颠茄片中非法添加阿托品的快速检查方法
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[摘要] 目的：建立能快速检查颠茄片中非法添加阿托品的经济、实用方法，提高颠茄片的质量控制标准。方法：以浓氨溶液-水-丙酮（3∶7∶90）为展开剂，以稀碘化铋钾试液、亚硝酸钠试液为显色剂，运用薄层色谱法对颠茄片进行定性分析。结果：对20余批不同生产企业颠茄片的鉴别检查中，有11批次样品检出非法添加阿托品，鉴别特征明显。结论：该方法专属性强、操作简便，可为颠茄片的质量控制提供依据。
[关键词] 颠茄片；硫酸天仙子胺；硫酸阿托品；薄层色谱
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A[文章编号]1673-7210（2011）08（a）-067-02
A quick check of adulterated atropine in belladonna extract tablets
HUANG Wei1, ZHANG Wenting2, ZHAO Weiliang2
1.Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou 310053, China; 2.Food and Drug Inspection Office in Zhejiang Province, Hangzhou 310004, China
[Abstract] Objective: To establish a quickly specific method for identifcating adulterated atropine in belladonna extract tablets, for improving its quality control standards. Methods: Belladonna extract tablets were identified by TLC method, with strong ammonia-solution water-acetone (3:7:90) as mobile phase and with rare iodinated bismuth potassium and sodium nitrite test solution as the chromogenic. Results: More than twenty different samples of belladonna extract tablets were analyzed and Atropine was detected in eleven samples of Belladonna extract tablets. The identification of TLC was characteristic and specific. Conclusion: The developed methods are proved to be sensitive, reliable and useful which can be successfully applied to the quality evaluation of belladonna extract tablets.
[Key words] Belladonna extract tablets; Hyoscyamine sulfate; Atropine sulfate; TLC
颠茄片是传统抗胆碱制剂，主要含天仙子胺（hyoscyamine）、东莨菪碱（scopolamine）等莨菪类生物碱成分，可用于平滑肌痉挛引起的疼痛、胃溃疡等病症[1]。天仙子胺又称莨菪碱，左旋，其散瞳作用比d-天仙子胺大100倍[2]，且颠茄片药效为其中多种莨菪烷类生物碱协同作用的结果。《中国药典》2010年版颠茄片质量标准中TLC鉴别的指标成分为阿托品（atropine）。虽然阿托品与天仙子胺在TLC中的比移值与在HPLC中的保留时间均相同，但阿托品为天仙子胺的外消旋体，一般为化学合成品，或是在富含莨菪碱植物中提取、消旋所得，因此颠茄片以阿托品作为TLC鉴别的指标成分不甚合理。目前国内对颠茄片的最新研究报道仅限于用RP-HPLC对硫酸阿托品等成分进行定量测定[3-5]，未曾报道颠茄片中非法添加阿托品的检查方法，国外文献有报道称，可用以手性为基础的高效液相色谱法[6]、核磁共振等[7]加以鉴别，但检测成本高，再加上阿托品成本低廉，使得在颠茄片中非法添加阿托品的现象较为严重。因此，建立能快速区分阿托品与天仙子胺的经济的分析方法就显得十分重要。基于此，本文建立了特异性的阿托品与天仙子胺的鉴别方法，从而为评价颠茄片质量控制提供技术依据。
1 仪器与试药
硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂生产），双槽展开缸，薄层色谱仪（瑞士卡玛公司ATS4型全自动点样仪），水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
对照品硫酸阿托品（批号：100040-200510）购自中国药品生物制品检定所，硫酸天仙子胺（USP对照品，批号：1335009），颠茄片为烟台鲁银药业有限公司、西安利君制药有限公司、天津力生制药股份有限公司等十家企业提供的20余批样品。
2 方法与结果
