度的清半夏的刺激性仅仅略强于丙二醇这类弱的刺激物质。通过聚类分析，清半夏不同的炮制时间，对刺激性进行分类分析，一类为炮制0至16小时，结果显示刺激性较强；在经过24至40小时炮制的半夏刺激性出现了降低，降为中度的刺激性；经过48至72小时炮制的半夏刺激性开始显著降低，降为弱的刺激性。表明炮制时间越长，清半夏的刺激性就会逐渐减弱。

3.2炮制时间不同的样品氨基酸含量试验中，分别选取了不同炮制时间的半夏炮制品，有生半夏、炮制24h和32h以及48h的四种样品，按照测定17种氨基酸结果显示，生半夏含有4.16%的氨基酸，在炮制清半夏的过程中，17种氨基酸的含量出现变化，且变化规律较为一致，含量全部先升后降。

3.3不同炮制时间样品有机酸含量分别选取了不同炮制时间的半夏炮制品，测定样品有机酸含量，其中总酸用琥珀酸来计量，结果显示，随着炮制时间的延长，清半夏中总酸的含量逐渐降低。

3.4不同炮制时间样品白矾含量分别取5克炮制程度不同的半夏粉末，经过测定，结果显示，随着半夏炮制的时间逐渐增加，白矾的含量也随着逐渐升高。

4结论与讨论

对于炮制清半夏的终点，药典以口尝时舌微有麻感为宜，一方面降低了毒性，减小了刺激，另一方面还能保留药效的目的。通过实验证明，白矾浸泡48个小时后可达到药典要求[3]。但是传统的口尝评价法判定炮制的终点，有一定主观性，但是对鸡胚胎的尿囊膜进行染色试验则可以客观反应刺激性的强弱，有望将传统口尝法确定炮制终点取代，提高客观性，保证稳定性，具有很好应用的前景。

半夏的药效物质之一是氨基酸，是重要的半夏质量参考物。实验结果显示，炮制清半夏的过程中，氨基酸变化为含量先升后降。所以要控制炮制时间减少酸的成分损失。本实验中，炮制48小时的样品有机酸含量为0.35%[4]，满足药物效力要求。但是，炮制过程中的各种变化比较复杂，要多批次进行测定，才可探究出变化规律。

参考文献

[1]赵典刚，郝桂兰，王振海，范晓辉，李义清，赵世军，曹永亮，刘玉华.半夏熟法炮制品与药典法炮制品药理作用比较的实验研究[J].中国中医药科技，2001，（06）.

[2]孙慧，朱超，章弘扬，王月荣，罗国安，胡坪.大黄及其炮制品的液质联用分析及物质基础比较[J].中成药，2009，（03）.

[3]刘因华，赵远，郭世民.浅谈附子的现代药理及毒理研究进展[A].著名中医学家吴佩衡学术思想研讨暨纪念吴佩衡诞辰120周年（1888——2008）论文集[C].2009.

[4]关开，姜楠，田原.半夏常用3种炮制方法及其对毒性的影响[J].辽宁中医药大学学报，2009，（11）.