针刺与埋线干预对抑郁大鼠中枢单胺类神经递质的影响

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文章编号：0255-2930(2007)06-0435-03

中图分类号：R246.6　文献标识码：A

[摘要]　目的：探讨针刺与埋线治疗抑郁症的疗效差异和作用机制。方法：将32只成年雌雄各半的SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组和埋线组，每组8只。后3组采用孤养和长期不可预见的中等强度刺激应激造成抑郁大鼠模型，同时针刺组和埋线组开始治疗，周期21天。采用高效液相色谱系统――电化学检测器检测大鼠脑内去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)的含量。结果：与正常组相比，模型大鼠下丘脑和海马的NE、5-HT和DA均有明显下降(P

[主题词] 埋线；抑郁症/针灸疗法；单胺氧化酶/代谢；神经递质类/代谢

研究表明，抑郁症是脑内单胺类递质，如去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)等功能不足所致。NE和5-HT等神经递质的功能紊乱与多种抑郁症状有关，如NE减少可引起注意力和记忆力减退，社会活动减少，觉醒状态改变；5-HT减少可导致冲动控制能力减弱，减退，食欲下降，易激惹。针灸介入抑郁症的治疗已有近20年历史，取得了明显的疗效，临床上治疗方法也越来越多。但是，对于不同方法对中枢单胺类递质的影响，尚缺少深入的研究。本实验旨在观察慢性应激抑郁模型大鼠中枢单胺类神经递质的变化，以及针刺和埋线两种不同方法干预对它们的影响，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1　材料

(1)　实验动物

成年SD大鼠，体重220～290g，雌雄各半(由广州中医药大学动物中心提供，动物合格证号：2005A008，SPF级)。

(2)　试剂与仪器 试剂：NE、DA、5-HT为美国Sigma公司产品；乙腈购自德国Merk公司，其余试剂均为市售分析纯。仪器：DIONEX Summit高效液相色谱仪(美国DIONEX公司)，Chromeleon色谱工作站(美国DI-ONEX公司)，HPl049A电化学检测器(美国安捷伦公司)，RC5C低温高速离心机(美国杜邦公司)，PHS-2C精密酸度仪(上海理达仪器厂)。

1.2　方法

(1)动物分组

首先用Open-field法进行行为学评分，选择得分相近的32只大鼠，适应性喂养7d后，随机分为正常组、模型组、针刺组和埋线组，每组8只。正常组每笼饲养4只，雌雄分开。

(2)模型制备

按照文献方法进行抑郁症模型大鼠的复制。模型组、针刺组和埋线组每笼饲养1只，接受21天各种不同的应激刺激，包括断水24h；断食24h；夹尾1min；10℃冰水游泳5min；摇晃每秒1次，5min；昼夜颠倒；电击足底，电压50mV，每5 s刺激1次，间歇5s，共刺激10次。每天随机选择一种刺激，每种刺激平均使用3次，共21天。

(3)治疗方法

在给予大鼠各种不可预知的应激刺激同时，除模型组外，各治疗组开始治疗。针刺组于每日应激刺激前1h进行治疗，根据《实验针灸学》大鼠穴位定位方法取穴，选取“百会”“心俞”“肝俞”。穴位常规消毒，选用华佗牌0.25mm×25mm针灸针进行针刺。“百会”向尾部斜刺，进针深度约为2mm，“心俞”“肝俞”(左右两侧穴位交替使用，每次取单侧)向尾部呈45°角斜刺5mm，每穴均匀捻转刺激30s，留针15min。每日1次，共21次。

埋线组于应激刺激前1h进行治疗，取穴同针刺组，穴位常规消毒，用改良简易注线法，取一次性医用7号注射针头作套管，直径0.30 mm、长50mm不锈钢毫针(剪去针尖)作针芯。将“0”号医用羊肠线剪成0.5cm线段若干，浸泡在75％的酒精内备用。将针芯退出少许，羊肠线放人针头内，垂直穴位快速进针后稍做提插，推动针芯将肠线留于穴内。第1天、第7天和第14天进行埋线，共3次。

(4)取材方法

治疗21d后，将全部大鼠均快速断头,剥离全脑，于冰浴下迅速分离出海马和下丘脑，称重后置Eppendorf管中，保存于-70℃的冰箱中待测。

(5)测定方法

将各组海马、下丘脑分别置于玻璃匀浆器中，加入2％三氯乙酸溶液(预冷至4℃)500μL，温和匀浆，匀浆液用吸管小心转移入离心管中，用200μL磷酸二氢钠(Nail2P04)溶液[0.33tool/L，pH6，内含0.5mmol/L乙二胺四乙酸二钠(NazEDTA)]荡洗匀浆器，洗液并入离心管，混旋均匀，低温高速离心(4℃，15000r/main)，取上清液50μL进行神经递质测定，以μg/g计算。

