反相高效液相色谱法测定硫酸软骨素钠的含量

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【摘 要】目的：建立一种高效液相色谱法测定硫酸软骨素钠的含量。方法：C18色谱柱，流动相为乙腈-10mmol・L-1戊烷磺酸钠溶液（10：90），检测波长为191nm，流速为0.8mL・min-1。结果：硫酸软骨素钠浓度在0.1962～0.6996mg・mL1范围内与峰面积有良好的线性关系，r=0.9994。 结论：该方法简便、快速、准确，可用于硫酸软骨素钠的含量测定。

【关键词】硫酸软骨素钠；高效液相色谱法

【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）04-0690-01

硫酸软骨素钠系自动物的喉骨、鼻中骨、气管等软骨组织中提取制得的硫酸化链状黏多糖钠盐，为中国药典2010年版二部收载品种[1]。类别为降血脂及骨关节疾病治疗药，用于神经性头痛、神经痛、关节痛、动脉粥样硬化疾病的辅助治疗[2]。硫酸软骨素钠含量测定方法很多，其中分光光度法使用盐酸氨基葡萄糖为对照品，而硫酸软骨素钠水解产生的是氨基半乳糖，该法的专属性和重现性不好；美国药典、欧洲药典和英国药典采用电位滴定法进行含量测定，该法的缺点在于：氯化十六烷基吡啶（ CPC） 低温易析出，需重新配制使用，且CPC 与其他酸性黏多糖也有类似的沉淀反应，因此专属性不好[3]。《中国药典》2010年版采用的酶解HPLC法，具有专属性强、灵敏度高和重现性好的优点，但样品处理繁琐、耗时较长、酶贮运中较易失活。本文参照文献报道的各种方法 [4-7]，建立的反相高效液相色谱法测定硫酸软骨素钠的含量，方法操作简便、快速、准确。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津AUW120D电子分析天平， UV3000高效液相色谱仪（合肥皖仪科技），T6新世纪紫外可见分光光度计（北京普析），KQ-50B超声波发生器（昆山市超声仪器）。

1.2 试药 硫酸软骨素钠对照品（中国药品生物制品检定所，批号140792-201001，含量99.1%），硫酸软骨素钠样品（四川菲德力制药有限公司，批号：120201，120601，130101），乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：C18柱（5μm，250mm×4.6mm），流动相：乙腈-10mmol/L戊烷磺酸钠溶液（1090），检测波长：191nm，流速：0.8ml/min，进样体积：10μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取硫酸软骨素钠对照品适量在105℃下干燥4小时，精密称取约25mg于50ml容量瓶中，加入5.0ml乙腈，振荡使其分散均匀，再加入纯化水，用超声波使其溶解，用水定容至刻度，摇匀，用滤膜过滤。

2.2.2 供试品溶液的制备 取供试品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加入5.0ml乙腈，振荡使其分散均匀，再加入纯化水，用超声波使其溶解，用水定容至刻度，摇匀，用滤膜过滤。

2.2.3 空白溶液的制备 取5.0ml乙腈于50ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀即得。

2.2.4 流动相的制备 10mmol/L戊烷磺酸钠溶液：称取0.87g戊烷磺酸钠用500ml水溶解，摇匀即得。流动相：按乙腈-10mmol/L戊烷磺酸钠溶液（1090）制备流动相，混合均匀，过滤，超声备用。

2.3 专属性试验 分别精密吸取空白溶液、对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录图谱。结果：空白溶液色谱图中在硫酸软骨素钠峰相应的保留时间附近无峰出现，对测定无干扰，专属性较好。

2.7 重复性试验 取同一批号供试品，精密称定6份，按“2.2.2”项下方法操作，依法进行测定。结果峰面积的RSD为0.82%，表明重复性良好。

3 讨论

3.1 波长的选择 取硫酸软骨素钠对照品适量，制成适宜浓度的水溶液，在紫外全波长范围内进行扫描，结果在191nm波长处有最大吸收，故选用191nm作为测定波长。

3. 2 离子对试剂对峰形的影响 流动相为乙腈-水（1090）时，硫酸软骨素钠在色谱图上表现为前伸峰， 峰形对称性很差。加入戊烷磺酸钠后峰形得到改善，得到一个较为对称的色谱峰。.

3.3 乙腈比例的影响 改变流动相中乙腈的比例为5 % ， 10 % ， 15% 。由于硫酸软骨素钠的分子较大， 与固定相上的极性封端基团的距离远， 作用很小，所以其保留时间基本不变，但样品中的一些有机杂质的保留时间延长。考虑到乙腈的毒性和分离效果，确定流动相组成中乙腈为10 % 。

3.4 流动相流速的影响 改变流动相的流速0.6，0.8，1.0 ml/min ，比较不同流速下硫酸软骨素钠的半峰宽及保留时间。因硫酸软骨素出峰时间较早， 故流速不宜太快，综合峰形和分离效果， 选择0.8 ml/min为最佳流速。

本实验建立了反相高效液相色谱法测定硫酸软骨素钠的含量，方法简便、快速、准确，与《中国药典》2010年版规定的方法测定的硫酸软骨素钠的含量结果基本一致，在规定误差范围内，但比药典法简便、快速，可用于硫酸软骨素钠的含量测定。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：984-985.

[2] 张天民，凌沛学.硫酸软骨素的过去、现在和将来[J].食品与药品，2010，12（1）：1-3

[3] 任丽萍，于海洲，宋玉娟，等.酶解液相色谱法测定硫酸软骨素钠含量[J].药物分析杂志，2012，32（1）：1246-1248，1258

[4] 陆钊，杨传禹，刘晶晶，等.离子对反相高效液相色谱法测定猪硫酸软骨素的含量[J].广东化工，2011，38（10）：141-142

[5] 狄平平，劳苑子，赵立平，等.HPLC法测定复方氨基葡萄糖片中盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素含量[J].中国药事，2010，24（3） ：283-286

[6] 牛增元，袁玲玲，叶曦雯，等.高效液相色谱法同时测定硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖的含量[J].药物分析杂志，2006，26（6）：802-804

[7] 朱昱宁，敖雷，傅应华.酶解高效液相色谱法测定硫酸软骨素的含量[J].中国生化药物杂志，2012，33（6）：827-829