塞拉菌素制剂的豚鼠最大化试验和Buehler试验

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摘要：为检验塞拉菌素制剂对皮肤的过敏性，以化学药物指导原则为指导，进行了豚鼠最大化试验（ＧＰＭＴ）和Ｂｕｅｈｌｅｒ豚鼠封闭斑贴试验（ＢＴ）。用２，４－二硝基氯苯溶液作为阳性对照物，在ＧＰＭＴ试验和ＢＴ试验的阳性对照组的致敏率分别为８０％和７０％，对豚鼠的致敏率较高，２个试验受试物组的致敏率均为０，表明塞拉菌素对豚鼠没有致敏性。

关键词：塞拉菌素；豚鼠；斑贴试验；最大化试验

中图分类号：Ｒ９７８．１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）08－1650-03

Ｇｕｉｎｅａ Ｐｉｇ Ｍａｘｉｍｉｎａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ ａｎｄ Ｂｕｅｈｌｅｒ Ｔｅｓｔ ｆｏｒ Ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ

ＷＡＮＧ Ｆａｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｊｉ－ｙｕ，ＺＨＯＵ Ｘｕ－ｚｈｅｎｇ，ＬＩ Ｊｉｎ－ｓｈａｎ，ＬＩ Ｊｉａｎ－ｙｏｎｇ，ＬＩ Ｂｉｎｇ，ＮＩＵ Ｊｉａｎ－ｒｏｎｇ，

ＷＥＩ Ｘｉａｏ－ｊｕａｎ，ＹＡＮＧ Ｙａ－ｊｕｎ

（Ｌａｎｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００５０， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ｍａｘｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ （ＧＰＭＴ） ａｎｄ Ｂｕｅｈｌｅｒ ｔｅｓｔ （ＢＴ） ｆｏｒ ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｇｕｉｄａｎｃｅ ｏｆ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｈｉｃｈ ｕｓｅｄ ２，４－ｄｉｎｉｔｒｏｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎ ＧＰＭＴ ｔｅｓｔ ａｎｄ ＢＴ ｔｅｓｔ ｗａｓ ８０％ ａｎｄ ７０％， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ； while ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐ ｉｎ ｂｏｔｈ ｔｅｓｔｓ ｗｅｒｅ ｚｅｒｏ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ ｔｏ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ； gｕｉｎｅａ ｐｉｇ； Bｕｅｈｌｅｒ ｔｅｓｔ； maximination text

塞拉菌素是由基因重组的阿维链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）新菌株发酵而成的阿维菌素类抗生素，是一种兼具抗体内、体外寄生虫双重作用的新型广谱抗寄生虫药［１］，对蜱、螨、蚤、虱、恶丝虫、部分线虫有驱杀效果［２－７］。该药目前主要被开发为犬猫专用的透皮制剂，为研究该制剂的皮肤过敏性，试验进行了豚鼠最大化试验和封闭斑贴试验。

１材料和方法

１．１供试药品

塞拉菌素制剂，规格45mg∶0.75mL，购至浙江海正药业股份有限公司；０．１％和１％的２，４－二硝基氯苯溶液（上海中秦化学试剂有限公司）。

１．２试验动物

成年白色豚鼠，未孕雌性，体重２５０～３００ ｇ。每次给药前２４ ｈ给豚鼠肩背部脱毛，面积为３ ｃｍ×３ ｃｍ。试验完后称量动物体重。

１．３试验方法

１）预试验。皮内注射试验：随机选取试验动物１６只分为４组，每组４只，于每只豚鼠肩背部去毛区分４点一次性皮下给予不同剂量的塞拉菌素溶液，给药点间距１．５ ｃｍ，给药后２４ ｈ和４８ ｈ观察注射点红斑、水肿和溃烂情况。各试验组注射剂量分别为０．２ ｍＬ、０．１ ｍＬ、０．０５ ｍＬ、０．０１ ｍＬ。选取注射点皮肤不产生溃烂的剂量为皮内注射剂量。

豚鼠封闭斑贴试验：随机选取试验动物１６只分成４组，每组4只，于每只豚鼠肩背部去毛区一次性斑贴不同剂量的塞拉菌素溶液，封闭贴敷２４ ｈ，进行激发接触。在去除受试物后的１２ ｈ内观察动物去毛区皮肤红斑水肿情况。各试验组剂量分别为０．５ ｍＬ、０．２５ ｍＬ、０．１ ｍＬ、０．０５ ｍＬ。选取可产生轻度刺激性的剂量作为第一次斑贴剂量，选取不产生刺激性的最大剂量作为第二次斑贴剂量。斑贴试验操作：用医用凡士林涂皮，将药物吸附在１ｃｍ×１ｃｍ的滤纸上贴敷于皮肤表面，用塑料薄膜（保鲜膜）覆盖，最后用胶布将斑贴缠绕固定，松紧程度以不影响豚鼠活动又能固定斑贴为宜。

２）正式试验。豚鼠最大化试验（ＧＰＭＴ）：随机选取４０只豚鼠，试验组２０只，阳性对照组和阴性对照组各１０只。第0天，豚鼠皮内注射给药进行诱导。第七天后皮肤斑贴给予药物再次进行诱导，第２１天皮肤斑贴给予激发剂量２４ ｈ，在去除激发剂量２４ ｈ、４８ ｈ和７２ ｈ后观察皮肤红斑、水肿和其他异常反应，按表１对红斑和水肿进行评分，按表２进行过敏反应强度评价。若结果难以判定，7 d后再次激发。阳性对照组用７０％乙醇配成溶液，皮内注射的药物浓度为０．１％，剂量为０．１0 ｍＬ，第一次斑贴诱导浓度和第二次斑贴致敏浓度分别是１.0％和０．１％，剂量均为０．２ ｍＬ（见表3）。

