人参皂甙Rb1对人表皮黑素细胞黑素生长的影响

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【摘要】目的分析探讨人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本，以第2-5代的细胞作为研究对象进行实验，采用MTT法对人黑素细胞增殖情况进行测定，而采用分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性，针对人参皂甙rb1对人表皮黑素细胞黑素生长的影响进行分析评价。结果将25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L人参皂苷Rbl分别加入体外培养的人黑素细胞后，并且在作用72h后，发现三组黑素细胞存活率P>0.05，差异不明显，不具有统计学意义，而人表皮黑素细胞黑素的含量呈现浓度依赖性增加，经测定三组的含量分别为110.4%±5.7%、145.6%±3.6%、209.6%±10.3%。结论人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制。

【关键词】人参皂甙Rb1；人表皮黑素细胞；黑素生长；影响；作用机制

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.07.762文章编号：1004-7484（2013）-07-4134-01

人参具有较强的药理活性，其发挥作用的活性物质主要为人参皂甙，其中，以Rbl的药理作用最为突出，人参皂甙Rb1是中药人参的主要有效成分，具有活性调节作用、安神、调和气血，曾被用于治疗白癜风等色素脱失性疾病；近年来，有关报道指出人参皂甙Rb1具有抗氧化、搞衰老、抗凋亡，促进神经纤维的形成，而黑素细胞与神经细胞同源，但是对于人参皂甙Rb1对人表皮黑素细胞黑素生长的作用机制却未曾报道。为此，本文取自小儿包皮环切术标本，以第2-5代的细胞作为研究对象进行实验，采用MTT法对人黑素细胞增殖情况进行测定，针对人参皂甙Rb1对人表皮黑素细胞黑素生长的影响进行分析评价，具体的结果报告如下：

1资料与方法

1.1一般资料小儿包皮环切术标本，取第2-5代的细胞作为实验研究对象。

1.2方法与指标人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本，以第2-5代的细胞作为研究对象进行实验，采用MTT法（四甲基偶氮唑兰比色法）对人黑素细胞增殖情况进行测定，而采用分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性，针对人参皂甙Rb1对人表皮黑素细胞黑素生长的影响进行分析评价。另外，对于黑素含量的测定则可以采用氢氧化钠裂解法，小眼畸形相关转录因子（MITF）的表达、黑素细胞酪氨酸酶以及CAMP应答元件结合蛋白（CREB）的磷酸化的具体情况和含量则可以采取免疫蛋白印记法进行测定，根据其所测定的结果，并设定一组溶剂对照组（不加入人参皂甙Rb1），全面分析其评价结果。

1.2.1黑素细胞活力测定用0.25%的胰酶消化处于对数生长期的黑素细胞，用M254黑素细胞培养基进行终止并将黑素细胞稀释，加入人参皂甙Rb1，继续培养4小时后，置于振荡器上低速震荡，对其细胞活性进行测定。

1.2.2黑素细胞黑素含量测定采用同样方法将黑素细胞稀释，再用酶标仪测定标本吸光度值，实验黑素含量用实验组减去对照组值即可。

1.3统计学分析采取SPSS13.0软件实施统计分析，其计量资料采用t检验，P

2结果

将25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L人参皂苷Rbl分别加入体外培养的人黑素细胞后，并且在作用72h后，发现三组黑素细胞存活率P>0.05，差异不明显，不具有统计学意义，而人表皮黑素细胞黑素的含量呈现浓度依赖性增加，经测定三组的含量分别为110.4%±5.7%、145.6%±3.6%、209.6%±10.3%。根据本组结果研究显示：三组酪氨酸酶活性都相应的增加，具体的活性分别为112.4%±5.7%、156.6%±3.6%、221.6%±10.3%。

另外，在加入100μmol/L人参皂苷Rb1的溶液中，72h后该组的黑素细胞酪氨酸酶、MITF值显著提高，分别为219.2%±11.7%、309.6%±14.6%，同时，蛋白表达也显著提高，与溶剂对照组相比，P值均

3讨论

人参具有较强的药理活性，其发挥作用的活性物质主要为人参皂甙，其中，以Rbl的药理作用最为突出。近年来，人们经过大量的研究发现，人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成具有一定的影响作用，为此，本文通过实验来对Rbl的药理以及对黑素形成的影响和相关的作用机制进行了简单分析，通过实验研究发现：人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性，并且在人参皂苷Rb1促进黑素生成机制形成的过程中，CREB、PKA、MITF、酪氨酸酶信号通路都参与了了黑素的生成。如本组研究中，与溶剂对照组相比，CREB磷酸化现象明显提升，具体为311.5%±12.6%，P

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