2.1 样品溶液的制备
取颠茄片20片，研细，加浓氨试液1 ml和乙醚30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇0.5 ml使之溶解，作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的配制
取硫酸天仙子胺对照品、硫酸阿托品对照品，分别加甲醇制成每1 ml各含3 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 色谱条件
硅胶G薄层板；展开剂：浓氨溶液-水-丙酮（3∶7∶90）；显色剂：稀碘化铋钾试液；亚硝酸钠试液。
2.4 测定方法
吸取上述两种溶液各20 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以浓氨溶液-水-丙酮（3∶7∶90）为展开剂展开，展距8 cm，取出，晾干，置100~105℃干燥5 min，放冷。第1次显色：喷以稀碘化铋钾试液至斑点清晰；第2次显色：在薄层板上喷以亚硝酸钠试液，放置15 min显色。
2.5 样品测定结果及判定
采用上述薄层检查方法，以硫酸阿托品为阳性对照，第一次显色后，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1。第2次显色后，供试品色谱中，在与天仙子胺对照品色谱相应位置上斑点颜色由橙色或棕色变为红棕色，不得出现灰蓝色。如出现灰蓝色，提示该样品可能添加了阿托品，见图2。结果在对10家企业28批颠茄片的检查中，共出现11份阳性样品，判定其为非法添加阿托品。
T：30℃，RH：55%
1~10为样品，其中4、5、6、10号检测到阿托品，S为对照品（S1：硫酸天仙子胺，S2：硫酸阿托品：）
图1 稀碘化铋钾显色（第一次显色）
T：30℃，RH：55%
1~10为样品，其中4、5、6、10号检测到阿托品，S为对照品（S1：硫酸天仙子胺，S2：硫酸阿托品：）
图2 颠茄片的薄层色谱图
3 讨论
3.1 展开剂的选择
分别考察了不同的展开系统：乙酸乙酯-甲醇-浓氨、浓氨溶液-水-丙酮、乙酸乙酯-氯仿-甲醇-氨水，并在此基础上进行了优化，结果表明以浓氨溶液-水-丙酮（3∶7∶90）作为展开剂得到的色谱分离度及斑点相对位置重现性好。
3.2 薄层板的选择
比较了国产普通硅胶G板（青岛海洋化工厂）、国产高效硅胶G板（烟台市化学工业研究所）、进口普通硅胶G板、进口高效硅胶G板（德国默克公司），结果均可以对颠茄流浸膏中非法添加阿托品进行定性鉴别。在保证重复性的前提下，以选择价格易于接受为原则，推荐使用国产普通硅胶G板。
3.3 加样回收实验
取一批按上述方法试验后呈阴性反应的颠茄片，加入阿托品对照品，再按上述实验方案，结果斑点的位置和颜色与阿托品对照品所显斑点一致。
3.4 检出限的测定
取上述阿托品和天仙子胺对照品溶液，分别混合制备成含阿托品10%、20%、30%……90%、100%的溶液，照上述方法取20 μl点于硅胶G薄层板上，展开后，按上述条件显色。结果显示含10%阿托品溶液可观察到灰蓝色。说明在颠茄片生产过程中添加10%阿托品即可被检出。
4 小结
本文研究内容为2010年版《中国药典》颠茄系列标准提高课题，是国内首次运用薄层色谱法鉴别添加阿托品的颠茄片，结果显示28批样品中11批样品添加阿托品。对薄层色谱结果，采用指纹图谱法进一步作了验证，检测结果完全吻合，检出符合率100%，未出现误判情况。可见本方法解决了此前难以快速检查颠茄片中非法添加阿托品的实际问题，且操作简便，对于颠茄片的质量控制，具有很高的实用价值。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:中国医药科技出版社,2010:396.
[2]匡学海.中药化学[M].北京:中国中医药出版社,2003:322.
[3]吴少平,柳小秦,罗晶,等.颠茄浸膏片质量标准研究[J].药物分析杂志,2008,28(8):1319-1322.
[4]张楠,郭新红,张振中.RP-HPLC测定颠茄片中3种主要成分含量[J].医药论坛杂志,2005,26(19):19-22.
[5]韩忠刚,冯华,罗秀琼.HPLC色谱法测定颠茄浸膏片中硫酸阿托品的含量[J].中医药导报,2008,14(9):78-83.
[6]Soares R, Singh AK, Kedor-Hackmann ER, et al. Determination of atropine enantiomers in ophthalmic solutions by liquid chromatography using a Chiral AGP column [J]. J AOAC Int,2009,92(6):1663-1672.
[7]Don Antoine Lanfranchi, Félix Tomi, Joseph Casanova. Enantiomeric differentiation of Atropine/Hyoscyamine by 13C-NMR Spectroscopy and its application to Datura stramonium Extract[J]. Phytochem Anal,2010,21(6):597-601.
（收稿日期：2011-03-28）
[通讯作者] 张文婷，主任中药师，硕士生导师；研究方向：中药质量评价与新药研究。