定风止痛片中防风的含量测定
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【摘要】目的：建立定风止痛片防风的含量测定方法。方法：采用HPLC法对防风中升麻苷、和5－0－甲基维斯阿米醇苷进行含量测定。结果：本实验建立的含量测定方法中，升麻苷在0.082～0.492ug范围内、5-0-甲基维斯阿米醇苷在0.084～0.504ug范围内，进样量与峰面积均呈良好的线性关系，回归方程分别为y=37056x+13.667（r2=0.9999，n=6）、y=31876x+53.333（r2=0.9996，n=6），平均回收率分别为99.40％（RSD为0.50％），99.64％（RSD为0.55％）。结论：本文所建立的方法可有效控制本品中防风含量。
【关键词】定风止痛片；高效液相含量测定
“定风止痛片”系由“定风止痛胶囊”经改变剂型制成的片剂。“定风止痛胶囊”收载于《部颁标准》【1】20册中，由三七、防风、天麻等8味药组成，产品具有祛风化痰，行瘀散结，消肿定痛的功效，用于风痰瘀血阻络引起的关节肿胀疼痛、筋脉拘挛、屈伸不利等。产品临床疗效确切，深受患者好评。但胶囊剂处方药材均为生药粉直接入药，且质量标准较低，标准中只有粉末的显微鉴别，和三七的薄层鉴别。
1仪器与试药
高效液相色谱仪（Shimadzu LC-10AT），检测器（Shimadzu SPD-10VAP）；电子天平（Marx200g，d=0.0001g）。
甲醇（色谱醇）、去离子水、其余试剂均为分析醇。
升麻苷、5－0－甲基维斯阿米醇苷（均由中国药品生物制品检定所提供）；定风止痛片（我公司自制）。
2高效液相含量测定
2.1色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶〔KromasilC18（250×4.6mm，5?m）〕；甲醇-水（35：65）为流动相；流速：1ml/min；检测波长为254nm。理论板数按升麻苷峰计算应不低于2000。
2.2溶液制备
2.2.1对照品溶液的制备取升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，分别加甲醇制成每1ml各含30ug的溶液，即得。
2.2.2供试品溶液的制备取本品15片，研细，称取粉末约4g，精密称定重量，置具塞三角瓶中，精密加入丙酮50ml,称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，加丙酮补足减失重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml，水浴蒸干丙酮，残渣加5ml甲醇溶解，微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。
2.3方法专属性 分别取供试品溶液、及阴性对照液各20ul，升麻苷及5-0-甲基维斯阿米醇苷对照液各10ul，注入液相色谱仪，进行检测。结果表明，防风的阴性样品对测定无干扰。 （见图1、图2、图3、图4）
2.4线性关系考察取升麻苷及5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品，分别用甲醇溶解并稀释制成浓度为8～48μg/mL的溶液，在上述色谱条件下测定，以峰面积（A）对浓度（C）线性回归，求得回归方程分别为：y=37056x+13.667（r2=0.9999，n=6）； y=31876x+53.333（r2=0.9996，n=6）。结果表明，升麻苷在0.082～0.492ug范围内， 5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.084～0.504ug范围内，进样量与峰面积均呈良好的线性关系。
2.5精密度考察取同一供试品溶液连续进样6次，分别测定峰面积，测得升麻苷平均峰面积为15216，RSD为0.37％；5-0-甲基维斯阿米醇苷的平均峰面积为13429，RSD为0.51％。
2.6溶液稳定性试验取供试品溶液，分别于0、2、4、8和24h进样测定峰面积，测得升麻苷RSD为0.42％，5-0-甲基维斯阿米醇苷RSD为0.63％，结果表明，供试品溶液在24h内性质稳定。
2.7重现性考察分别称取同一批号样品6份，平行制备6份供试液，分别进样测定峰面积，并计算含量，结果表明，该方法重现性好，升麻苷RSD为0.31%，5-0-甲基维斯阿米醇苷RSD为0.49％。
2.8加样回收率考察采用加样回收法,精密称取已测定含量的同一样品5份,分别添加一定量的升麻苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品,按“供试品溶液的制备方法”制备供试品溶液，测定峰面积,计算回收率，结果见表1、表2
表1 升麻苷回收率试验结果
表2 5-0-甲基维斯阿米醇苷回收率试验结果
3讨论
3.1 本试验过程中对含量测定样品超声提取时间进行了考察，分别考察了超声处理10 min、20 min、30min，结果显示，超声处理10分钟，即已将升麻苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷提取完全，故确定超声处理时间为10min。
3.2 含量测定过程中，流动相配比考察了甲醇-水（40：60）、（35：65）和（30：70），结果表明，甲醇-水（35：65）为最佳配比，所得峰型好，分离度高。
参考文献
［1］《部颁标准》（中药成方制剂）20册第167页
注：“本文中所涉及到的图表、公式、注解等请以PDF格式阅读”