Ｂｕｅｈｌｅｒ豚鼠封闭斑贴试验（ＢＴ）：随机选取４０只豚鼠，试验组２０只，阳性对照组和阴性对照组各１０只。第０、７和１４天用封闭片局部给药以诱导，第２８天在未给药的肋腹部贴６ ｈ以局部激发。去除封闭片２４ ｈ、４８ ｈ和７２ ｈ后观察皮肤红斑、水肿和其他异常反应，按表１对红斑和水肿进行评分，按表２进行过敏反应强度评价。若结果难以判定，7天后再次激发。阳性对照组用７０％乙醇配成溶液，诱导浓度和致敏浓度分别是１.0％和０．１％，剂量均为０．２ｍＬ（见表4）。

结果评价标准：

反应平均值＝

根据表２判断过敏反应发生程度。

２试验结果

２．１预试验

皮内注射试验测得第一次诱导剂量为０．０５ ｍＬ。

斑贴诱导剂量和斑贴激发剂量分别是０．２５ ｍＬ、０．０５ ｍＬ。

２．２正式试验

试验结果见表5，ＧＰＭＴ试验中阳性对照组有８只豚鼠发生不同程度的红斑、水肿，致敏率为８０％，故对豚鼠有高度的致敏性，在去除激发剂量后的４８ ｈ和７２ ｈ红斑和水肿症状变轻。阴性对照组和试验组均无红斑和水肿出现，表明塞拉菌素的致敏率为０。

试验结果见表6，ＢＴ试验中阳性对照组有７只豚鼠发生不同程度的红斑、水肿，致敏率为７０％，对豚鼠的致敏性较高，在去除激发剂量后的４８ ｈ和７２ ｈ红斑和水肿症状变轻。阴性对照组和试验组均无红斑和水肿出现，表明塞拉菌素的致敏率为０。

３讨论

豚鼠血清内含有丰富的补体，当豚鼠再次接触致敏原时比其他动物更容易产生过敏反应，因此本试验选用豚鼠作为试验对象。

饲养环境会对豚鼠的生理代谢、免疫产生影响，甚至会对豚鼠产生应激，故试验过程中严格控制饲养环境，室温２５℃左右、湿度６０％左右，注意通风换气，定期添加垫料，每天更换新鲜的饮水。由于豚鼠需要更多的纤维素食物和维生素，故每天额外定量饲喂白菜１００ ｇ／只、胡萝卜５０ｇ／只，以保证豚鼠正常生长需求。

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试验结束后称量动物体重均在４００～５００ ｇ，故该药物以及该试验不影响动物生长。

本试验以《化学药物刺激性、过敏性和溶血性 研究技术指导原则》为指导［８］，经预试验得出塞拉菌素制剂的致敏剂量和激发剂量，两个剂量均大于临床使用剂量６ ｍｇ／ｋｇ。此外，指导原则中对动物的保定未作详细描述，在不影响动物正常活动的前提下，对给药斑贴部位进行固定。GPMT和BT试验过程中所有豚鼠精神状态良好，饮食较好，活动正常，未出现不良反应，故受试物塞拉菌素制剂在注射量６ ｍｇ／ｋｇ条件下，对豚鼠没有过敏性，为其在临床上的安全使用奠定了理论基础。

参考文献：

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［２］ ＪＥＲＮＩＧＡＮ Ａ Ｄ， ＭＣＴＩＥＲ Ｔ Ｌ， ＣＨＩＥＦＦＯ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ ａｇａｉｎｓｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｉｃｋ （Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ ａｎｄ Ｄｅｒｍａｃｅｎｔｏｒ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ） ｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｄｏｇｓ ［Ｊ］． Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ， ２０００， ９１（３－４）： １３２－１３８．

［３］ ＫＵＲＴＤＥＤＥ． Ａ， ＫＡＲＡＥＲ． Ｚ， ＡＣＡＲ． Ａ． Ｕｓｅ ｏｆ ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｓｏｒｏｐｔｉｃ ａｎｄ ｓａｒｃｏｐｔｉｃ ｍｉｔｅ ｉｎｆｅｓｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ［Ｊ］． Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ， ２００７，１８：１８－２２．

［４］ ＳＨＡＮＫＳ Ｄ Ｊ， ＧＡＵＴＩＥＲ Ｒ， ＣＴＩＥＲ Ｉ Ｌ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ ａｇａｉｎｓｔ ｂｉｔｉｎｇ ｌｉｃｅ ｏｎ ｄｏｇｓ ａｎｄ ｃａｔｓ［Ｊ］． Ｔｈｅ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄ， ２００３， １５２： ２３４－２３７．

［５］ ＭＣＣＯＹ Ｃ， ＢＲＯＣＥ Ａ Ｂ， ＤＲＹＤＥＮ Ｍ Ｗ， ｅｔ ａｌ． Ｆｌｅａ ｂｌｏｏｄ ｆｅｅｄｉｎｇ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｉｎ ｃａｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｏｒａｌ ｎｉｔｅｎｐｙｒａｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｏｐｉｃａｌ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｓ ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ， ｆｉｐｒｏｎｉｌ ａｎｄ ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ［Ｊ］． Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ， ２００８， １５６： ２９３－３０１．

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［７］ ＷＡＮＧ Ｔ， ＹＡＮＧ Ｇ Ｙ， ＹＡＮ Ｈ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ， ｉｖｅｒｍｅｃｔｉｎ ａｎｄ ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｎｅｍａｔｏｄｅｓ ｉｎ ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅｓ， Ｃｈｉｎａ［Ｊ］． Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，２００８，１５３（５）：１２１－１２５．

［8］ 《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》课题研究组.化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则［Z］． 2005，5-7．

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