联苯苄唑乳膏体内外抗真菌活性及体内抗炎作用研究

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【中图分类号】R97【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2011)08－0353－01

【摘要】摘要：文章主要通过采用真菌体外药敏试验以及小鼠二甲苯耳廓肿胀两种实验方法来探讨研究联苯苄唑乳膏在体内以及体外抗真菌活性作用和对体内所产生的抗炎作用

【关键词】抗真菌；真菌活性；微生物敏感性试验

为了能够客观科学评价抑真菌和杀真菌两种药物对于治疗真菌感染的疗效，我们则选用1％联苯苄唑乳膏用于体外药敏试验以及和小鼠二甲苯耳廓肿胀实验方法来观察研究联苯苄唑乳膏在体内和体外抗真菌活性作用以及对体内产生的抗炎作用，为选用合适的临床外用抗真菌药物提出重要的实验依据。

一 联苯苄唑乳膏体外抗真菌活性试验研究

(一)所需试验材料：

1 实验菌株：标准菌株，临床性菌株分离自临床病患者皮肤破损处并且经过纯化鉴定。试验菌株种类：12株红色毛癣菌类，3株须毛癣菌类类，2株犬小孢子菌类，2株絮状表皮癣菌类，10株白念珠菌类，5株滑念珠菌类。合起来是6种菌类共计34株。

2 实验药品：选择1％联苯苄唑乳膏，该药物由联苯苄唑原料药由拜耳医药保健有限公司所提供，药品批号为108765，其药品纯度高达99．99％。另外选用l％特比萘芬乳膏，其药品批号不详，药品纯度为99．99％。

3 试验培养基：RPMI1640培养基不含有抗生素。

(二)试验方法： 采用微量液体稀释的方法，此方法参照美国医学临床实验标准化研究所(CLSI)CLSI一27A：试验方法并且加以改进。

1 配制试验药基：需要精确地称取1％联苯苄唑乳膏以及1％特比萘芬乳膏分别各为0.4g，称取联苯苄唑原料药以及特比萘芬原料药分别各为4mg，依次分别加入5毫升DMSO，然后采用隔水加热到其完全溶解，再称取0.5毫升的药液加入4.5毫升的灭菌蒸馏水搅拌均匀，接着再按1：9的比例稀将其释成8mg/L的T作为原料液，最后再依次做倍比稀释成为不同的浓度，将其包被到96孔的培养板当中，每一个孔含有0.1 mL药液，第11孑L中加入0.1毫升的l％DMSO，第12孑L中加入0.1毫升的灭菌蒸馏水，然后每个孔另外加入相同倍量的试验基础培养基，再充分混其均匀之后就得到药物培养基。从1到第10孔当中的药物浓度依次分别为4,2,1,0.6，0.24,0.125,0.062,0.030.015,0.009mg/L。第11孔中是溶媒对照(1％DMSO)，第12孔中是基础培养的摹对照［1］。

2 受试验菌株活化：全部的皮肤癣菌在实验之前经过转种SDA培养基，温度控制在26度培养到7到10天然后使用；而念珠菌也接种在于SDA培养基，然后于温度30度培养48小时之后再使用。

3 菌株悬液的制备：挑选适量的念珠菌或者把皮肤癣菌的菌块放入组织研磨器当中研磨使其均匀，然后再置于0.9％氯酸钠的溶液中，最后使用血细胞计数板把菌液的浓度调为0.1*106～1.0*106cfu/mL。

4 试验菌株的接种与培养：每一个孔当中分别接种已经配制过的受试菌株菌悬液。念珠菌于温度为30度培养24到28个小时，皮肤癣菌放置于温度为26度则培养7天再判定结果。

5 最小MIC测定：把基础培养基与溶媒对照的菌株生长作为参照。其中联苯苄唑按80％抑制作为MIC终点，而特比萘芬则按100％抑制作为MIC终点。但凡10株以上的同一种菌株，测算出MIC50与MIC90。

6 最小MFC测定：在MIC测定得知结果之后，把96孔板置于水平离心机上，2000r/min在离心15分钟之后，再用吸管由高浓度至低浓度依次吸出各孑L中的上清液，接着再加人新鲜的没有抗生素的基础培养液，其中把无菌生长的最低药物浓度作为MFC的终点，并且测算出MFC50与 MFC90。

