丙型肝炎病毒基因分型与肝病程度关系的研究

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【中图分类号】R373.2 【文献标识码】A【文章编号】1005-2720(2010)10 - 07 - 02

【摘要】目的 探索丙型肝炎病毒(HCV)基因型在辽宁省大连地区的分布及流行的优势型,并探讨HCV基因型与肝病程度的关系。方法 采用型特异性引物逆转录巢式PCR法和限制性片段长度多态性分析(RFLP)法对85例抗-HCV阳性的慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化、丙肝相关肝癌病人进行 HCV的基因分型。结果 85份抗HCV阳性标本中,HCV RNA检出率为61例,占71.76%(61/85)。在85份抗HCV阳性血清中,仅检出了61例1b和2a型感染者,其中1b型32例,占52%(32/61);2a型29例,占48%(29/61)。结论 大连地区基因型为1b型和2a型两种型,符合中国丙肝病毒基因分型,大连地区1b型和2a型基本相等。未发现1b和2a基因型因肝病严重程度而有所不同。

【关键词】肝炎病毒;丙型;基因分型;型特异性引物

Study on Hepatitis C Virus Genotype in Dalian

Xie YingXie Chen

(Department of Infectious Disease of The Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University,

Dalian liaoning116027)

【Abstract】Objective In order to find out the distribution and prevalence of HCV genotype in Dalian, Liaoning province, and make a research on the connection of HCV genotype and the degree of liver disease. Methods To process with HCV gene classification to the 85 cases which have anti-HCV positive chronic hepatitis C, hepatitis C cirrhosis, hepatitis C cancer respectively by means of RT-nested-PCR with primere deduced from 5 ′non-coding regionand restriction fragment length polymorphism. Results In the 85 anti-HCV positive cases, detection ratio of HCV RNA are 61cases, which account for 71.76% (61/85). In those 85 anti-HCV positive blood serum, 61cases are detected with 1b and 2a, 32 cases with 1b which account for 52% (32/61), 29 cases with 2a which account for 48% (29/61). Conclusion There are two HCV genotypes in Dalian, namely, 1b and 2a, which matches with HCV genotype in China. In Dalian, 1b and 2a are equivalent to each other. It is not discovered that there are any differences between 1b and 2a because of the severity degree of hepatitis.

【Key words】Hepatitis C virus;genotyping;Type specific primer

研究旨在了解丙型肝炎病毒(HCV)基因型在辽宁省大连地区的分布及流行的优势型,并探讨HCV基因型与肝病程度的关系。

1 对象与方法

1.1 对象选取2009年1月初至2009年12月底期间于大连医科大学附属二院门诊病例以及住院病例,抗-HCV阳性的慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化、丙肝相关肝癌病人共85例。病变程度的判断依据2000年中华医学会传染病与寄生虫学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》中关于肝脏炎症和纤维化分级、分期的诊断标准。

1.2 方法所有标本先进行HCV RNA的检测,检测阳性的进行基因分型,用逆转录巢式PCR扩增(RTnested-PCR)方法扩增HCV 5’NTR 区基因片段,第二轮PCR产物直接进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,限制性内切酶: HaeⅢ;酶切产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。用X2检验对基因型与肝病程度关系进行统计学分析。

2 结 果

(1)85份血清标本,24份HCV RNA阴性,61份标本HCV RNA为阳性,对这61份HCV RNA阳性标本进行基因分型,结果如表1所示:1b型32例(52%)和2a型29例(48%),未发现混合型感染。见表1。

(2)HCV基因分型结果 按病情轻重程度分类,我们发现肝炎后硬化的患者组,9例中有6例(66.7%)为1b型,只有3例(23.3 %)为2a型;丙肝相关肝癌的患者中有3例(75%)为1b型,只有1例(25%)为2a 型。相比而言,48例慢性肝炎中1b型32例(47.9%),2a型29例(52.1%)

