注射用法莫替丁细菌内毒素检查法研究

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[摘要] 目的：建立注射用法莫替丁细菌内毒素检测法。方法：参照《中国药典》2010版细菌内毒素检查法进行干扰实验。结果：注射用法莫替丁稀释至0.06 mg/ml后对细菌内毒素检查无干扰作用。结论：细菌内毒素检查法用于注射用法莫替丁热源检查可靠适用。

[关键词] 注射用法莫替丁；细菌内毒素；干扰实验

[中图分类号] R927.12 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）12（b）-031-03

Study on bacterial endotoxins test for Famotidine for injection

CHEN Qi

Department of Pharmacology, Guangdong Institute for Drug Control, Guangdong Province, Guangzhou 510180, China

[Abstract] Objective: To establish a detecting method for the bacterial endotoxin in the Famotidine for injection. Methods: The interference test was conducted with reference to Chinese Pharmacopia (2010 Edition) on BET. Results: There was no interfere effect in the detection for bacterial endotoxin in the Famotidine for injection which was diluted to 0.06 mg/ml. Conclusion: It is reliable and applied for bacterial endotoxin test on pyrogen in Famotidine for injection.

[Key words] Famotidine for injection; Bacterial endotoxin; Interference test

热原检查实质上就是内毒素的限量检查。鲎试剂法对内毒素检查具有专一、灵敏、快速简便的特点，但目前药典规定的品种尚有限，因此，扩大应用成了广大药检人员普遍重视的问题[1]。本文根据《中国药典》2010年版二部附录XI E“细菌内毒素检查法”[2]中所述的药品细菌内毒素的检查方法及其干扰试验的基本原理，对注射用法莫替丁的细菌内毒素检查可否限值提高进行了探索性研究，文中提供了分别来自同一厂家的3批供试品在两个厂家鲎试剂下的干扰试验数据，证实了本品种细菌内毒素检查限值提高的可行性。同时，运用相同的方法检查了不同厂家的17批供试品，检查结果均合格。现将研究过程报道如下：

1 仪器与试药

1.1 实验材料及药品

细菌内毒素检查用鲎试剂（购于广东湛江安度斯生物有限公司，批号：1008202，灵敏度：0.125 EU/ml，规格：0.1 ml/支），细菌内毒素检查用水（BET水，购于广东湛江安度斯生物有限公司，批号：1003080，规格：5.0 ml/支）；细菌内毒素检查用鲎试剂（购于广东湛江博康海洋生物有限公司，批号：1009030，灵敏度：0.125 EU/ml，规格：0.1 ml/支）。细菌内毒素标准品（购自中国药品生物制品检定所，批号：150601-200968，效价：150 EU/支）。注射用法莫替丁（哈药集团三精加滨药业有限公司生产，批号：20100111、20100303、20100312）。

1.2 仪器

旋涡振荡器（IKA-MS-1）；恒温水浴箱（德国Julabo 19A）。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度（λ）的复核

上述两个批号鲎试剂经由细菌内毒素标准品标定，结果均在0.5λb~2.0λb（λb为标准灵敏度）之间，符合相关规定，可用于实验。

2.2 样品细菌内毒素限值（L）的确定

参考《中国药典》2010年版二部附录XI E“细菌内毒素检查法”[2]，参考注射用法莫替丁的临床实际应用情况，本品成人临床日常用量为每天40 mg/60 kg，根据公式L＝K/M，其中K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg・h）表示，注射剂K＝5 EU/（kg・h）；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kg・h）、mg/（kg・h）或U/（kg・h）表示，人均体重按60 kg计算，注射时间不足1 h，按1 h计算。将本品细菌内毒素限值确定为L=5 EU/（kg・h）/（40 mg/60 kg）＝7.5 EU/mg。

2.3 最小有效稀释浓度（C）的确定

限值L考虑为7.5 EU/mg时，根据公式C＝λ/L，当选用鲎试剂灵敏度为λ＝0.125 EU/ml时，供试品溶液中法莫替丁的最小有效稀释浓度为C=λ/L＝0.017 mg/ml。