(6)色谱条件

色谱柱为DevelosiC30-UG-5(150mm×4.6mm，5μm，日本Nomura Chemical Co，Ltd)，流动相：磷酸二氢钾溶液(25mmol/L，内含Na2E-DTA 0.5 mmol/L，用磷酸调pH3.4)，乙腈=98：2(体积比)，用前经0.45μm滤膜真空抽滤，流速1.5mL/main；玻璃碳工作电极，Ag/AgCl参比电极，检测电位0.6 V；柱温30℃，自动进样器温度10℃。

(7)统计处理

数据用SPSS 11.0统计软件进行分析，以平均值±标准差表示，组间差异用方差分析，以P

2　结果与分析

慢性抑郁模型大鼠下丘脑NE、DA和5-HT含量较正常组显著下降(P

慢性抑郁模型大鼠海马NE、DA和5-HT含量较正常组显著下降(P

(P

3　讨论

抑郁症是一种以持续性心境低落为主要特征的常见情感障碍疾病，甚则致死致残。由于现代社会生活节奏的加快以及强烈的竞争压力，抑郁症已经成为危害人类健康的常见病，为全球性的主要精神问题，倍受关注。其发病原因涉及生物、心理和社会等多方面因素。综合孤养与中等强度的不可预见的应激刺激诱导的抑郁大鼠模型模拟了抑郁症病人的部分发病原因与临床症状，被广泛用于机制研究。

在抑郁症的发病机理研究中，脑内单胺类递质，如NE、5-HT和DA等功能不足，早已得到普遍公认。5-HT在中枢涉及调节情感、睡眠、警觉、记忆、食欲、等多种功能方面。近些年来，5-HT再摄取抑制剂被广泛用于抑郁症的药物治疗，取得了一定的效果，进一步证实了这一理论。NE也与情绪活动密切相关，参与学习和记忆、睡眠和觉醒、焦虑和痛觉的感知。NE缺乏，以上功能均有不同程度的紊乱。利血平降压的同时引发抑郁症的原因就是由于利血平使突触前膜囊泡中的NE耗竭所致。DA也参与精神活动的调节，其中中脑边缘皮质的DA系统在情绪和精神活动中发挥重要作用。DA使中脑和前脑皮质及边缘系统建立联系，参与精神活动包括情感、认知、思维、理解和推理等的调节，也是奖赏效应的主要中枢神经基础。DA功能的失活将导致缺失，从而失去动机和兴趣，而这正是抑郁症的主要症状。

本研究发现，慢性抑郁模型大鼠下丘脑和海马的5-HT、DA和NE均较正常大鼠显著降低，支持抑郁症中枢5-HT、DA和NE水平降低的观点。电针疗法的介入对脑内神经递质影响的研究较多。韩毳等报道，抑郁模型大鼠大脑前额皮层NE、5-HT、3，4一二羟苯乙酸(DOPAC)，海马5-HT与5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)，下丘脑DA含量较正常组显著下降，电针“百会”“三阴交”穴治疗可升高脑内不同部位的单胺类神经递质水平。金光亮等探讨了电针可升高慢性应激抑郁模型大鼠脑内皮层较正常组低的5-HT/5-HIAA、NE/5-HIAA的比值。但报道均为电针的作用，未见有报道仅用针刺的方法或埋线的方法介入抑郁症的治疗对中枢单胺类神经递质的作用。本研究发现，针刺与埋线法均可不同程度地使抑郁模型大鼠下丘脑与海马的5-HT、DA和NE有所升高，尤其在升高下丘脑中的5-HT和DA与海马的DA方面，埋线组更具优势。由此可见，不同的针灸方法介入，其作用机制是相似的，均是通过调节中枢单胺类神经递质而发挥作用。

埋线法是针灸学的一个分支，它通过针具与羊肠线在穴内产生的生物物理作用和生物化学变化，将刺激信息和能量通过经络传人脑内。埋线法的整个操作过程实际包括了穴位封闭、刺血、割治、针刺等疗法，同时也包含了埋线效应和后效应，是一种融多种疗法、多重效应于一体的复合疗法，它克服了针灸作用时间短、疗效不巩固、易复发及就诊次数多等缺点。本实验观察到，针刺组大鼠由于需要每天刺激，在刺激前，大鼠表现出恐惧、躲避，说明其将针刺视为一种伤害，从而又一种应激模式无形中产生。而埋线701次，刺激次数少，避免了更多的刺激因素的产生，并能持续发挥作用。此方法介入抑郁症的治疗还需进一步深入研究。