大桑菊饮合剂质量标准的研究

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【摘要】 目的 建立大桑菊饮合剂的质量标准。方法 采用薄层色谱法对方中桑叶、薄荷、连翘和浙贝母药材进行了色谱鉴别;采用高效液相法测定黄芩中黄芩苷的含量。结果 薄层鉴别的色谱斑点清晰,阴性对照无干扰,黄芩苷的含量测定平均回收率为97.71%,RSD(n=6)为0.69%,在104-1040ng范围内呈线性关系相关系数。结论 研究的方法可有效地控制大桑菊饮合剂的质量。

【关键词】 大桑菊饮合剂;质量标准;黄芩苷;高效液相色谱法

Study on the Quality Specification of Dasangjuyinheji mixtue

QIU Zhi-chun,LUO Wen-hui,LI Yang-xue.

Second Chinese Medicine Hospital of Guangdong Province,Guangzhou 510095,China

【Abstract】 Objective To establish the quality specification of Dasangjuyinheji mixture. Methods The TLC technology was used to identify Folium mori, Herba menthae, Fructus forsythiae and Bulbus fritillariae thunbergii. The contet of Baicalin Ⅰ in Dasangjuyinheji mixture was determined by HPLC. Results TLC spots obtained were fairly clear and the blank test showed no interference. The calibration curves were linear in the range of 104-1040ng for Baicalin Ⅰ. The average recovery (n=6) was 97.71% and RSD was 0.69%. Conclusion This standard is effective for the quality control of Dasangjuyinheji mixture.

【Key words】 Dasangjuyinheji mixture;Quality standard; Baicalin Ⅰ; HPLC

作者单位:510095广东省第二中医院(丘志春);广东省中医研究所(罗文汇 李养学)

大桑菊饮合剂是由桑叶、、薄荷、连翘、浙贝母和黄芩等药材组成;具有疏风解表,清热宣肺,化痰止咳等功效。用于风热感冒、咳嗽、肺炎喘嗽等初起见咳嗽、流涕、痰黄、咽痛、发热等症疗效确切。

为了更好控制大桑菊饮合剂的质量,本研究采用薄层色谱法对制剂中桑叶、薄荷、连翘和浙贝母进行了定性鉴别;采用高效液相色谱法对制剂的黄芩苷进行了含量测定,方法简便,重复性好,可作为该制剂的质量控制标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器 CAMAG Automatic TLC Sampler 4 全自动薄层点样仪(瑞士);CAMAG Reprostar 薄层成像系统(瑞士);硅胶G薄层板(浙江);Agilent 1200高效液相色谱仪(美国);Mettler-Toledo XS205DU电子分析天平(瑞士);Agilent TC C18(4.6×250 mm,5μm)色谱柱;KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山)。

1.2 试药

桑叶对照药材(批号:121123-200603)、薄荷脑对照品(批号:110728-200506)、连翘对照药材(批号:120908-200613)、浙贝母对照药材(批号:120972-200404)、黄芩苷对照品(批号:110715-200815),购于中国药品生物制品检定所。大桑菊饮合剂由广东省第二中医院制剂室提供。甲醇为进口色谱纯,水为双蒸水,其他试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 桑叶的薄层色谱鉴别[1] 取本品15 ml,蒸干至稠膏状,加适量硅藻土分散,再加乙醇30 ml,超声处理20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取桑叶对照药材2 g,加乙醇30 ml,同法制成对照药材溶液。再按处方比例,取缺桑叶的其他各味药,按制备工艺加工制成阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述溶液各5 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,使成条带状,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶1)的上层溶液为展开剂,置展开剂预饱和10 min的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱在与药材对照色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点(见图1)。

2.2 薄荷的薄层色谱鉴别[2]

取本品20 ml,加石油醚(60~90℃)10 ml萃取,分取石油醚液,作为供试品溶液。另取薄荷脑对照品,加石油醚(60~90℃)制成每1 ml含2 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述溶液各15 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯 (4:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以香草醛硫酸试液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点(见图2)。

2.3 连翘的薄层色谱鉴别[3] 取本品20 ml,蒸干至稠膏状,加适量硅藻土分散,再加甲醇30 ml加热回流1 h,滤过,滤液,滤液蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取连翘对照药材1 g,加甲醇30 ml,同法制成对照药材溶液。再按处方比例,取缺连翘的其他各味药,按制备工艺加工制成阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述溶液各4 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-丙酮-乙酸乙酯-甲酸-水(4∶5∶6∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇试液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点(见图3)。

