白花蛇舌草提取液对家兔离体小肠收缩活动的影响

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摘要：目的 观察不同剂量白花蛇舌草提取液对家兔离体小肠收缩活动的影响，并分析其作用机制与量效关系。 方法 采用离体肠段实验法，给予0.15ml、0.25ml、0.35ml三种不同剂量的2g/ml的白花蛇舌草提取液，观察其对离体小肠收缩活动的影响和0.5ml浓度为 2g/ml的白花蛇舌草提取液拮抗乙酰胆碱的作用。 结果 不同剂量的白花蛇舌草提取液均能使小肠收缩张力下降，收缩曲线与基线构成的面积减小，剂量为0.35ml时作用最明显（P

关键词：白花蛇舌草；离体小肠；收缩活动；乙酰胆碱

中图分类号：R322.4+5 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2013）7-003-02

白花蛇舌草（Hedyotis diffusa）是茜草科耳草属一年生的草本植物，别名蛇舌草、鹤蛇草等，广泛分布于亚热带地区，我国云南、广东、广西、福建、浙江、江苏、安徽等地均有生长。民间常用于咽喉肿痛、蛇伤疔疮、癌肿等的治疗[1]，其化学成分有蒽醌类、黄酮类、甾醇类、生物碱等[2]。临床上常用于呼吸道感染[3]、胃肠炎[4]、肝炎[5]、肾炎[6]等炎症性疾病的治疗及抗肿瘤[7]，但对消化道平滑肌运动有何作用目前国内未见报道。为此，本次实验研究旨在观察该药对消化道平滑肌运动的影响，为进一步开发利用白花蛇舌草提供资料。

1材料与方法

1.1对象

健康家兔4只，体重1.5～2.0kg，雌雄不限。（由右江民族医学院实验动物中心提供，许可证号：syxk桂2011-0010）

1.2 药品

白花蛇舌草，在市面上购买（厂址：广西贵港市绿之源种养发展有限公司中药饮片厂）。乙酰胆碱（Ach，上海国药集团化学试剂有限公司），Tyrode’s 溶液所用试剂均为蒸馏水，临时现配。

1.2.1白花蛇舌草提取液的制备

取药材100g加水没过药面浸泡30min，沸水煎煮20min后过滤，取滤渣再加适量水煎煮20min，过滤后合并两次滤液，浓缩为50ml，即提取液生药浓度为2g/ml。

1.3 仪器

BL-420生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司），HW-400E恒温平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）。

1.4 实验方法

家兔禁食24h，自由饮水，实验前1h喂食。实验时用棒击法使家兔昏迷后剖腹，在剑突下做纵行切口，取贲门下十二指肠20cm放于台氏液中剪去肠系膜，剪成2～3cm肠段，洗去内容物，放于新鲜台氏液中通入空气备用。实验分低、中、高剂量3组（0.15ml组、0.25ml组、0.35ml组）进行，每组11段肠管。取一段肠管一端固定在玻璃通气钩上，置于盛有80ml Tyrode溶液的浴槽中，另一端固定于张力换能器上与BL-420生物机能实验系统相连。打开HW-400E恒温平滑肌槽，使浴槽内温度保持为38℃，并持续匀速通入空气（约60个/min气泡）。打开BL-420生物机能实验系统，调零，定标。输入信号为“通道1，张力”。增益调节G=100，时间常数T=DC，滤波调节F=30Hz，扫描速度S=4.00s/div。标本负荷2g，平衡30min，待基线稳定后记录正常小肠平滑肌活动曲线，然后依次滴加浓度为2g/ml不同剂量的白花蛇舌草提取液，记录给药后收缩曲线。每滴加一次药物结果记录完毕后，用38℃台氏液冲洗3次，待肠管恢复至用药前水平后进行下一次实验。计算给药前后肠肌收缩频率、张力及面积的变化值。

1.5 对抗乙酰胆碱的作用

待离体肠段平稳，同时滴加1：10000乙酰胆碱0.1ml和2g/ml的白花蛇舌草提取液0.5ml，观察每次用药前后离体小肠收缩曲线的变化。另取离体小肠段以单纯加入1：10000的乙酰胆碱0.1ml作对照。

