15—羟前列腺素脱氢酶在大肠腺瘤和腺癌组织中的表达*

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇15—羟前列腺素脱氢酶在大肠腺瘤和腺癌组织中的表达*范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

【摘要】 目的：探讨15-羟前列腺素脱氢酶（15-PGDH）在腺瘤和腺癌组织中的表达和意义。方法：选取肠镜检查和手术活检组织标本118例，其中正常大肠黏膜30例，大肠腺瘤43例，大肠腺癌组织45例。用Real Time PCR检测15-PGDH mRNA的表达，免疫组织化Elivision法检测组织中15-PGDH的蛋白表达。结果：15-PGDH在大肠腺癌组织中的mRNA的表达、阳性表达率及光密度值均低于大肠腺瘤及正常黏膜组（P

【关键词】 15-羟前列腺素脱氢酶； 大肠癌； 大肠腺瘤

现已研究发现COX-2高表达在大肠癌变过程中起着重要作用[1-2]。细胞内的花生四烯酸可经环氧合酶途径生成各种前列腺素（prostaglandin synthesis，PGs），环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）是合成PGE2的关键酶，而15-羟基前列腺素脱氢酶（15-Hydroxyprostaglandin dehydrogenase，15-PGDH）是降解PGE2的关键酶。近年来发现，15-PGDH表达的减少甚至缺失或者酶活性的下降均与大肠癌、胃癌等恶性肿瘤的发生发展关系密切。NSAIDs预防结直肠肿瘤的具体机制尚不清楚，目前认为与NSAIDs抑制COX-2，并能增加15-PGDH的表达和活性有关[3-4]。

1 材料与方法

1.1 标本选择 选取电子结肠镜活检、高频电切除及手术切除组织标本共118例，其中正常大肠黏膜30例，腺瘤43例，大肠腺癌45例；其中男68例，女50例，中位年龄54岁。入选标准：（1）有明确的病理资料，诊断清楚；（2）病史中无长期服用非甾体类消炎药史，近两周未服用非甾体类药物；（3）未接受过放疗、化疗等抗肿瘤治疗。

1.2 标本处理 新鲜标本用生理盐水冲洗干净，放入-80 ℃冰箱保存；PCR标本按体积比（1：10）加Trizol裂解液后置于-80 ℃冰箱保存。余标本用10%中尔马林固定，普通石蜡包埋，切成4～5 μm厚的连续切片备用。

1.3 实时定量PCR（Real Time PCR）分析 以Trizol试剂提取组织总RNA后纯化，TU1810紫外分光光度仪（北京谱析仪器厂）分光光度计测定OD值，观察RNA浓度和纯度，取4 μLRNA用逆转录试剂盒（宝生物工程有限公司）逆转录成cDNA。应用Primer 5.0软件设计COX-2、15-PGDH的引物序列：15-PGDH（91 bp）：上游引物5′AAGCATGGCATAGTTGGATTCACA3′，下游引物5′AGCCTGGACAAA TGGCATTCA 3′；内参β-actin（186 bp）：上游引物5′TGGCA CCCAGCACAATGAA 3′，下游引物5′CTAAGT CATAGTCCGCCTAGAAGCA 3′。cDNA经95 ℃

8 min预变性后开始循环，95 ℃ 15 s，退火温度（COX-2 65.2 ℃，15-PGDH 57.3 ℃，β-actin 60.2 ℃）1 min，40个循环后融解曲线分析。扩增产物在2%琼脂糖凝胶上电泳分离后在SYNGENE凝胶成像分析仪（英国Syngene公司），以进一步印证其性状。

1.4 15-PGDH免疫组化Elivision法检测 组织切片脱蜡、水化，EDTA缓冲液（pH 9.0）中微波修复，微沸后断电，间歇10 min后重复一次，自然冷却后置于3% H2O2孵育20 min，PBS漂洗。37 ℃ BSA封闭20 min，甩去多余液体。滴加COX-2单克隆抗体（福州迈新公司）和1：50稀释的兔抗人15-PGDH多克隆抗体（美国Cayman公司），37 ℃2 min，PBS漂洗。按Elivision二抗试剂盒说明（福州迈新公司）：加增强剂37 ℃20 min，PBS漂洗；加二抗37 ℃30 min，PBS漂洗。DAB室温显色，苏木素复染、透明封片。每张切片于400×高倍显微镜下随机选5个视野观察记数。采用双人观察，根据着色的深浅度和阳性细胞的数量分别记分：不着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕色为3分；阳性细胞数