2.4 供试品干扰预实验

选取灵敏度为0.125 EU/ml的细菌内毒素检查鲎试剂，对1个厂家的供试品进行稀释检验，稀释浓度分别为0.060、0.030、0.020、0.008、0.004 mg/ml，具体过程如下：取本品20 mg（1瓶）加细菌内毒素检查用水溶解并稀释至2 ml（浓度为10 mg/ml），取稀释液0.1ml加细菌内毒素检查用水至2.0 ml（浓度为0.5 mg/ml），取稀释液0.3 ml加细菌内毒素检查用水至2.5 ml（浓度为0.060 mg/ml），取稀释液0.5 ml加细菌内毒素检查用水至1.0 ml（浓度为0.030 mg/ml），取浓度为0.06 mg/ml的稀释液0.2 ml加细菌内毒素检查用水至0.6 ml（浓度为0.020 mg/ml），取浓度为0.06 mg/ml的稀释液0.4 ml加细菌内毒素检查用水至3.0 ml（浓度为0.008 mg/ml），取浓度为0.008 mg/ml的稀释液0.5 ml加细菌内毒素检查用水至1.0 ml（浓度为0.004 mg/ml）。

试验中另设阳性对照（PC）和阴性对照（NC），每个浓度平行做2管，结果见表1。

表1 供试品（批号：20100312）干扰预试验结果

注：“+”代表实验结果呈阳性，“-”代表实验结果呈阴性

由表1可见供试品在各个稀释浓度对鲎试剂检查均无干扰作用。

2.5 供试品干扰试验

取同一厂家的3批注射用法莫替丁，用细菌内毒素检查用水进行稀释，终浓度为0.017 mg/ml，选用两个厂家灵敏度为0.125 EU/ml的鲎试剂进行干扰试验，结果见表2。

由表2可以看出，Es值均落在0.5λ~2.0λ之间（λ为所选用鲎试剂的灵敏度，取值0.125 EU/ml），且相应的Et/Es比值均在0.5~2.0之间；这一结果说明注射用法莫替丁在稀释浓度为0.017 mg/ml或更小时对细菌内毒素检查无干扰作用。

2.6 供试品细菌内毒素检查

本品共17批，按《中国药典》2010年版二部附录XI E“细菌内毒素检查法”[2]，分别进行细菌内毒素检查，结果见表3。

由表3可见供试品注射用法莫替丁在稀释至浓度为0.017 mg/ml及以下时对细菌内毒素检查无干扰作用。本研究中将注射用法莫替丁的细菌内毒素检查限值定为：每毫克法莫替丁中含内毒素的量应小于7.5 EU。对17批样品分别按拟订标准进行检验，其细菌内毒素检查结果均符合规定。

3 讨论

注射剂安全评价中是否可用细菌内毒素检查实验来检测其热原质，应视该注射剂对细菌内毒素实验是否存在干扰及这种干扰能否排除的情况而定[3-7]。由试验结果可见，注射用法莫替丁在稀释至浓度为0.017 mg/ml时对上述两个厂家的鲎试剂和细菌内毒素标准品之间的反应均无干扰作用。

一般情况下，供试品对细菌内毒素检查的干扰作用程度与供试品浓度呈正性相关[4]。由本研究结果可见注射用法莫替丁在稀释浓度为0.060 mg/ml时对细菌内毒素检查无干扰作用。若将内毒素限值拟定为7.5 EU/mg，选用灵敏度为0.125 EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查，则供试品的最小有效稀释浓度为0.017 mg/ml。由于供试品对细菌内毒素检查的干扰作用程度与供试品浓度呈正性相关[8-10]，本供试品在进行细菌内毒素检查时可稀释的浓度范围较大，进而证实了本研究中所用方法的可靠性与可行性。

本研究针对国家药典委员会《关于注射剂标准起草与复核工作的要求》对注射用法莫替丁的现行标准进行了提高工作，进一步减小了本品种细菌内毒素检查的限值。注射用法莫替丁原质量标准载于国家食品药品监督管理局国家药品标准[WS1-（X-040）-2004Z]，该标准中规定注射用法莫替丁的细菌内毒素限值为每毫克中含内毒素的量应小于15 EU。本研究根据注射用法莫替丁最大临床日用量，确定其细菌内毒素限值为每毫克法莫替丁中含内毒素的量应小于7.5 EU，并对哈药集团三精加滨药业有限公司生产的3批注射用法莫替丁进行了细菌内毒素检查干扰试验，结合对样品的检验结果，拟定了注射用法莫替丁的细菌内毒素检查标准。对内毒素限值的进一步提高，有利于更好地控制药品质量，为医院用药安全提供更高的保障。

[参考文献]

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（收稿日期：2011-07-29）