六月雪水提取物促凝血作用及机制的研究(Ⅱ)

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[摘要] 目的 研究六月雪水提取物促凝血作用及机制的影响。 方法 将清洁级SD大鼠45只，随机分为生理盐水对照组、低剂量六月雪水提取物组（1.5 g/kg）、高剂量六月雪水提取物组（3.0 g/kg）。采用凝血因子分析仪测定血浆纤维蛋白原、活化部分凝血活酶时间和凝血酶原时间国际标准比值。 结果 与生理盐水对照组比较，低、高剂量六月雪水提取物能显著升高血浆纤维蛋白原水平（P

[关键词] 六月雪水提取物；血浆纤维蛋白原；凝血酶原时间国际标准比值；活化部分凝血活酶时间

[中图分类号] R965.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）10（b）-0012-03

六月雪为民间常用草药，一直用于治疗病毒性肝炎及肝硬化，为茜草科六月雪属植物六月雪[Serissa serissoides （DC.）Druce（SSD）][1]。研究显示，六月雪含有多种丙烯苯并呋喃类化合物以及β-谷甾醇和豆甾醇[2]。有研究显示，六月雪对实验性胃黏膜损伤具有明显的保护、抑菌及提高免疫功能等作用[3-7]，复方六月雪还具有体外抗HBV作用和治疗肾脏疾病的功能[8-9]。课题组已经报道了六月雪水提取物的促凝血作用及机制[10]，现继续报道关于其促凝血作用及机制的研究。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 六月雪水提取物的制备 取干燥六月雪0.3 kg，用适量双蒸水（过液面2 cm）浸泡24 h，次日煮沸2次，30 min/次，过滤，合并滤液并浓缩至600 ml左右，冷却后加3倍量95%的乙醇，混匀后放冰箱静置过夜，次日减压过滤，滤液继续浓缩至300 ml，使药液为相当于生药1.0 g/ml。调整pH为7.0，置冰箱中备用。

1.1.2 试验动物 健康成年SD大鼠（购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司）45只，体重300～400 g，雌雄各半，随机分为3组，每组5只。

1.1.3 药品与试剂 水合氯醛（青岛高昌益网络科技有限公司德源化工，批号：20110407）；枸橼酸钠（1：9）真空采血管（江西富尔康实业集团有限公司，批号：20110903）。

1.1.4 仪器 凝血因子分析仪（美国海伦娜）、KDC-2046低速冷冻离心机、日本日立7600-020+1SE全自动生化分析仪，LG-PABER血小板聚集器凝血因子分析仪等。

1.2 方法

1.2.1 分组及给药 大鼠随机分为生理盐水对照组、低剂量六月雪水提取物组（1.5 g/kg）、高剂量六月雪水提取物组（3.0 g/kg）。高、低剂量组每天以相应量的药物灌胃，盐水对照组给予等量生理盐水灌胃，1次/d，连续5 d。

1.2.2 方法[11-12] 末次给药后1 h，从大鼠心脏取血，分离血浆，置离心管中，56℃加热10 min，然后3000 r/min离心10 min，参照LG-PABER凝血因子分析仪操作规程进行测定，记录血浆纤维蛋白原水平。

从大鼠心脏取血，置入含3.8%枸橼酸钠的离心管中，混匀后以3000 r/min的速度离心10 min，离心后用微量进样器分别取所需血浆量，参照LG-PABER凝血因子分析仪操作规程进行测定，记录活化部分凝血活酶时间。

取待测血浆0.1 ml，37℃水浴孵育3 min，加0.2 ml凝血活酶，混匀，用秒表记录凝固时间，即为PT值（s）。每个样品重复实验5次，取其平均值。然后按公式INR=（PTtest/PTnormal）ISI（其中ISI为国际敏感指数）计算凝血酶原时间国际标准比值。

1.3 统计学处理

应用SPSS 14.0统计软件包对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，以P

2 结果

2.1 六月雪水提取物对血浆纤维蛋白原水平和活化部分凝血活酶时间的影响

1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物均能显著升高大鼠血浆纤维蛋白原水平和活化部分凝血活酶时间，且有一定的剂量依赖性（表1）。

表1 六月雪水提取物对血浆纤维蛋白原水平和活化部分凝血活酶时间的影响（x±s，n=5）

与生理盐水组比较，*P

2.2 六月雪水提取物对凝血酶原时间国际标准比值的影响

1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物能显著降低凝血酶原时间国际标准比值，且有一定的剂量依赖性（图1）。

图1 六月雪水提取物对凝血酶原时间国际标准比值的影响

与生理盐水组比较，*P

3 讨论

凝血过程可由“内源途径”和“外源途径”引发，是一个多因子参与的复杂过程，同时凝血时间和凝血酶原时间可分别反映”内源途径”和”外源途径”的功能状况，纤维蛋白降解也是体内重要的抗凝血过程之一。

六月雪为茜草科六月雪属植物，是民间常用草药。课题组已对六月雪水提取物进行了促凝血作用及机制的研究，前期研究显示，六月雪水提取物能明显缩短体外凝血时间、血浆凝血酶时间，还可以减小凝血酶原时间，延长优球蛋白溶解时间[10]。本实验在前期研究的基础上继续深入研究其对血液凝固的影响，结果显示六月雪水提取物具有明显的促进血液凝固作用。

本研究结果显示，六月雪水提取物能明显升高血浆纤维蛋白原，显著降低活化部分凝血活酶时间和凝血酶原时间国际标准比值，提示六月雪水提取物既能影响内源性凝血途径，又能作用于外源性凝血途径，其作用机制可能与上述因素有关。六月雪促凝血作用的有效成分还有待进一步的研究。

致谢：感谢赣南医学院曾靖教授对论文的指导。

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（收稿日期：2014-06-11 本文编辑：祁海文）