(3)HCV基因型与肝病程度的关系对比了HCV基因型在慢性丙型肝炎、丙肝肝硬化、丙肝相关肝癌患者中的分布关系。32例基因1b型HCV感染者中有慢性肝炎23例,肝硬化6例,肝癌3例;29例基因2a型HCV感染者中有慢性肝炎25例,肝硬化3例,肝癌1例。经X2检验,HCV感染的不同肝病程度患者的基因型分布无显著性差异(P>0.05)。

3 讨 论

HCV基因组容易发生变异,可产生于全基因序列的各个区域。由于HCV基因的变异性较大,客观上存在很多的型别,给临床的诊断带来一定的困难。Simmonds根据HCV的基因组的序列分型法,将HCV分为6种基因型和31种亚型。在此分型方法的基础上,目前已报道的基因型有11个,基因亚型超过70种。本研究根据Simmonds基因分型原理,采用型特异性引物逆转录巢式PCR法和限制性片段长度多态性分析(RFLP)法对61例标本进行 HCV的基因分型。85份血清进行了HCV RNA的检测,其HCV RNA 检出率平均71.76%,与国内外文献报道(70%～80%)相符。病毒基因型地理分布差异的流行病学特征,不仅有助于了解病毒的起源和传播途径,而且有助于抗病毒的治疗及疫苗的研制工作。我国HCV主要有1b和2a型,以1b型为主。南方城市1b型占75%～90%以上,北方城市2a型占46%～70%[1]。但最近的一些研究显示,我国南、北方的城市差别并不很大;而少数民族地区型别的分布差异较大,并发现了较多的其他基因型,如1a、3b型。我们检测了大连地区61例HCV RNA阳性患者,HCV分型结果显示,1b型33例,占54%;2a型28例,占46%,与北京、天津的分布不一致[2,3]。大连地区HCV基因型别对今后大连地区HCV 诊断试剂和疫苗的研制具有重要意义。由于所收集标本的数量有限,而且采用型特异性引物逆转录巢式PCR法和限制性片段长度多态性分析(RFLP)法所包含的型别相对较少,因此不能排除有其它基因型存在的可能。我们研究的61例病例按诊断标准进行临床诊断,其中有慢性丙型肝炎48例,肝炎肝硬化9例,肝炎相关肝癌4例。我们对比了HCV基因型在慢性丙型肝炎、肝炎肝硬化、肝炎相关肝癌患者中的分布关系。32例基因1b型HCV感染者中有慢性肝炎23例,肝硬化6例,肝癌3例;29例基因2a型HCV感染者中有慢性肝炎25例,肝硬化3例,肝癌1例。经X2检验,HCV感染的不同肝病程度患者的基因型分布无差异(P>0.05)。此结果与唐小平等[4]和Yamada等[5]的报道一致。但是否由于本次研究样本量较少所致,还是两者本身不存在统计学相关性尚需做进一步研究和探讨。

表1大连地区61例HCV感染基因分型结果

组别 例数 HCV 基因型构成比(%)

1b 2a

慢性肝炎4823(47.9%) 25(52.1%)

肝炎后肝硬化 9 6(66.7%)3(23.3%)

丙肝相关肝癌 4 3(75%)1(25%)

合计6132(52%) 29(48%)

【参考文献】

[1] 苏英豪.丙型肝炎病毒基因分型及其意义:近几年的研究进展.国外医学微生物学分册,1998,26(1):8-11.

[2] 杨东亮,郝连杰. 我国丙型肝炎病毒基因变异及分型研究现状. 中华传染病杂志,1996,14(1):41-44.

[3] 宋宏彬,姬新颖,唐小敏,等. 用套式PCR分析我国不同地区的HCV基因.胃肠病学和肝病学杂志,1997,6(4):311-314.

[4] 唐小平,吴婉芬,袁小珍.丙型肝炎病毒基因分型及其与疾病程度、感染途径和干扰素疗效的关系. 中华微生物和免疫学杂志,1997,117:92-95.

[5] Yamada M,Kakumu S,Yoshioka K,et al.Hepatitis C virus genotypes are no tresponsible for development of serious disease.Dig Dis Sci,1994,39:234.