锁阳固精丸中非法添加物枸橼酸西地那非的检出方法
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[摘要] 目的：建立一种测定中成药锁阳固精丸中掺入化学药枸橼酸西地那非的检测方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），0.05 mol/L磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈(58∶25∶17)为流动相；检测波长为290 nm，流速为1.0 ml/min。结果：测得枸橼酸西地那非在18.5~166.5 μg/ml浓度范围内线性关系良好，平均回收率为99.38%，RSD= 0.62%。结论：本法操作简便，结果可靠，可用于锁阳固精丸中非法添加物枸橼酸西地那非的检测。
[关键词] 锁阳固精丸；枸橼酸西地那非；高效液相色谱
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）04（b）-050-02
Determination method of sildenafil citrate added illegally in Suoyang Gujing Pills
TONG Shao-hui1,LI Na2
(1.Dandong Institute for Drug Control, Dandong 118002, China; 2. Dandong Traditional Chinese Medicine Hospital, Dandong 118000, China)
[Abstract] Objective: To set up a practical method for determination of sildenafil citrate in Suoyang Gujing Pills.Methods: The C18 column(250 mm×4.6 mm,5 μm) was used, mobile phase was 0.05 mol/L potassium triethylamine-methanol-acetonitrile(58∶25∶17), the detective wavelength was set at 290 nm,and the flow rate was 1.0 ml/min.Results: The liner range of sildenafil citrate was 18.5~166.5 μg/ml.The average recovery was 99.38% with RSD of 0.62%.Conclusion: The method is simple, accurate.It can be used to determine sildenafil citrate in Suoyang Gujing Pills.
[Key word] Suoyang Gujing Pills; Sildenafil citrate; HPLC
锁阳固精丸是由锁阳、肉苁蓉、巴戟天等24味中药组成的壮阳类中药，具有温肾固精的功效。临床用于肾虚滑精，腰膝酸软，眩晕耳鸣，四肢无力等症。在日常的监督检查中，我们加大了对壮阳类中药中非法添加处方外化学药成分的考察，经过对市售锁阳固精丸的检验，结果发现样品中检出了枸橼酸西地那非。
1 仪器与试药
LC-10ATVP高效液相色谱仪；附SPD-M10AVP二极管阵列检测器；CLASS-VP（日本岛津）；枸橼酸西地那非对照品（由大连市药品检验所提供，批号：83683455，含量99.7%）；锁阳固精丸（某企业生产，批号：20030112，包装：6 g×2瓶/盒）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
为了提高检测的灵敏度和鉴别的准确性，本实验采用高效液相法二极管阵列检测器，同时测定色谱和光谱图进行在线检测。色谱柱：科瑞 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.05 mol/L磷酸三乙胺溶液[取7 ml三乙胺用水稀释至1 000 ml，用磷酸调节pH值至（3.00±0.05）]-甲醇-乙腈(58∶25∶17)；检测波长：290 nm；流速：1.0 ml/min。理论塔板数按枸橼酸西地那非峰计算应不低于为4 000。
2.2 对照品溶液的配制
精密称取枸橼酸西地那非对照品20 mg，置25 ml量瓶中，加混合溶液[甲醇-水-氨水(75∶25∶1)]溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取5 ml置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.3 阴性对照液的制备
按该药处方及制备方法[1]制备成阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法同法制成阴性对照溶液。按上述色谱条件试验，未检出枸橼酸西地那非。
2.4 线性关系考察
精密称取枸橼酸西地那非对照品约40 mg，置100 ml量瓶中，加上述混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 ml分别置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。照上述色谱条件各进样10 μl，记录色谱图。以峰面积A为纵坐标，以枸橼酸西地那非浓度C(μg/ml)为横坐标，得回归方程为：A=19 331C-46 369(n=5)，r=0.999 6。结果表明，枸橼酸西地那非在浓度18.5~166.5 μg/ml范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样6次，峰面积积分值的RSD为0.51%。
2.6 稳定性试验
取供试品溶液1份，于室温放置，分别在0，2，4，6，8 h后进样，记录峰面积。实验结果表明，供试品溶液在上述时间内基本稳定。
2.7 回收率试验
分别精密称取已知含量的样品0.2 g共9份，置100 ml量瓶中，每3份分别加入线性关系试验项下的对照品贮备液2，4，6 ml，按样品测定项测定含量，计算回收率，结果见表1。
2.8 样品中枸橼酸西地那非的测定
取本品30丸，研细，混匀。精密称取1.5 g，置100 ml量瓶中，加上述混合溶液适量，超声处理5 min，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μl，按上述色谱条件测定枸橼酸西地那非的含量，结果为257.3 mg/瓶（n=3），RSD为0.52%。
3 讨论
经以上实验初步断定，该批锁阳固精丸中非法添加了处方外化学药品枸橼酸西地那非。在中成药中非法添加化学药具有很大的隐蔽性，是一种高科技造假。药监部门应对这种造假行为给予严厉的打击，以保证人民群众的用药安全。
采用高效液相色谱法二极管阵列检测可同时将样品的色谱图与光谱图一次在线完成，大大提高了检测的准确度。
[参考文献]
[1]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2000.604.
（收稿日期：2008-01-14）
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