2.4 浙贝母的薄层色谱鉴别[4] 取本品20 ml,加浓氨试液5 ml与三氯甲烷20 ml,萃取2次,分取三氯甲烷液,蒸干,残渣加三氯甲烷1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取浙贝母对照药材2 g,加浓氨试液5 ml与三氯甲烷20 ml,超声处理15 min,滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷1 ml使溶解,作为对照药材溶液。再按处方比例,取缺浙贝母的其他各味药,按制备工艺加工制成阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述溶液各5 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(17:2:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点(见图4)。

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3 含量测定[5]

3.1 色谱条件

色谱柱:Agilent TC C18(4.6×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(47:53);流速:1.0 ml/min;柱温:35℃;检测波长:280nm。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品6.50 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1 ml中含芍药苷0.26 mg)。

3.3 供试品溶液的制备

取本品20 ml,蒸至稠膏状,加硅藻土分散,再水浴蒸干,加70%乙醇40 ml,加热加流3 h,放冷,滤过,滤液置100 ml量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取1 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

3.4 供试品阴性对照溶液的制备 处方中除去黄芩按制剂工艺制备,制得供试品阴性对照品,按3.3项下供试品溶液制备的方法制得供试品阴性对照溶液。

3.5 线性范围的考察 精密吸取对照品溶液(黄芩苷0.26 mg/ml)1、2、5、8、10 ml于25 ml量瓶中,加甲醇至刻度,得浓度分别为10.4μg/ml、20.8 μg/ml、52.0 μg/ml、83.2 μg/ml、104.0μg/ml的芍药苷对照品溶液,分别精密吸取上述各浓度的对照品溶液各10 μl进行色谱测定,按上述色谱条件测定峰面积,并以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归,得标准曲线。

Y=1892.32681X+432.53204,r=0.99994。

表明黄芩苷在104-1040ng范围内呈良好的线性关系。

3.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液(黄芩苷52.0 μg/ml)10 μl重复进样5次,测得峰面积积分值。结果RSD为1.26%。

3.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 μl,按上述色谱条件测定5次,每次间隔2 h,结果表明8 h内稳定,RSD为1.43%。

3.8 重现性试验 按拟定的含量测定方法,对同一供试品(批号:20090701)制备供试品溶液,测得峰面积并计算含量。结果RSD为1.15%。

3.9 回收率试验 取已知含量的供试品(批号:20090701),分别精密加入一定量的黄芩苷对照品,按供试品制备与测定方法,按上述色谱条件,平行做6组。结果见表1。

表1

黄芩苷回收率测定结果

序号取样量(ml)样品中黄芩苷的量(mg)加入黄芩苷的量(mg)测出黄芩苷的量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)

1100.5360.40.92296.5097.710.69

2100.4980.40.89198.25

3100.4710.50.95997.60

4100.4550.50.94798.40

5100.5300.61.11697.67

6100.4750.61.06297.83

3.10 样品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,按上述色谱条件测定。对照品和供试品的色谱图见图5。结果见表2。

表2

供试品含量测定结果(n=2)

批号黄芩苷含量(mg/ml)平均含量(mg/ml)

200907010.910.93

200907020.87

200907031.01

根据上述测定结果,考虑到药材的来源,以及制剂生产、贮藏等素,故暂定本品每ml大桑菊饮合剂含黄芩苷(C21H18O11)计,不得少于0.7 mg。

4 讨论

对于中药复方制剂的鉴别,应根据其特点,寻找简便、快速,并具有较强专属性的方法,才能起到有效控制质量的目的。本文在建立了桑叶、薄荷、连翘和浙贝母的TLC鉴别及主药中黄芩苷的含量测定方法。从而更好地控制该药品的质量,保证临床疗效。

参 考 文 献

[1] 孙莲,胡尔西丹,常军民,等.薄层-紫外分光光度法测定桑叶中的绿原酸.时珍国医国药,2006,17(7):1199-1201.

[2] 梁威,刘元,文志云,等.TLC法定性鉴别清火片中3味中药.中国民族民间医药,2009,(15):10-11.

[3] 王进.银连感冒合剂质量标准改进.中国中医药现代远程教育,2009,7(10):209-210.

[4] 陈凌亚,周晓芳,翁琳,等.薄层色谱法鉴别中肺合剂的主要成分.医药导报,2005,24(10):945-946.

[5] 国家药典委员会.中国药典.北京:化学工业出版社,2005:211.

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