1.6 统计学方法

数据以均数±标准差（ ±S）表示，采用Spss17.0统计软件进行统计学分析，各组内给药前、给药后数据采用配对t检验。各组给药后的数据采用单因素方差分析（One Way Anova ）进行组间比较，并以最小显著法（LSP法）进行两两比较。

2结果

2.1 白花蛇舌草提取液对小肠收缩活动的影响

与给药前比较，白花蛇舌草提取液可使十二指肠平滑肌收缩张力降低（P

图1 低剂量组白花蛇舌草提取液对十二指肠的影响

注：与给药前比较*P

花蛇舌草提取液对抗乙酰胆碱的作用

2g/ml的白花蛇舌草提取液0.5ml能拮抗乙酰胆碱增强小肠平滑肌运动的作用，表现为与单纯滴加乙酰胆碱对比收缩曲线面积的下降。如图4。

3、讨论

白花蛇舌草作为一种民间常用中草药，其主要化学成分有黄酮类、挥发油、蒽醌类、萜类化合物、生物碱、甾醇和白花蛇舌草素（香豆精类化合物）等，具有清热解毒、消炎止痛、利尿消肿、抗癌肿等功效[8]。本实验采用小肠收缩频率、收缩张力、收缩曲线与基线构成的面积作为观察指标，其中面积与张力能较敏感地反映小肠收缩活动的变化。结果显示，滴加白花蛇舌草提取液后可使离体小肠收缩面积减小，张力降低，但收缩频率无明显变化，表明不同剂量白花蛇舌草提取液对小肠收缩运动有不同程度的抑制作用，但作用时间比较短暂。而且，随着剂量的增加，抑制作用越明显，说明该药抑制小肠的活动有明显的量效关系。

消化道平滑肌有胆碱能M受体分布，乙酰胆碱与细胞膜M受体结合后，经G蛋白耦联受体-磷脂酶C途径生成三磷酸肌醇（IP3），IP3作为第二信使作用于平滑肌细胞肌质网上的IP3受体，引发肌质网内Ca2+释放和胞内游离Ca2+增高[9]，兴奋胃肠平滑肌并产生强烈的收缩活动。当同时滴加乙酰胆碱和白花蛇舌草提取液后，发现能使乙酰胆碱所致的小肠剧烈收缩活动减弱，由此可以推测水提液中的有效成分争夺占据了部分乙酰胆碱受体，使乙酰胆碱与受体结合量减少而导致其作用减弱，具有类似阿托品样作用。表明白花蛇舌草提取液对肠平滑肌的抑制作用可能与阻断M受体有关，通过阻断药物-机械耦联，使细胞内贮存Ca2+释放减少，导致肠平滑肌活动减弱。

从提取液成分分析，提取液可能含有抑制肠平滑肌活动的物质，而且不止一种。可能是该药中黄酮类物质槲皮素[10]起作用，槲皮素能够拮抗Ca2+通道，减少Ca2+进入细胞内，使胞内Ca2+浓度降低，从而抑制肠平滑肌收缩。也可能是白花蛇舌草中的挥发油起作用，与檀香挥发油[11]的作用相似，通过拮抗肠平滑肌上胆碱能受体和对离子通道的作用，使肠平滑肌的活动减弱。此外，还有可能是白花蛇舌草素（香豆精类化合物[12]）对Ca2+的拮抗而发挥抑制作用。具体是否是白花蛇舌草中的黄酮类、挥发油以及白花蛇舌草素发挥作用，还是其他成分起作用，及其对小肠平滑肌抑制作用机制等问题还有待进一步深入研究。

参考文献：

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[7]Chen XZ，Cao ZY，Chen TS et al ，Water extract of Hedyotis diffusa willd suppresses proliferation of human HepG2 cells and potentiates the anticancer efficacy of low-dose 5-fluorouracil by inhibiting the CDK2-E2F1 pathway.[J].Oncol Rep，2012Aug；28（2）：742-748.

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[12]尉阿敖.中药前胡中香豆精成分对钙离子的拮抗作用[J].国外医学・植物药分册，1982，3（2）：43.

通讯作者：赵善民（1951-），男，教授，研究方向：心血管病理生理

基金项目：右江民族医学院2013年度自治区级大学生创新训练计划立项项目 （项目编号：QJCX201324）