二 联苯苄唑乳膏的抗炎作用

(一)试验材料：

1 实验动物：重量大于22.0g的雄性ICR小鼠。

2 致炎剂：分析纯和二甲苯。

3 实验药品：同前面。

(二)试验方法：

1 实验分组：一共60只小鼠将其随机无规律分为3组，分别是实验药物组、阳性对照组以及对照药物组，每一组分为20只小鼠。

2 小鼠二甲苯耳廓肿胀法：用乙醚把ICR小鼠麻醉之后，将右耳作为实验区。对阳性对照组的小鼠涂置二甲苯致炎，而实验药物组与对照药物组都与二甲苯采用1：1比例混匀之后，再用棉签蘸取，分别均匀地涂于右耳的正反两面，左耳为同体空白对照而不涂药物。

3 观察试验记录方法：分别在2小时和4小时两时间段内，每一组各都杀死10只小鼠，小鼠死后再用棉签先搽拭其右耳正反两面残留的药物，然后沿小鼠耳廓基线把两只耳朵剪下来，接着再用半径为4.5毫米的角膜环钻在相同部位打上网片，最后用天平称重量，计算出左耳片和右耳片重量之差，把它作为肿胀度指标。

4 数据处理：同上面。

三 联苯苄唑乳膏体外抗真菌活性的结果

体外抗4属34株真菌，联苯苄唑乳膏MIC的范围为0.017～0.5 mg/L，其MFC的范围为0.062～2.0mg/L；原料药联苯苄唑MIC的范围0.009～0.5 mg/L，其MFC的范围为0.031～2.0mg/L。特比萘芬乳膏组MIC的范围为0.009～0.5mg/L，MFC的范围为0.017～2.0mg/L；其原料药特比萘芬M1C的范围为0.009～0.5mg/L，其MFC的范围为0017～2.0mg/L。

四 联苯苄唑乳膏抗炎作用的结果

联苯苄唑乳膏与特比萘芬乳膏两种药物组之对于间小鼠耳同体对比肿胀率的差异没有统计学的意义(2小时和4小时，P值都均大于0.05)，但是这两药物组和阳性对照组之间的差异相对来讲具有统计学的意义(P值小于0.01)。

结论

本文通过采用真菌体外药敏试验以及小鼠二甲苯耳廓肿胀两种实验方法对于联苯苄唑抗真菌活性体内的临床研究则表明了，联苯苄唑乳膏在医学临床改善症状、皮肤破损痊愈的时间、真菌转阴的时间、还有治愈率以及远期治愈率等等诸多方面，和特比萘芬药物相比较，存在的差异都没有统计学的意义；可是对于抗真菌活性的体外临床研究则表明，这两种药物对于皮肤念珠菌和皮肤癣菌的MFC和MIC值的差异也没有统计学意义。另外对于体外抗真菌活性的相似性也可以大概理解为这两种药物在小鼠的实验中所取得疗效的相似性。因此这和以前一些文献声称联苯苄唑乳膏除了对真菌生长居于抑制的作用相同之外，对于杀真菌活性结果还是比价一致的。科学医学临床研究表明，联苯苄唑药物不但拥有显著的抗真菌活性，而且还具有很强的抗炎的作用。我们在研究体内抗炎的作用中，采用了试验常用的二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀方法，研究结果显示,联苯苄唑与特比萘芬和对照组相比较，都可抑制ICR小鼠的耳廓肿胀度，可是两种药物间的抗炎作用差异没有显著性，这两种药物均都能够对皮肤真菌感染所导致的炎症加速对其消退等作用，抗炎减轻患病者的瘙痒症状。联苯苄唑对于皮肤癣菌、非皮肤癣菌、酵母菌等菌类的双相真菌以及丝状真菌都具有一定程度的抗菌活性［2］，特别是对皮肤癣菌的抗菌活性很高。目前,我们选择皮肤癣菌感染疗效比较好、也具有抗菌活性的l％特比萘芬药物作为试验对比研究，其结果表明：两种药物每日使用1次外用，连续9天，都达到100％的疗效。联苯苄唑和特比萘芬两种药物在抗念珠菌活性、抗皮肤癣菌活性以及抗炎等作用几乎相同，从而为医生选择体外使用抗真菌药物时提供了重要的参考依据。

参阅文献

［1］ 沈永年. 中华皮肤科杂志［M］.Chinese Journal Of Dermatology,2008,41,8.

［2］ Lackner TE,Clissold SP Bifonazole. A review of its antimicrobial activity and therapeutic use insuperficial mycoses 2009,(02).

作者单位：225321 江苏泰州高港人民医院