1.5 统计学处理 实验数据采用SPSS 13.0 for windows 统计学软件包处理，计量资料数据用（x±s）表示，采用单向因素方差分析和q检验；计数资料秩和检验。设P

2 结果

2.1 15-PGDH mRNA的表达 Real Time PCR检测的结果显示COX-2 mRNA的表达大肠腺癌组高于大肠腺瘤及正常大肠黏膜组（P

2.2 免疫组化分析结果 15-PGDH在大肠腺癌和大肠腺瘤组织阳性表达率均低于正常大肠黏膜（P

注：图A～C分别为15-PGDH在正常黏膜和绒毛腺瘤中的阳性表达及癌组织中的阴性表达

3 讨论

COX-2和15-PGDH在同一细胞中表达，并相互拮抗，由IL-1β或TNFa介导COX-2的高表达会导致15-PGDH表达的减少，同样15-PGDH高表达会导致COX-2表达的减少。Yan等[3]检测13例胃癌患者癌组织及正常胃黏膜15-PGDH的表达情况，有10例肿瘤组织15-PGDH表达缺失，但正常胃黏膜均有表达；检测21例健康志愿者正常结肠组织中15-PGDH表达情况，发现均为高表达，而38例结肠癌患者肿瘤组织中15-PGDH表达微乎其微，至少比正常结肠组织中减17倍，且表达缺失在早期和进展期结肠癌中一致；提示15-PGDH表达的缺失可能是胃肠道肿瘤的特发事件[4-6]。国内研究也提示15-PGDH在胃癌组织中表达减少甚至缺失，在胃癌前状态中表达亦减少[7-8]。本实验结果显示，15-PGDH在大肠癌中的阳性表达率仅为35.6%，大肠癌和大肠腺瘤组低于正常组（P

15-PGDH抑制胃肠道及其他肿瘤的作用机制目前尚不十分清楚，目前认为可能与15-PGDH基因可能是TGF-β信号通路抑制肿瘤的靶位点，能被TGF-β基因直接调控和活化，介导TGF-β信号通路抑制肿瘤的发生[3]；诱导肿瘤细胞凋亡；表皮生成因子（EGF）能抑制大肠癌组织中15-PGDH的表达，EGFR信号传导与15-PGDH启动基因抑制因子（E-box）有关，可能由此抑制了15-PGDH的表达等[9]。目前对15-PGDH的研究方兴未艾，随着对其作用机制的深入研究，相信将会出现越来越多的分子靶向药物，为肿瘤的综合防治提供新的手段。

参考文献

[1] Greenhough A，Smartt H J，Moore A E，et al.The COX-2/PGE2 pathway：key roles in the hallmarks of cancer and adaptation to the tumour microenvironment [J].Carcinogenesis，2009，30（3）：377-386.

[2] Chan A T，Ogino S，Fuchs C S，et al.Aspirin Use and Survival After Diagnosis of Colorectal Cancer[J].JAMA，2009，302（6）：649-658.

[3] Yan M，Rerko R M，Platzer P，et al.15-Hydroxyprostaglandin dehydrogenase，a COX-2 oncogene antagonist，is a TGF-β-induced suppressor of human gastrointestinal cancers[J].Proc Natl Arad Sci USA，2004，101（50）：17468-17473.

[4] Moore A E，Greenhough A，Roberts H R，et al.HGF/Met signalling promotes PGE2 biogenesis via regulation of COX-2 and 15-PGDH expression in colorectal cancer cells[J].Carcinogenesis，2009，30（10）：1796-1804.

[5] Tai H H，Ensor C M，Tong M，et al.Prostaglandin catabolizing enzymes[J].Prostaglandins Other Lipid Mediat，2002，8（68）：483-493.

[6] Backlund M G，Mann J R，Holla V R，et al.15-Hydroxyprostaglandin dehydrogenase is down-regulated in colorectal cancer[J].J Biol Chem，2005，280（5）：3217-3223.

[7] Thiel A，Ganesan A，Mrena J，et al.15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase is down-regulated in gastric cancer[J].ClinCancer Res，2009，15（14）：4572-4580.

[8]楼俪泓，靖大道，李继坤，等.胃癌组织中15-羟基前列腺素脱氢酶的表达研究[J].中华医学杂志，2006，86（10）：709-711.

[9] Mann J R，Backlund M G，Buchanan F G，et al.Repression of prostaglandin dehydrogenase by epidermal growth factor and snail increases prostaglandin E2 and promotes cancer progression[J].Cancer Res，2006，66（13）：6649-6656.

（收稿日期：2013-09-09） （本文编辑：欧丽）