黑逍遥散对东莨菪碱致痴呆小鼠模型的影响
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摘要：目的 观察黑逍遥散对东莨菪碱致痴呆小鼠模型的影响，探讨其防治痴呆的作用机制。方法 昆明种小鼠50只，随机分为空白组、模型组、黑逍遥散组、逍遥散组、精简方组，每组10只。采用氢溴酸东莨菪碱腹腔注射诱发小鼠记忆障碍建立模型，各药物组每日给予相应的原药材水煎液2.314 g/kg，空白组和模型组给予等量生理盐水，每日灌胃1次，连续灌胃10 d。给药后第6、8日采用水迷宫法、跳台法及避暗法进行行为学能力训练，给药后第10日进行行为学能力测试，完毕后处死动物，采集脑组织并测定脑组织中乙酰胆碱酯酶（AchE）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）的活性。结果 与模型组比较，黑逍遥散组、逍遥散组及精简方组均能减少水迷宫测试中错误次数，缩短潜伏时间；减少在跳台、避暗测试中的电击次数，延长潜伏期时间；均能升高脑组织匀浆ChAT活性，降低AchE活性（P
关键词：黑逍遥散；老年性痴呆；动物行为；氢溴酸东莨菪碱；乙酰胆碱酯酶；胆碱乙酰转移酶；小鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）10-0035-03
阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease，AD）是一种常见的以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的神经系统退行性病变。目前的治疗主要是根据其不同病理生理学说给予对应性干预，尚未找到有效的防治药物。从中医药中寻找有效防治药物，成为近年研究的热点。本研究选用黑逍遥散组、逍遥散组及其精简方组开展相关研究，探讨黑逍遥散防治AD的作用机理，为本病的辨证论治提供新的思路与有效治疗药物。
1 实验材料
1.1 动物
SPF级KM小鼠50只，雌雄各半，体质量（20±2）g，甘肃中医学院科研实验动物中心提供，动物质量合格证编号：SCXK（甘）2004-0006-0000994，实验设施使用许可证编号：SYXK（甘）2004-0006-0000308。动物分笼饲养，食固体饲料（甘肃中医学院科研实验动物中心提供），食水自由，室温20～25 ℃，相对湿度45%～52%。
1.2 药物与试剂
实验所用药材均购于甘肃中医学院附属医院药房；黑逍遥散、逍遥散、精简方中各药用量参照2005年版《中华人民共和国药典》及全国高等中医院校规划《方剂学》确立的比例。黑逍遥散：熟地黄∶柴胡∶当归∶白芍∶白术∶茯苓∶生姜∶炙甘草∶薄荷=7.5∶5∶5∶5∶5∶5∶5∶4∶1。逍遥散为黑逍遥散去熟地黄，精简方则进一步减去白芍、薄荷、生姜、炙甘草。各组药物加水冷浸3 h，16倍量水微沸1 h，煎煮2次后合并滤液，制成浓度均为0.50 g原药材/mL的水提液。
氢溴酸东莨菪碱注射液，上海禾丰制药有限公司生产，批号100101。考马斯亮蓝蛋白（批号20100520）、乙酰胆碱酯酶（AchE）试剂盒（批号20100522）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）试剂盒（批号20100522）均由南京建成生物化学试剂有限公司生产。
1.3 仪器与设备
Y型水迷宫（自制），甘肃中医学院科研实验中心提供；小鼠避暗自动测试仪（型号BA-200），购于成都泰盟科技有限公司；小鼠跳台仪（型号DT-200），购于成都泰盟科技有限公司；E200NIKON光镜，由甘肃中医学院科研实验中心提供。
2 实验方法
2.1 实验动物筛选
在正式实验前，用Y型水迷宫对小鼠进行游泳测试，以剔除先天运动功能障碍小鼠。
2.2 分组与给药
KM种小鼠随机分为分为空白组、模型组、黑逍遥散组、逍遥散组、精简方组，每组10只。空白组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水0.02 mL/g，药物组给予相应的原药材水煎液。按照人临床给药剂量折算动物给药剂量倍数，各组剂量均为2.314 g/（kg・d），每日灌胃1次，连续10 d。
2.3 水迷宫、跳台、避暗测试
灌胃给药第6、8日，除空白组外，其余各组小鼠均在灌胃1 h后腹腔注射氢溴酸东莨菪碱（2.0 mg/kg）进行造模[1]，注射20 min后使用水迷宫进行学习能力跳台、避暗训练，第10日同法造模后进行行为学能力测试。
2.4 生物化学检测
灌胃给药第10日，行为学能力测试完毕后，处死动物，迅速取出脑组织，用生理盐水制成10%匀浆，放入低温离心机中，3000 r/min离心10 min，取上清液装入试管中冷冻备用，按照试剂盒说明书进行AchE和ChAT的测定。
3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。数据以―x±s表示，组间均数比较采用方差分析。P
4 结果
4.1 Y型水迷宫测试结果
与空白组比较，模型组小鼠的错误次数显著升高，记忆潜伏时间显著延长，差异有统计学意义（P
4.2 跳台测试结果
与空白组比较，模型组小鼠受到电击的次数增多，记忆潜伏时间显著缩短，差异有统计学意义（P
4.3 避暗测试结果
与空白组比较，模型组小鼠受到电击的次数增多，记忆潜伏时间显著缩短，差异有统计学意义（P
4.4 黑逍遥散对痴呆小鼠脑组织匀浆中乙酰胆碱酯酶胆碱、乙酰转移酶活性的影响
与空白组比较，模型组小鼠脑组织匀浆中的ChAT活性显著降低，AchE活性显著增高，差异有统计学意义（P
5 讨论
中医学认为，老年痴呆的发生病位在脑，与心、肾最为密切，属本虚标实，治疗多从益气补血、滋补心肾、活血祛瘀、化痰解毒等立法。而我们通过中医文献回顾分析，结合现代医学研究成果，认为肝郁是导致瘀血、痰浊等标实的主因，提出了从肝、脾论治的新假说。因肝主疏泄条达，气能行血，气能行水，肝郁则气滞，气滞则血瘀，水停而成痰浊。根据这一假说，我们首先选取疏肝健脾的代表方黑逍遥散进行了研究，表明该方具有显著改善AD模型小鼠学习记忆能力，增强其认知、判断能力，调节脑内相关神经递质[2]。说明黑逍遥散能通过疏肝理气、养血活血、健脾除湿而发挥补其虚（补血填精以益髓）、祛其邪（行气、化痰、活血）的作用。
黑逍遥散是在逍遥散的基础上加地黄一味，为逍遥散演化类方，养血填精之力更强。现代药理研究表明，熟地黄通过激活MAP等发挥出抗氧化作用；可以提高超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶活性，减少丙二醛和过氧化脂质含量，能改善衰老大鼠学习记忆能力，延缓大鼠脑衰老[3-4]。因此，我们选用黑逍遥散与逍遥散开展对照研究，以进一步验证药效，印证从肝、脾论治AD的科学性和有效性。
本研究结果表明：黑逍遥散组、逍遥散组及精简方组均能减少水迷宫测试中错误次数，缩短潜伏时间；减少在跳台、避暗测试中电击次数，延长潜伏期时间；均能升高脑组织匀浆ChAT活性、降低AchE活性，与模型组比较，差异有统计学意义（P
参考文献：
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[2] 吴红彦，王虎平.以肝、脾论治AD及逍遥散对老年痴呆模型小鼠学习记忆能力、中枢胆碱能神经元活性的影响[J].中国实验方剂学杂志， 2010，16（5）：168-170.
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（收稿日期：2013-01-22，编辑：华强）